Gene-expression analysis is increasingly important in biological research, with real-time reverse PCR (RTPCR) becoming the method of choice for high-throughput and accurate expression profiling of selected genes. However, this technique requires important preliminary work for standardizing and optimizing the many parameters involved in the analysis. Plant stress studies are more and more based on gene expression. The analysis of gene expression requires sensitive and reproducible measurements for specific mRNA sequence. Several genes are regulated in response to abitoic stresses, such as salinity, and their gene products function in stress response and tolerance. The design of the primers and TaqMan probes for real-time PCR assays were carried out using the Primer $Express^{TM}$ software 3.0. The PCR efficiency was estimated through the linear regression of the dilution curve. To understand the expression pattern of various genes under salt stressed condition, we have developed a unique public resource of 9 stress-related genes in poplar. In this study, real-time RT-PCR was used to quantify the transcript level of 10 genes (9 stress-related genes and 1 house keeping gene) that could play a role in adaptation of Populus davidiana. Real-time RT-PCR analyses exhibited different expression ratios of related genes. The data obtained showed that determination of mRNA levels could constitute a new approach to study the stress response of P. davidiana after adaptation during growth in salinity condition.
Sweetpotato (Ipomoea batatas [L.]) is a globally important root crop cultivated for food and industrial processes. The crop is susceptible to the root-knot nematode (RKN) Meloidogyne incognita, a major plant-parasitic RKN that reduces the yield and quality of sweetpotato. Previous transcriptomic and proteomic analyses identified several genes that displayed differential expression patterns in susceptible and resistant cultivars in response to M. incognita infection. Among these, several sporamin genes were identified for RKN resilience. Sporamin is a storage protein primarily found in sweetpotato and morning glory (Ipomoea nil). In this study, transcriptional analysis was employed to investigate the role of sporamin genes in the defense response of sweetpotato against RKN infection in three susceptible and three resistant cultivars. Twenty-three sporamin genes were identified in sweetpotato and classified as group A or group B sporamin genes based on comparisons with characterized sweetpotato and Japanese morning glory sporamins. Two group A sporamin genes showed significantly elevated levels of expression in resistant but not in susceptible cultivars. These results suggest that the elevated expression of specific sporamin genes may play a crucial role in protecting sweetpotato roots from RKN infection.
Avermectin and its analogs are major commercial antiparasitic agents in the fields of animal health, agriculture, and human infections. To increase our understanding about the genetic mechanism underlying avermectin overproduction, comparative transcriptomes were analyzed between the low producer S. avermitilis ATCC31267 and the high producer S. avermitilis ATCC31780 via a S. avermitilis whole genome chip. The comparative transcriptome analysis revealed that fifty S. avermitilis genes were expressed at least two-fold higher in S. avermitilis ATCC31780. In particular, all the avermectin biosynthetic genes, including polyketide synthase (PKS) genes and an avermectin pathway-specific regulatory gene, were less expressed in the low producer S. avermitilis ATCC31267. The present results imply that avermectin overproduction in S. avermitilis ATCC31780 could be attributed to the previously unidentified fifty genes reported here and increased transcription levels of avermectin PKS genes.
The root hair provides a major entering spot for the symbiotic legume rhizobia. It is obvious that dynamic cell wall modification occurs in the plant root hair during the early microbe invasion. Expansins are nondestructive cell wall-modifying proteins that are involved in cell growth and differentiation. Among about 40 expansin genes in Arabidopsis, two expansin genes are expressed specifically in the root hair cell. Orthologous genes of this Arabidopsis root hair expansins have been found in other Brassica members, rice, and Medicago truncatula (a legume). In this review, I discuss the probable function of expansins during the early symbiotic process between the root hair and microbes and the regulation of root hair expansin genes in a comparative approach.
The tributyltin (TBT)-resistant bacterium, Pseudomonas aeruginosa 25W, which was isolated in seawater from the Arabian Sea, was subjected to transcriptome analysis in the presence of high concentrations of TBT. Only slight effects were observed at TBT concentration of $50{\mu}M$, but exposure to $500{\mu}M$ resulted in the upregulation of 6 genes and the downregulation of 75. Among the 75 downregulated genes, 53% (40 out of 75) were of hypothetical function, followed by 14 transcriptional regulation- and translation-associated genes. The results of this study indicated that although the 25W strain was highly resistant to TBT, high concentrations of TBT result in toxic effect on the transcriptional and translational levels. The target genes likely belong to a specific category of transcription- and translation-associated genes rather than to other gene categories.
Proceedings of the Botanical Society of Korea Conference
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1987.07a
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pp.63-79
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1987
Light regulates a variety of genes in higher plants. The expression of light-induced plant genes is regulated at the level of transcription via red- light photomorphogenic receptor, phytochrome, as well as unknown blue light photoreceptor(s). Ribulose-5-phosphate carboxylase/oxygenase (Rubisco) small subunit (SSB) and light harvesting chlorophyll a/b (Cab) protein are those of the best understood genes regulated by light. 5'-upstream flanking sequence (- -400) of Rubisco SSB and Cab genes sis known as a light responsive, enhance-like element. It responses to red and blue light in transgenic plant system as a tissue specific manner. Phytochrome gene is also regulated by light. In contrast to most of the light regulated plant genes, it is negatively controlled by red light. Search for the cis- and trans-acting factors responsible for the light signal is in progress to understant photomorphogenesis and development in higher plants.
Whole-genome sequencing of Flammulina ononidis, a wood-rotting basidiomycete, was performed to identify genes associated with carbohydrate-active enzymes (CAZymes). A total of 12,586 gene structures with an average length of 2009 bp were predicted by the AUGUSTUS tool from a total 35,524,258 bp length of de novo genome assembly (49.76% GC). Orthologous analysis with other fungal species revealed that 7051 groups contained at least one F. ononidis gene. In addition, 11,252 (89.5%) of 12,586 genes for F. ononidis proteins had orthologs among the Dikarya, and F. ononidis contained 8 species-specific genes, of which 5 genes were paralogous. CAZyme prediction revealed 524 CAZyme genes, including 228 for glycoside hydrolases, 21 for polysaccharide lyases, 87 for glycosyltransferases, 61 for carbohydrate esterases, 87 with auxiliary activities, and 40 for carbohydrate-binding modules in the F. ononidis genome. This genome information including CAZyme repertoire will be useful to understand lignocellulolytic machinery of this white rot fungus F. ononidis.
The efficacy of plant breeding has been enhanced by application of molecular markers in population screening and selection. Pepper (Capsicum annuum L.) is a major staple crop that is economically important with worldwide distribution. It is valued for its spicy taste and medicinal effect. The aim of this study was to discover single nucleotide polymorphisms (SNPs), microsatellite markers information, and percentage sharing through orthologous analysis of pepper-specific pungency-related genes. Here, we report the results of transcriptome analysis and microsatellite markers for four pepper varieties that possess a pungency-related gene. Orthologous analyses was performed to identify species-specific pungency-related genes in pepper, Arabidopsis thaliana L., potato (Solanum tuberosum L.), and tomato (Solanum lycopersicum L.). Advancements in next-generation sequencing technologies enabled us to quickly and cost-effectively assemble and characterize genes to select molecular markers in various organisms, including pepper. We identified a total of 9762, 7302, 8596, and 6886 SNPs for the four pepper cultivars Blackcluster, Mandarine, Saengryeg 211, and Saengryeg 213, respectively. We used 454 GS-FLX pyrosequencing to identify microsatellite markers and tri-nucleotide repeats (54.4%), the most common repeats, followed by di-, hexa-, tetra-, and penta-nucleotide repeats. A total of 5156 (15.9%) pepper-specific pungency-related genes were discovered as a result of orthologous analysis.
Kim, Tae-Ok;Eom, In-Seon;Park, Kwang-Ho;Park, Kwon-Sam
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.49
no.6
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pp.800-806
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2016
In total, 151 Escherichia coli isolates from Ruditapes philippinarum in Gomso Bay were analyzed for their susceptibility to 18 different antimicrobial agents and for genes associated with virulence. For virulence genes, each strain of the isolates was positive for the enterotoxigenic E. coli (ETEC)-specific heat-stable toxin (estA), enteroinvasive E. coli (EIEC)-specific invasion-associated locus (iaa) gene and enteropathogenic E. coli (EPEC)-specific attaching and effacing (eae) gene. According to a disk diffusion susceptibility test, resistance to ampicillin was most prevalent (23.2%), followed by resistance to amoxicillin (22.5%), ticarcillin (20.5%), tetracycline (18.5%), nalidixic acid (12.6%), ciprofloxacin (10.6%), streptomycin (9.9%), and chloramphenicol (6.6%). More than 35.8% of the isolates were resistant to at least one antimicrobial agent, and 19.9% were resistant to four or more classes of antimicrobials; these were consequently defined as multidrug resistant. Minimum inhibitory concentration (MIC) ranges for the antimicrobial resistance of the 15 different antimicrobial agents of 54 E. coli strains were confirmed by varying the concentrations from $32-2,048{\mu}g/mL$. Overall, these results not only provide novel insights into the necessity for seawater and R. philippinarum sanitation in Gomso Bay but they also help to reduce the risk of contamination by antimicrobial-resistant bacteria.
Methylprednisolone (MPD) is a synthetic glucocorticoid drug used in treatment of many neurological diseases and neurotraumas, including spinal cord injuries. Little is known of the mechanism of MPD in neuronal cells, particularly the genetic expression aspect. DD-PCR was used in identification of genes expressed during MPD treatment of PC12 cells. We have isolated 3 predicted up- or down-regulated genes, which are differentially expressed in neurons by MPD. One of these genes, USP16 (ubiquitin specific protease 16), is the deubiquitinating enzyme that is up-regulated by MPD in neurons. In order to observe the effect of MPD on USP16 gene expression, PC12 cells were treated under several experimental conditions, including endoplasmic reticulum stress drugs. We have isolated the total RNAs in PC12 cells and detected USP16 and ER related genes by RT-PCR. Because its expression pattern is similar to expression of ER chaperons, USP16 gene expression is strongly associated with unfolded protein response. A meaningful negative effect on each tissue treated by methylprednisolone is not shown in vivo. USP16 gene expression is suppressed by LY294002 (phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor), which suggests that USP16 gene expression is regulated by the phosphatidylinositol 3-kinase pathway.
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