• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제16권2호
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• pp.121-128
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• 2012

최근 여러 포유류 종에서 Kisspeptin이 그 수용체인 GPR54와 함께 GnRH 분비를 자극하여 성 성숙과 최종배란에 영향을 미친다고 보고되고 있다. 이러한 보고들은 KiSS-GPR54 system이 번식과 밀접한 연관이 있음을 제시하고 있지만, 어류에 관한 연구는 미비한 실정이다. 이 연구는 어류에서의 KiSS-GPR54 system의 생리적 기능과 번식내분비적 기능을 탐색하기 위해 홍바리 Epinephelus fasciatus 뇌에서 KiSS1, KiSS2, GPR54 mRNA의 부분 염기서열을 클로닝 하였으며, KiSS1, KiSS2, GPR54 mRNA의 각 조직별 발현을 RT-PCR을 이용하여 확인하였다. 성 성숙과 KiSS-GPR54 system과의 연관성을 확인하기 위해 생식소 발달 상태(성숙과 미성숙)에 따른 발현을 qRT-PCR을 이용하여 분석하였다. KiSS1, KiSS2, GPR54의 부분 염기서열은 각각 232 bp, 304 bp, 613 bp 였으며, 조직별 발현을 조사한 결과 공통적으로 뇌에서 발현되었다. 생식소발달에 따른 발현 양상은 KiSS1, KiSS2 mRNA의 경우 성숙 상태에서가 미성숙 상태에 비해 유의적으로 높게 발현되었다. 하지만 GPR54 mRNA의 경우 미성숙 상태에서 더 높게 발현되었다. 이러한 결과들로 미루어 보아, KiSS-GPR54 system은 홍바리에 있어 번식과 밀접한 관련이 있을 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제19권3호
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• pp.305-310
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• 2009

플라스미드 pGKV21에는 229-nt single-strand DNA initiation (ssi) signal이 존재한다. Asymmetric PCR 기법으로 합성된 229-nt ssDNA 단편을 이용하여 실제로 RNA polymerase에 의한 priming ability와 protein interaction을 확인하였다. in vitro primer RNA 합성 실험 결과, 229-nt ssDNA 단편은 filamentous M13 phage의 주형 DNA에서와 비슷한 효율로 시발체 RNA를 합성하였으며, 이 반응은 strand-specific하게 이루어졌다. DNase I footprinting과 gel retardation 실험 결과, RNA polymerase와 SSB 단백질은 229-nt ssDNA 단편에 stable interaction을 하며, 시발체 RNA를 합성하였다. 또한, in vivo 조건 하에서 RNA polymerase의 저해제인 rifampicin을 처리하여 세포내에 ssDNA 중간체가 집적되는 정도를 비교하여 본 결과, 플라스미드 pGKV21은 rifampicin-sensitive RNA polymerase가 상보가닥 합성에 관여 함을 보여 주었다.

• 한국수산과학회지
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• 제50권3호
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• pp.302-310
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• 2017

Interferon regulatory factor 8 (IRF8) is essential for the development of B and T cells, as well as for the activity of dendritic cells and macrophages. We performed molecular characterization of IRF8 from rock fish, Sebastes schlegelii (Ss), and investigated the spatial and temporal profile of mRNA expression after challenge with lipopolysaccharide (LPS), polyinosinic:polycytidylic acid (poly I:C), or Streptococcus iniae. The full-length cDNA sequence of SsIRF8 was 1,657 bp, containing an ORF of 1,266 bp. The gene had a predicted molecular mass of 47.7 kDa and an isoelectric point of 5.99. The amino acid sequence coded by this gene showed the highest degree of identity (90.8%) and similarity (96.2%) with IRF8 from Oplegnathus fasciatus. The SsIRF8 mRNA was expressed ubiquitously, at varying levels, with the highest level of expression observed in the spleen. To confirm the role of SsIRF8 in mediating the immune response, we measured SsIRF8 mRNA expression in the splenic tissue at different time points after injection with LPS, poly I:C, or S. iniae. The qRT-PCR results showed that SsIRF8 mRNA expression in the poly I:C-injected group was highly upregulated 6 hr after exposure (P<0.05). Expression of SsIRF8 mRNA in the S. iniae-injected group peaked at 24 hr. These results suggest that SsIRF8 might be important in regulating the strength of the rockfish immune response to immunostimulatory agents.

• Journal of Microbiology
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• 제34권1호
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• pp.61-67
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• 1996

Double-stranded RNA (dsRNA) viruses and single-stranded RNA(ssRNA) viruses were detected in a strain of Pleurotus mushroom cultivated in a farm. Those fungal virsus were purified in the pH 6.0 or pH 7.2 using CsCI or Cs$_{2}$SO$_{4}$ buoyant density centrifugation. Each viral particles were not completely separated at any trials. However, mushroom bacili-form virus contains a single major nucleic acid with 0.7 Kb ssRNA, which might code for 20 Kd viral capsid protein. The dsRNAs are encapsidatred into spherical-form viruses, whereas ssRNA viral genomes are encapsidated into two different sizes of bacili-form particles. A healthy-looking mushroom also contained some spherical-form viruses with dsRNAs. Laboratory strains of Pleurotus ostreatus and a cultivated strain of P. sajor-caju did not show any viral particles. Mushrooms with specific disease symptoms. however, contained at least four different sizes of spherical-form viruses. Thus, we concluded that a bacilli-form virus case a severe disease symptoms of adnormal on mushroom development.

• BMB Reports
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• 제32권1호
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• pp.82-85
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• 1999

The movement protein of cucumber mosaic virus (CMV) is required for cell-to-cell movement of viral RNA. The movement of viral RNA occurs through the plant intercellular connection, the plasmodesmata. The viral movement protein was known to be multi-functional. In this work, a series of deletion mutants of CMV movement protein gene were created to identify the functional domains. The mutated movement proteins were produced as inclusion body in E. coli, and purified and renatured. A polyclonal antibody was raised against the CMV-Kor strain (Korean isolate) movement protein expressed in E. coli. The ability of the truncated proteins to bind to ssRNA was assayed by UV cross-linking and gel retardation analyses. The results indicate that the domain between amino acids 118 and 160 of CMV movement protein is essential for ssRNA binding.

• The Plant Pathology Journal
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• 제39권1호
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• pp.28-38
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• 2023

Plant viruses are responsible for worldwide production losses of numerous economically important crops. The most common plant RNA viruses are positivesense single-stranded RNA viruses [(+)ss RNA viruses]. These viruses have small genomes that encode a limited number of proteins. The viruses depend on their host's machinery for the replication of their RNA genome, assembly, movement, and attraction to the vectors for dispersal. Recently researchers have reported that chloroplast proteins are crucial for replicating (+)ss plant RNA viruses. Some chloroplast proteins, including translation initiation factor [eIF(iso)4E] and 75 DEAD-box RNA helicase RH8, help viruses fulfill their infection cycle in plants. In contrast, other chloroplast proteins such as PAP2.1, PSaC, and ATPsyn-α play active roles in plant defense against viruses. This is also consistent with the idea that reactive oxygen species, salicylic acid, jasmonic acid, and abscisic acid are produced in chloroplast. However, knowledge of molecular mechanisms and functions underlying these chloroplast host factors during the virus infection is still scarce and remains largely unknown. Our review briefly summarizes the latest knowledge regarding the possible role of chloroplast in plant virus replication, emphasizing chloroplast-related proteins. We have highlighted current advances regarding chloroplast-related proteins' role in replicating plant (+)ss RNA viruses.

• 한국식품영양과학회지
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• 제45권1호
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• pp.137-142
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• 2016

본 연구에서는 국내산 천일염 두 종류와 정제염이 HepG2 인체 간암 세포에서의 세포 성장 억제 효과, apoptosis 관련 유전자 Bcl-2, Bax, p53 및 p21의 mRNA 발현과 단백질 발현을 확인하였다. 소금 시료들은 HepG2 인체 간암세포에 0.5% 및 1% 농도로 처리하였을 때 세포 성장을 억제시켰으며 T염전의 천일염(SS-T)과 Y염전의 천일염(SS-Y)은 정제염(PS)에 비해 암세포 성장을 유의적으로 억제하였다(P<0.05). 또한 HepG2 세포에 1% 농도로 소금 시료를 처리하였을 때 대조군에 비해 apoptosis를 억제하는 유전자들을 mRNA 및 단백질 수준에서 조절하여 Bcl-2는 낮게 나타났고, Bax, p53, p21은 높게 발현되었다. SS-T와 SS-Y는 PS에 비하여 Ca, Mg, S, K 함량이 많았으며, 천일염 중에서도 SS-T가 SS-Y보다 많이 함유되어 있었다. 전반적으로 무기질이 많이 함유된 천일염이 정제염보다 항암 효과가 높았으며 이는 소금의 Na 및 그 외 다른 무기질들이 항암 관련 유전자들을 조절한 것으로 보인다. 이상의 결과를 통해 국내산 천일염과 정제염은 HepG2 세포에서 apoptosis와 cell cycle 관련 유전자 조절을 통해 항암 효과를 나타냄을 확인하였으며 그중에서도 천일염의 효과가 더 높게 나타나 그 원인 물질 및 항암 기작에 대한 후속 연구가 필요하다.

• 대한환경공학회지
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• 제32권11호
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• pp.1063-1068
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• 2010

본 연구는 유효한 분변오염의 지표 미생물로서 제안되고 있는 E.coli와, 병원성 바이러스에 대한 지표 미생물로 추천되는 $Q{\ss}$ 파지의 UV 및 UV/$H_2O_2$에 대한 내성을 비교하였다. 이 결과에 의거, 병원성 바이러스 관리를 위한 E.coli 규제의 유효성을 고찰하였다. 또한, 병원성 바이러스에 대한 대체 지표 미생물로써, $Q{\ss}$ 파지, T4 및 lambda 파지의 실제 하수 2차 처리 수중에서의 UV 불활성화를 비교하였다. 실험결과, $Q{\ss}$ 파지와 E.coli는 UV에 대해 거의 동등한 내성을 보였으나, UV/$H_2O_2$ 공정에 대해서는 E.coli보다 $Q{\ss}$ 파지가 더 높은 내성을 보였다. 이로부터, $Q{\ss}$ 파지가 모든 병원성 바이러스의 UV 또는 UV/$H_2O_2$에 대한 내성을 대표한다고 할 수는 없을지라도, 지표 미생물로써 E.coli의 불활성화 효과에만 의존하는 것은, 소독공정에 따라서는 바이러스류에 대해 충분한 소독효과를 얻지 못할 수도 있음을 알 수 있었다. 한편, T4 및 lambda 등 DNA 파지와 불활성화를 비교하였을 경우, $Q{\ss}$ 파지가 UV에 대해 더 낮은 내성을 보였다. 따라서, 불활성화에 대한 지표 바이러스로써 $Q{\ss}$ 파지의 이용은 낮은 UV 조사량의 도입에 의해 결과적으로 불충분한 소독효과를 초래할 수도 있을 것 같다. 이 결과는, 병원성 바이러스류에 대해 보다 충분한 불활성화를 달성하기 위해서는 RNA 파지인 $Q{\ss}$보다 T4 및 lambda 등 DNA 파지가 지표 바이러스로써 보다 유효할 수 있음을 보여준다.

• BMB Reports
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• 제43권11호
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• pp.732-737
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• 2010

RNA interference is a post-transcriptional silencing mechanism triggered by the bioavailability and/or exogenous introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into cells. Here we describe a novel method for the synthesis of siRNA in a single vessel. The method employs in vitro transcription and a single-stranded DNA (ssDNA) template and design, which incorporates upon self-annealing, two promoters, two templates, and three loop regions. Using this method of synthesis we generated efficacious siRNAs designed to silence both exogenous and endogenous genes in mammalian cells. Due to its unique design the single-stranded template is easily amenable to adaptation for attachment to surface platforms for synthesis of siRNAs. A siRNA synthesis platform was generated using a 3' end-biotinylated ssDNA template tethered to a streptavidin coated surface that generates stable siRNAs under multiple cycles of production. Together these data demonstrate a unique and robust method for scalable siRNA synthesis with potential application in RNAi-based array systems.

• 생명과학회지
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• 제8권2호
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• pp.119-125
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• 1998

dsRNA결합인자인 RBF단백질을 정제하여 이의 단일 또는 이중선의 RNA 또는 DNA 와의 결합도를 측정하였다ㅓ. RBF단백질은 이들과 각각 반응시켜 그 결합도는 SDS-PAGE에 의하여 비교관찰하였다. RBF단백질은 dsRNA와은 강한 결합력을 나타낸 반면 기타의 핵산구조에 대해서는 이러한 결과를 나타내지 못하였다. 인산화 실험의 결과, RBF단백질은 poly(I) : poly(C)의 존재하에서 사람 도는 쥐 모두로 부터의 PKR 효소의 자가인산화를 유사한 방식으로 억제하였다. 이는 다른 종류의 진핵세포생물에서 단백질합성조절을 위한 PKR과 RBF가 유사한 경쟁적 관련성을 유지하면서 존재함을 시사하고 있다.