The effect of AcNPV infection conditions such as serum concentration, pH, CaCl2, lysosomotropic agent, cell density at infection, agitation, aeration and nutritional supplementattion on recombinant protein production in Spodoptera frugiperda 21 cells was investigated using tissue culture flask, bottle and spinner flask. It was shown that serum, CaCl2, pH and cell density at infection affected recombinant production. The lysosomotropic agent did not significantly influence recombinant protein production.
The binding characteristics of Anagrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus (AtNPV) to Spodoptera frugiperda 21 (Sf21) cells were investigated. The cells displayed an affinity of 4.7×10/sup 10/M/sup -1/ with about 3,300 binding sites per cell. The biochemical nature of the AfNPV-binding sites on the cell surface was also partially identified. Our findings suggest that the binding-site moiety has a glycoprotein component, but that the direct involvement of oligosacccharides containing N-acetylglucosamine or sialic acid residues in binding is unlikely, and that AfNPV entry into Sf21 cells may be via receptor-mediated endocytosis.
열대 및 아열대 아메리카 지역이 원산지인 열대거세미나방(신칭; Spodoptera frugiperda (Smith, 1797))은 최근 전세계적에서 돌발적으로 문제가 되고 있는 농업 해충이다. 높은 비행능력을 가진 열대거세미나방은 2016년 아프리카를 시작으로 2018년 인도, 2019년 동남아시아에서 발견되어 확산 속도가 매우 빠르다. 한국에서 열대거세나방은 2019년 6월 13일 제주도 옥수수 재배 농가포장에서 처음 발견되었고, 그 후 2019년 7월 초까지 전라도, 경상남도의 여러 시/군에서 추가로 발견되었다. 한국에서 최초 침입집단을 미토콘드리아 COI유전자를 이용하여 열대거세미나방임을 유전적으로 동정하였고, 서로 다른 분기군에 속하는 2개의 haplotypes(hap-1, hap-2)으로 구성됨을 확인하였다. 분석된31개의 COI 염기서열 중 hap-1 이 93.5%로 우점하였다.
본 연구는 성페로몬에 대한 열대거세미나방 수컷 성충의 촉각 반응 및 중복 교미 여부를 확인하기 위해 수행하였다. 성페로몬 성분인 Z9-14:Ac에 대한 열대거세미나방 수컷 성충의 촉각 반응은 농도 의존적으로 농도가 증가할수록 크게 나타났다. 조사한 7성분 중 Z9-14:Ac 성분에 대한 촉각 반응이 가장 컸다. 성페로몬의 혼합 성분에 대한 촉각 반응이 단일 성분에 비해 컸다. 열대거세미나방 수컷 성충은 실험실 조건에서 중복교미가 가능하고, 첫 교미율이 58.3%인데 비해서 두 번째 교미율이 72.2%로 증가하였다. 교미한 수컷 성충의 촉각 반응과 교미하지 않은 수컷 성충의 촉각 반응의 차이가 없었다. 성페로몬 트랩에 교미하지 않은 수컷이 시험기간 중에 포획되지 않았다. 대조구인 교미하지 않은 암컷 성충을 장착한 트랩에서도 교미하지 않은 수컷 성충은 포획되지 않았다. 비록 실내에서 교미한 수컷 성충은 성페로몬 성분에 대해 교미하지 않은 수컷 성충처럼 촉각 반응을 보였다고 할지라도 실제 야외 망실 하우스에서 교미를 한번 한 수컷 성충은 비행 능력 등 활력의 문제로 트랩에 포획되지 않았을 가능성이 있다고 생각된다. 야외 노지에서 열대거세미나방 성페로몬에 대한 수컷 성충의 유인 정도는 추후 좀 더 많은 검토가 필요할 것으로 본다.
곤충세포주로 널리 이용되고 있는 Sf 세포주와 Bm 세포주의 분자생물학적 표식자를 탐색하기 위하여, 총 세포 단백질의 SDS-PAGE와 genomic DNA를 RAPD(Random Amplification of Polymorphic DNA) 방법으로 분석하였다. 그 결과, 총 세포 단백질 및 genomic DNA, 패턴에서 두 세포주를 뚜렷하게 구별할 수 있는 밴드를 탐색하였으며, 이들은 유용한 분자 생물학적 표식자로 이용될 수 있을 것이다.
Seo Yeon Hong;Hwi Jong Yi;Young Nam Yoon;Yun Woo Jang;Ki Do Park;Rameswor Maharjan
한국작물학회지
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제67권4호
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pp.285-295
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2022
The trapping efficacy of five commercially available sex pheromones manufactured in Korea, the Netherlands, North America, China, and Costa Rica was evaluated to determine the population dynamics of Spodoptera frugiperda and Mythimna loreyi and their relationships with the weather parameters of maize fields in Miryang, Gyeongnam Province, Korea in 2019. The results show that the sex pheromone manufactured in Costa Rica were more efficient at capturing S. frugiperda and M. loreyi than those manufactured in other countries. The lowest number of S. frugiperda moths were captured using sex pheromones manufactured in the Netherlands. We noted that more than four population peaks of both the moth species and weather parameters influenced the moth population dynamics in Miryang. A positive relationship was observed between the population of S. frugiperda and weather parameters, such as mean temperature, rainfall, and relative humidity, for sex pheromones manufactured in Korea. Furthermore, a positive relationship was recorded between the population of M. loreyi and wind speed for the sex pheromone manufactured in Korea. The results of this study suggest that the sex pheromones manufactured in Costa Rica are the best solution for the efficient capture of S. frugiperda and M. loreyi under typical weather conditions in the southern parts of Korea. In addition, the outcomes of this study are discussed in terms of population dynamics and integrated pest management for S. frugiperda and M. loreyi as alternatives to chemical management by maize producers. Further studies related to the continuous improvement in the capture efficiency of both moth species using sex pheromones are now needed.
Spodoptera frugiperda IPLB-SF-21-AE cells were cultivated in a spin-filter bioreactor with continuous perfusion for the recombinant $\beta$-galactosidase production. At the perfusion rate of 0.06 $hr^{-1}$, the maximum cell density of insect cells in this bioreactor system reached 3.5$\times$$l0^6$ viable cells/ml using the Grace media containing 5% FBS and 0.3% Pluronic F-68. The recombinant $\beta$-galactosidase production of 8, 100 units per reactor volume was also achieved at this perfusion rate.
Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus의 Nucleocapsids의 형성과 Polyhedra Occlusion Bodies의 형성을 Spodoptera frugiperda 세포에 감염된 후 3 일째 된 것을 관찰하였다. 1. A. californica NPV는 Spodoptera 세포의 핵내에서 분열복제되어 Nucleocapsid를 형성하여, 외투막을 얻은 후에 Polyhedra Occlusion Bodies 로 함입 되었다. 2. A. californica NPV가 감염된 세포의 핵은 팽창되어 핵막이 세포질까지 거의 신장되어 있었다. 3. Polyhedra Occlusion Bodies의 형성은 NPV로 감염된 세포에서 작은 엉성한 단백질 또는 Polypeptides가 점진적으로 커지면서 바이리스들이 함입되면서 더욱 덩치가 커지게 되고, 세포질내에 NPV 바이러스들이 없어지면 Polyhedra는 외부에 매끈한 막을 형성하는 것이 관찰되었다. 4. Polyhedra Occlusion Bodies의 형태는 바이러스 다발이 함입되어 있는 상태에 따라서 다양하였다. 5. Polyhedra 에 있는 바이러스 다발들은 외투막을 가지며 바이러스사이에도 기저물질이 존재하는 것을 볼 수 있었다.
Cell-free extracts prepared from cultured insect cells, Spodoptera. frugiperda, were analyzed for activation of early gene transcription of an insect baculovirus, Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV). The template DNA used for in vitro transcription assays contained promoter sites for the baculovirus genes that have been classified as immediate early ($\alpha$) or early genes. These genes are located in the HindIII-K/Q region of the AcNPV genome. Nuclei isolated from the AcNPV-infected Spodoptera frugiperda cells were also used for in vitro transcription analysis by RNase-mapping the labeled RNA synthesized from in vitro run-on reaction in the isolated nuclei. The genes studied by this technique were p26 and pl0 genes which were classified as delayed early and late gene, respectively. We found that transcription of the genes from the HindIII-K region was accurately initiated and unique in the whole cell extract obtained from uninfected cells, although abundance of the in vitro transcripts was reverse to that of in vivo RNA. With isolated nuclei transcription of the p26 gene was inhibited by $\alpha$-amanitin suggesting that the p26 gene was transcribed by host RNA polymerase II. However, transcription of the pl0 gene in isolated nuclei was not inhibited by $\alpha$-amanitin, but rather stimulated by the inhibitor. We also found that the synthesis of $\alpha$-amanitin-resistant RNA polymerase was begun before 6 hr p.i., the time point at which the onset of viral DNA replication as well as the appearance of a-amanitin-resistant viral transcripts were detected. These studies give us strong evidence to support the previous data that early genes of AcNPV were transcribed by host RNA polymerease III, while transcription of late genes was mediated at least by a novel $\alpha$-amanitin-resistant RNA polymerase.
Autographa californica nuclear polyhedrosis virus(AcNPV) L-1주의 extracellular nonoccluded virion (NOV)을 보관하는 방법을 연구하였다. AcNPV NOVs을 Spodoptera frugiperda cell line에 감염을 시킨 후에 배양액을 원심분리하여 AcNPV NOVs가 들어 있는 상등액을 취하여 $4^{\circ}C$에서 약 11년간 보관하였다. 보관되어 있는 AcNPV NOV을 Spodoptera frugiprda cell line에 재감염하여 관찰한 결과 NOVs의 감염과 증식이 정상적이었으며, NOV의 역가가 $8.9 \times 10^7$pfu/ml에서 $3.8 \times 10^5$pfu/ml로 떨어졌을 뿐이다. 또한 HindIII와 EcoRI 제한효소로 AcNPV genome DNA을 절단하여 패턴을 조사한 결과 DNA제한 효소 패턴은 변하지 않았다. 즉 AcNPV NOVs는 $4^{\circ}C$에서 보존하면 10년 이상 안정성이 있고, 취급이 용이하다는 것을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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