Ruzal, Sandra M.;Bustos, Patricia L.;Sanchez-Rivas, Carmen
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권1호
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pp.15-21
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2013
We previously observed that Bacillus subtilis spores from sspE mutants presented a lower germination capacity in media containing high salt concentrations (0.9M NaCl). This deficiency was attributed to the absence of SASP-E (gamma-type small-acid-soluble protein), rich in osmocompatible amino acids released by degradation. Herein we observed that, in addition, this mutant spore presented a reduced capacity to use L-alanine as germinant (L-ala pathway), required longer times to germinate in calcium dipicolinate ($Ca^{2+}$-DPA), but germinated well in asparagine, glucose, fructose, and potassium chloride (AGFK pathway). Moreover, mild sonic treatment of mutant spores partially recovered their germination capacity in L-ala. Spore qualities were also altered, since sporulating colonies from the sspE mutant showed a pale brownish color, a higher adherence to agar plates, and lower autofluorescence, properties related to their spore coat content. Furthermore, biochemical analysis showed a reduced partition in hexadecane and a higher content of $Ca^{2+}$-DPA when compared with its isogenic wild-type control. Coat protein preparations showed a different electrophoretic pattern, in particular when detected with antibodies against CotG and CotE. The complementation with a wild-type sspE gene in a plasmid allowed for recovering the wild-type coat phenotype. This is the first report of a direct involvement of SASP-E in the spore coat assembly during the differentiation program of sporulation.
Characteristics and roles of protease released during the germination of Dictyostelium discoideum spores were investigated. When geat activated, the spores germinated, progressively releasing the protease into the extracellular medium. The protease activity exhibited high at pH 2.5. When cyclogeximide was added to culture, complete germination (emergence) and protease release were stopped. Addition of purified nonspecific protease to culture speeded up germination. These results suggest that excreted protease may play a role in removal of the spore wall.
Narceine methyl ester and narceine are potent alkaloids which were isolated from Corydalis longipes were found effective in vitro at very low concentration, i.e., $100{\sim}500\;ppm$ against spore germination of some test plant pathogenic fungi (Alternaria solani, A. tagetica, Cercospora abelmoschi, Curvularia maculans, Erysiphe cichoracearum, E. pisi, Fusarium udum, Helminthosporium oryzae, H. penniseti, Ustilago cynodontis). Among the test, phytopathogens the spores of F. udum, C. maculans and H. penniseti were highly sensitive at 200 ppm. However, spores of E. pisi, A. solani and A. tagetica were less sensitive at low concentration followed by other test fungi. Most of the fungi showed zero or nearly zero percent spore germination at 400 and 500 ppm.
About 40 temperature-sensitive mutants have been isolated as a preliminary step to study the spore germination, the cell cycle, and the control of macromolecular synthesis in Aspergillus nidulans. To obtain temperature-sensitive mutants rapidly and effectively, the selective enrichment method using antifungal antibiotic nystatin was developed. Based on the data which had applied to the concentration of auxotrophic mutants by the earlier investigators, the optimal concentration and the time of treatment at the nonpermissive temeprature were determined as 50 to 100 units per ml and 4.5 hr., respectively. Out of 41 ts mutants assigned to the strain symbol PK, thirteen that seemed to be arrested at the earlystage of spore germination were subjected to the further cytological and genetic analysis. Elght of these mutants are able to form germ tube and five not. Staining with acid fuchsin for the 5PK strains shows that one irreversible mutant, PK6 strain able to form germ tube, accumulate mitotic spindle, being arrested in mitosis. Another PK15 and PK23 strain have more than one intact nucleolus without germ tube formation at the restrictive temperature. the temperature-senstive mutation in PK12 strain, the onlystrain which is able occurred in certain gene specific for the germination of spore. All of the ts markers are recessive and complement each other in heterokaryon between two different ts markers at the restrictive temperature.
N-Methylhydrasteine hydroxylactam and 1-methoxyberberine chloride, both alkaloids, extracted from Corydalis longipes have been assayed for their activities against two powdery mildews. The spore germination of Erysiphe cichoracearum on detached leaf of balsam(Impatiens balsaminia) following pre- and post-inoculation treatments by their mixture has shown high efficacy against the pathogen at 100, 200 and 300 ${\mu}g/ml$. The mixture was also effective at both pre- and post-inoculation treatments at 500, 1000, 1500 ${\mu}g/ml$ doses against E. pisi causing pea powdery mildew in pea(Pisum sativum) under field conditions. The significant efficacy of the mixture of two compounds against spore germination on detached leaves of balsam and also under field conditions in pea warrants its inclusion in trials against some other diseases under field conditions.
Medicinal plants play important roles in controlling plant diseases as one of the safest and ecofriendly methods. These plants have been used in the form of crude extracts as well as active principles in vitro and under field conditions to control plant diseases. Among the active principles, alkaloids have shown significant antifungal activity. We have investigated the effect of two alkaloids viz., (-)-corydahnine and (-)-isocorypahnine isolated from Corydalis chaerophylla, against spore germination of some plant pathogenic and saprophytic fungal spores. Significant inhibition of spore germination at 100 ${\mu}g/ml$ was seen against Curvularia penniseti, Curvularia sp. and Colletotrichum gloeosporioides by (-)-corydahnine but (-)-isocorypalmine was also effective against fungi included in the experiment.
효율적인 고추 탄저병 방제를 위하여, Colletotrichum gloeosporioides에 대한 살균제 13종의 포자 발아, 균사 생장 및 포자 형성 억제효과를 실험하였다. 이들 살균제 중 captan과 chlorothalonil, dithianon, fluazinam 및 folpet은 0.8 ${\mu}g/ml$ 농도에서 C. gloeosporioides 포자의 발아를 완전히 억제하였다. 이들 살균제 보다 억제효과는 낮았으나, mancozeb와 propineb도 20 ${\mu}g/ml$에서 80% 이상의 포자 발아 억제율을 나타내었다. 고추 탄저병균의 균사 생장은 fluazinam과 nuarimol에 의해 강하게 억제되었다. Nuarimol을 제외한 살균제들은 C. gloeosporioides의 균사 생장보다 포자 발아를 더 효과적으로 억제하였다. 그리고 Strobilurin계 살균제인 azoxystrobin과 metominostrobin은 고추 탄저병균의 포자 발아와 균사 생장에 대한 억제효과는 낮았으나, 포자 형성을 효과적으로 억제하였다. 그러므로 nuarimol을 제외한 이들 살균제를 이용한 고추 탄저병 방제는 주로 예방적으로 약제를 처리하여야 할 것으로 생각되었다.
본 실험에서는 microtiter plate를 이용하는 실내 검정법을 이용하여 고추 탄저병균의 기주체 침입 초기에 볼 수 있는 형태 변화인 포자 발아 및 부착과 균사 생장에 미치는 다양한 화합물의 활성을 대량으로 검정할 수 있는 방법을 확립하였고, 기존의 몇 가지 살균제가 가지는 고추 탄저병균의 초기 형태 분화 에 대한 억제 효과를 조사하였다. 본 실내 검정법을 표준화하기 위하여 MTT와 propanol 처리, 접종하는 포자의 농도, 배양 시간들이 병원균의 흡광도에 미치는 영향을 조사하였다. MTT를 12 시간, propanol을 1 시간 처리하였을 때, 그리고 JC24 의 포자를 $1\times10^5$개/mL의 농도로 접종하고 36 시간 배양하였을 때, 병원균의 흡광도가 일관성 있고 높게 나타났다. 살균제의 작용 특성을 알아보기 위해서 6종의 보호용 살균제, 6종의 스테롤 생합성 저해 살균제, 1종의 호흡저해제를 선발하여 microtiter plate 대량 검정 방법에서 효과를 조사하였다. 보호용 살균제 중에서 mancozeb, chlorothalonil, dithianone 등은 $6.25{\mu}g/mL$ 처리구에서도 포자의 발아, 부착과 균사의 생장을 모두 80% 이상 억제하였으나, propineb, iminoctadine, fluazinam 등은 $100{\mu}g/mL$의 처리를 2 시간만에 세척하였을 때 흡광도가 감소하는 것으로 보아 포자 부착 억제 효과는 적었다. 6종의 스테롤 생합성 저해제 중에서 hexaconazole, tebuconazole, myclobutanil 등은 포자의 발아와 균사 생육을 억제하고, 세척할 경우 JC24의 생육 억제 효과가 떨어지는 것을 보아 부착 억제 효과는 기대할 수 없었다. Nuarimol 은 $100{\mu}g/mL$로 처리한 고농도에서만 부착에 대한 억제 효과가 54.7%로 다른 억제 효과보다 우수하였으나, $6.25{\mu}g/mL$의 저농도로 처리하였을 때는 부착 억제 효과가 나타나지 않았다. Kresoxim-methyl은 6.25와 $100{\mu}g/mL$의 농도에서 포자 부착에 대한 억제율이 27.3%와 54.4%로 나타났는데, 처리하는 농도가 높아짐에 따라서 효과도 증가하였다. 이상의 결과와 같이 때 microtiter plate를 사용하여 병원균이 식물체를 침입하는 초기에 나타나는 포자 발아와 부착, 그리고 균사 생장을 검정할 수 있었으며, 본 실험 방법을 통하여 Kresoxim-methyl은 탄저병균의 포자 부착을 특이적으로 억제하는 효과가 있음을 알 수 있었다.
In order to establish an appropriate spray schedule to reduce the infection, 11 kinds of chemicals were tested for their properties on the inhibition of spore germination at the surface of apple fruits and the duration of the inhibitory effect after spray of each chemical was examined from late June to early September with basically 10 day intervals. Actual control efficacy of each chemical by the 8 successive spray and the patterns of waterborne spore dispersals during that periods were also examined. Combining those results with the meteorological observation data, actual control efficacy of each chemical in the given periods could be estimated. It was revealed that folpet, Brodeaux mixture, mancozeb, oxine copper and imminoctadine-triacetate could be used at any time during the possible infection periods. Captan and dithianon could also be used except the rainy season due to the short duration of inhibitory efficacy against spore germination under heavy rain. However, the usefulness of propineb, benomyl and chlorothalonil against the apple white rot could not be demonstrated in this experiment. Thiram, even though has not been used for apple white rot, can also be used before or after the rainy season to control not only white rot but also alternaria blotch.
The in vitro anti-fungal activity of hydroxylated fatty acids obtained from microbial conversion by Psuedomonas aeruginosa PR3 using ricinoleic acid(RA), eicosadienoic acid(EDA) and conjugated linoleic acid(CLA) as substrates, was investigated. Bioconverted hydroxylated fatty acids showed different anti-fungal activities potentials against the range of phytopathogenic fungi such as Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum, Sclerotonia sclerotiorum, Colletotricum capsici, Fusarium solani and Phytophthora capsici. RA and EDA showed up to 50% fungal mycelial inhibition at the concentration of $5{\mu}l\;ml^{-1}$. RA, EDA and CLA also exhibited anti-fungal activities with minimum inhibitory concentration(MIC), ranging from 500 to $1000{\mu}g\;ml^{-1}$. Screening was also carried out using varied concentrations of bioconverted RA and EDA for determining the anti-fungal effect on the spore germination of different fungi. Bioconverted RA and EDA showed a considerable degree of spore germination inhibition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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