The raw starch hydrolysis by amylase prepared from alkaline-tolerant Bacillus sp. were investigated. Degree of hydrolysis(%) of 5%(w/v) raw rice, corn and potato starch by this enzyme were about 40, 25 and 20%, respectively. The hydrolysis action on raw starch by change of blue value was similar to the action pattern of exo ${\beta}$-amylase. The hydrolysis products of rice starch were mainly glucose and maltose. Oligosaccarides were also detected. From the above results, this enzyme was considered as exo type ${\alpha}$-amylase. This enzyme activity on the raw starch and the gelatinized starch were 28.40 and 86.60 IU/mg protein, respectively, and the ratio of raw starch-digesting activity to gelatinized starch-digesting activity (raw starch digestivity) was about 32%. The Km values for the raw and the gelatinized starch were 4.22 and 3.0mg/mL, respectively, and the VmaX values were 0.20 and 0.31mg/mL/min, respectively.
Aspergillus niger was selected as a strain producing the potent raw starch hydorlyzing enzyme. These experiments were conducted to investigate the conditions of the glucoa- mylase production, the purification of the enzyme, some characteristics of the purified enzyme and hydrolysis rate on various raw starches such as com, rice, potato, glutinous rice, sweet potato, wheat and barley. The optimum cultural temperature and time for the enzyme production on wheat bran medium were $30^{\circ}C$ and 96hrs, respectively. The respective addition of yeast extract and nutrient broth on wheat bran medium increased slightly the enzyme production. The enzyme was purified by ammonium sulfate fractionation and DEAE-cellulose column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 30.7u/mg-protein and the yield of enzyme activity was 25.8%. The purified enzyme showed a single band on polyacrylamide disc gel electrophoresis and its molecular weight was estimated to be 56,000 by SDS-polyacrylamide disc gel electrophoresis. The isoelectric point for the purified enzyme was pH3.7. The optimum temperature and pH were $65^{\circ}C$ and pH 4.0, respectively. The purified enzyme was stable in the pH range of pH 3.0-9.5 and below $45^{\circ}C$, and its thermal stability was slightly increased by the addition of $Ca^{2+}$. The purified enzyme was activated by $Co^{2+},\;Sr^{2+},\;Mn^{2+},\;Fe^{2+},\;Cu^{2+}$. Raw rice starch, raw corn starch, raw glutinous rice starch, raw sweet potato starch, raw wheat starch and raw barley starch showed more than 90% hydrolysis rate in 48hrs incubation. Even raw potato starch, most difficult to be hydrolyzed, showed 80% hydrolysis rate. The purified enzyme was identified as glucoamylase.
The purification system of glucoamylase (glucan 1,4-${\alpha}$-glucosidase, EC 3. 2. 1. 3), some characteristics of the purified enzyme and hydrolysis rate of various raw starch were investigated through several experiments. The enzyme was produced on a solid, uncooked wheat bran medium of Aspergillus oryzae NR 3-6 isolated from traditional Korean Nuruk. The enzyme was homogeneously purified 6.8-fold with an overall yield of 28.3% by the criteria of disc- and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight was estimated to be 48 kDa by SDS-PAGE. The optimum temperature and pH were 55$^{\circ}C$ and 4.0, respectively. The enzyme was stable at a pH range of 3.0∼10.0 and below 45$^{\circ}C$. Enzyme activity was inhibited about 27% by 1mM Hg2+. The hydrolysis rate of raw wheat starch was shown to be 17.5-fold faster than the hydrolysis rate of soluble starch. The purified enzyme was identified as glucoamylase because the product of soluble starch by the purified enzyme was mainly glucose by thin layer chromatography.
This study was conducted to improve preparations of oriental drugs by enzyme. Total sugar, reduced sugar, hydrolysis rate, and amylose content were compared in Korean yam starch and some oriental drugs treated different enzyme levels and treatment times. The results were as follows. Reduced sugar and hydrolysis rate by enzyme of yam starch were significantly increased according to increments of enzyme level and treatment time. Amylose content in yam starch was significantly decreased to increment of enzyme level and treatment time. Total sugar content in some oriental drugs of Sangmaeksan, Yukmigiwhang, Yukshinsan, Manbungsarungsan, and Sanyaksogalum were 46.08, 44.87, 11.15, 10.67, and $6.l6mg/m{\ell}$, respectively. There was no significant difference in hydrolysis rate by enzyme of Sangmaeksan, Yukmigiwhang, Manbungsarungsan. However, hydrolysis rates of Yukshinsan and Sanyaksogalum were significantly highest in 0.2% enzyme and 0.5% enzyme groups, respectively.
자석으로 분리가 가능한 ${\alpha}-Amylase$가 코팅된 나노고분자를 제조하여 녹말의 분해공정에 활용하였다. 본 연구에서 개발된 고정화 효소의 안정성은 크게 증가하여 상온에서 200rpm으로 교반하면서 보관한 경우 30일 동안에 92.7%의 활성도를 유지하였다 . 고정화 효소를 자석을 이용하여 재사용한 경우 10 회 동안 사용했을 경우 95.2%의 활성도 회수율을 보 여 효소의 재사용 가능성을 확인시켜 주었다 . 고정화 효소 0.5mg을 사용하여 녹말 분해 공정 에 활용하였을 때 2 ml의 40 g/l 녹말 용액을 40분만에 완전히 분해 시켰다, 이러한 고정화 효소를 사용하여 연속 효소반응기를 개발하여 녹말 분해공정에 활용한 결과 체류시간을 1시간으로 하였을 때 녹말 30 g/l를 76% 분해시켜 산업적으로 활용 가능성을 보여 주었다.
The biodegradability of vinyl acetate acrylate resin and com starch blend was studied by determination of the reduced sugars produced after enzymatic hydrolysis. The starch hydrolysis reaction by $\alpha-amylase$ was achieved within 5 minutes. Optimal ranges of temperature and pH for the starch hydrolysis by $\alpha-amylase$ were around $80^{\circ}C$ and 6.5-7.2, respectively. The biodegradability of the starch-filled acrylate films increased as the content of starch increased. The biodegradation of starch in the starch-filled acrylate film by $\alpha-amylase$ was about 48.6% of that of pure starch. This value of biodegradable starch-filled acrylate film gave a good result with enzymatic shortcut test. The surface morphologies of the starch-filled acrylate film after enzymatic hydrolysis were investigated by scanning electron microscopy (SEM).
분쇄마찰매체 함유 효소반응계에서 순수분리된 glucoamylase 또는 $\alpha$-amylase에 의한 옥수수 생전분의 효소당화 mechanism을 규명코자, 생성된 당조성, SEM을 이용한 전분입자의 구조, 효소흡착량 그리고 amylose 함량 등의 변화를 관찰하였다. 생성당 조성은 분쇄마찰매체 효소반응계에서도 큰 변화없이 glucoamylase의 경우 반응초기부터 glucose가 주로 생성되었고, $\alpha$-amylase의 경우에는 maltopentaose (G5)를 포함한 oligosaccharide(G2-G8)가 주고 생성되었고 약간의 glucose가 포함되었으며, 당조성은 경시적으로 크게 변하지 않았다. SEM으로 전분입자의 구조를 관찰한 결과, 효소를 첨가하지 않을 경우 분쇄마찰매체의 기계적 충격은 전분입자의 구조변화에 큰 영향을 미치지는 못하였고 다만 전분입자를 균열시켰다.
The debranching enzyme of Nostoc punctiforme (NPDE) is a novel enzyme that catalyzes the hydrolysis of $\alpha$-1,6-glycosidic linkages in starch, followed by the sequential hydrolysis of $\alpha$-1,4-glycosidic linkages. The debranching activity of NPDE is highly specific for branched chains with a degree of polymerization (DP)>8. Moreover, the rate of hydrolysis of $\alpha$-1,4-linkages by NPDE is greatly enhanced for maltooligosaccharides (MOs) with a DP>8. An analysis of reaction mixtures containing various starches revealed the accumulation of maltooctaose (G8) with glucose and maltose. Based on the novel enzymatic properties of NPDE, an MO mixture containing more than 60% G8 with yield of 18 g G8 for 100 g starch was prepared by the reaction of NPDE with soluble starch, followed by ethanol precipitation and gel permeation chromatography (GPC). The yield of the G8-rich mixture was significantly improved by the addition of isoamylase. In summary, a 4-step process for the production of a G8-rich mixture was developed involving the enzymatic hydrolysis of starch by NPDE.
Even though the notice No. 2010-11 of the Ministry of Food and Drug Safety Administration that has been applied to analyze the content of the water soluble residue eluted from multi-layer paperboard was abolished in 2011, its application for the analysis on evaporation residue is still valid. There are very high possibilities that the noticed existing method gives the misleading result on the evaporation residue due to the water soluble starch eluted from the multi-layer paperboard. The quantitative analysis on water-soluble residue with starch content correction has been carried in the study using UV/Vis spectroscopy and HPLC. The UV/Vis spectroscopy absorbance analysis showed the large amount of the oxidized starch obtained from the aqueous residue eluted out of the multi-layer paperboard after the iodine, ${\alpha}$-amylase reaction, and starch hydrolysis. The residual content decreased by the correction through the enzyme hydrolysis.
Structural modification of corn starch by gamma irradiation was evaluated for under dry conditions at varied intensities from 0 to 40 kGy. Under scanning electron microscopy, the granule shape of corn starch was not significantly affected by the irradiation up to 40 kGy. In addition, X-ray diffraction and melting patterns of the irradiated starches were similar to those of the native starch, indicating that crystalline regions in the starch granules were not changed by irradiation. However, the pattern of gel permeation column chromatography showed a significant increase in partial hydrolysis of gamma irradiated starch samples. The degree of polymerization and the paste viscosity of irradiated starch samples dose-dependently decreased significantly with irradiation, and increased solubility and clarity were observed in the irradiated starch solution. In addition, the degree of retrogradation decreased as irradiation dose increased. Irradiation of corn starch has advantages over the ordinary acid or the enzyme hydrolysis modification methods. It does not affect the granular shape and crystalline phase of starch during hydrolysis, and the process can be carried out in dry state.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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