Soybean (Glycine max (L.) Merr.) seed is the main source of protein and oil for human and animal. The use of soybean protein has been expanded in the food industry due to their excellent nutritional benefits. But, antinutritional and allergenic factors are exist in the raw mature soybean. Lipoxygenase, Kunitz trypsin inhibitor (KTI) protein, and ${\alpha}^{\prime}-subunit$ of 7S globulin are main antinutritional factors in soybean seed. Breeding of a new soybean strain with lacking these components is needed. The objective of this research was to select new soybean line with lipoxygenase-free, KTI-free, and ${\alpha}^{\prime}-subunit$ free (lx1lx1lx2lx2lx3lx3titicgy1cgy1 genotype). Total 434 $F_2$seeds were obtained from the cross of cultivar, "Gaechuck#2" and PI506876. Presence and absence of lipoxygenase, KTI protein, and ${\alpha}^{\prime}-subunit$ of 7S globulin was tested by SDS electrophoresis using a partial seed of each $F_2$seed. Only one $F_2$seed with lacking these three components was selected and was planted to $F_2$plant. Absence of lipoxygenase, KTI, and ${\alpha}^{\prime}-subunit$ protein was confirmed on the $F_3$seeds harvested. Selected line with lx1lx1lx2lx2lx3lx3titicgy1cgy1 genotype might be useful for soybean breeding.
Changes of free sugars, lipoxygenase activity and effects of chitosan treatment were analyzed during cultivation of soybean sprout. Free sugars(sucrose, raffinose and stachyose) were more rapidly decomposed in the cotyledon of soybean sprout. Contents of sucrose and raffinose in control group were decreased more rapidly than those of chitosan treated soybean sprouts (CTSS). But the decreasing rate of stachyose was higher in the CTSS. In the hypocotyl, 82% of L-2/3 activity were decreased, whereas 42% of the activity were decreased in the cotyledon after 132 hours of germination. The effect of chitosan treatment on the lipoxygenase activity was more effective on L-2/3 isozyme than L-1. After the germination period of 132 hours, L-2/3 activity of control group was 82.7unit/mg and that of CTSS was 56unit/mg.
15-Hydroxyeicosatetraenoic acid (HETE), as a mammalian biologically active metabolite, has anticarcinogenic effect. The conditions of producing 15-HETE from arachidonic acid by using soybean lipoxygenase were optimal at pH 8.5 and $20^{\circ}C$ with 9 g/l arachidonic acid, 54.4 U/ml soybean lipoxygenase, and 4% methanol. Under these optimized conditions, the enzyme produced 9.5 g/l 15-HETE after 25 min, with a molar conversion yield of 99% and a productivity of $22.8gl^{-1}h^{-1}$. To the best of our knowledge, this is the first biotechnological production of 15-HETE.
The effect of several inhibitors such as ascorbic acid on the lipoxygenase in soybeans known to catalyze reaction resulting in racid off-flavors was examined in the soybean homogenates by the oxygen electrode method. Among 8 compounds added at homogenizing process, 10 mM ascorbic acid inhibited lipoxygenase-1 and lipoxygenase-2/3 activities to 41.7 and 49.8%, respectively. Inactivation of lipoxygenase-2/3 was highly accelerated by homogenization for 15 min at room temperature, so the activity was inhibited 70.8% comparing with the homogenization of 3 min. When soybean homogenates with 10 mM ascorbic acid was stored at $25^{\circ}C$ for 72 hrs, lipoxygenase-2/3 activities lowered to 52.8% whereas L-1 activities lowered to 15.8%. Since it is reported that lipoxygenase-2 is responsible for the off-flavor of soybean products, the inhibitory effect of ascorbic acid among several inhibitors investigated might be useful in soybean processing.
This study was conducted to see the feasibility of breeding for sprout soybean cultivar with minimum benny flavor using lipoxygenase-less lines. Lipoxygenase-less cultivar Jinpumkong2 was crossed by lipoxygenase containing Gwangankong, Sebaeknamulkong, and Pureunkong as paternal parent and 24 lipoxygenase-less lines derived from those 3 combinations were selected and those lines were evaluated with their parental cultivars. Germination rate showed no difference between lipoxygenase-less lines and their parental cultivars, however, rates of normal sprout of those and Jinpumkong2 were 63 and $56\%$, and were lower than that of paternal parents. Hypocotyl length of those was same as Jinpumkong2, however, shorter than paternal parents. Texture characteristics including hardness, cutting force and mastication of 96 hour-cultured sprout of lipoxygenase-less lines showed higher value than that of their parental cultivars. Lipoxtgenase isozyme was not detected in the sprout cotyledon of lipoxygenase-less lines, however it was observed in the sprout hypocotyl of all the used genotypes. Though lipoxygenase activity in the seed of lipoxygenase-less lines was lower than that of Jinpumkong2(0.477, ${Delta}A$ 234 nm min-1 mg meal-1),2 lines revealed more than 0.5 value. Lipoxygenase-activity of 2 day-cultured sprout(both cotyledon and hypocotyl) was the highest, decreased in 3 days after culture and re-increased thereafter. Several lipoxygenase-less lines with lower lipoxygenase activity of sprout than Jinpumkong2 were selected and this suggested the possibility of breeding lines for soy-sprout with low benny flavor.
Lipoxygenase gives soybeans their grassy flavor, which can disrupt food processing efficiency. This study aimed to identify soybean genotypes with lipoxygenase deficiency among 1,001 soybean accessions and to develop kompetitive allele specific PCR (KASP) markers that can detect lipoxygenase mutations. Three lipoxygenase isozymes (Lox1, Lox2, and Lox3) were analyzed using a colorimetric assay based on a substrate-enzyme reaction. Among the 1,001 accessions examined, two (IT160160 and IT276392) exhibited a deficiency solely in Lox1, and one (IT269984) lacked both Lox1 and Lox2. IT160160 had a 74-bp deletion in exon 8 of Lox1 (Glyma13g347600), whereas IT276392 displayed a missense mutation involving the change of C to A at position 2,880 of Lox1. Moreover, we successfully developed four KASP markers that specifically target Lox1, Lox2, and Lox3 mutations. To validate the Lox1 KASP markers, we used two F2:3 populations generated through a cross between Daepung 2 (lipoxygenase wild type, maternal parent), IT160160, and IT276392 (null Lox1, paternal parent). The results revealed that the Daepung 2 × IT160160 group followed the expected 3:1 ratio according to Mendel's law, whereas the Daepung 2 × IT276392 group did not. Furthermore, a comparison between the colorimetric and KASP marker analyses results revealed a high agreement rate of 96%. KASP markers offer a distinct advantage by allowing the distinction of heterozygous types independent of other variables. As a result, we present an opportunity to expedite the lipoxygenase-deficient cultivar development.
This study was performed to clarify various conditions on the test of lipoxygenase-l and to establish the application of new test method for varietal improvement of soybeans in order to decrease beany flavors. Potassium borate and Tris were used as buffer and O.1M potassium borate solution showed the best result for the lipoxygenase-l test. In the range of pH 8.5~9.0 of the buffer, 2mM linoleic acid as substrate was effective. For color development, 100$\mu$l of two solutions(KI and starch) were added to the half soybean seed, successively. The substrate solution included linoleic acid was stored safely for 10 days at 4$^{\circ}C$ in refrigerator and for 4 days at room temperature. The best result was as follows; the 1ml of substrate solution[0.1M potassium borate(pH 9.0), 0.1% Tween-20, 2mM linoleic acid] was added to the chipped half soybean seed in l.5ml plastic tube, waited for 15 minutes, and 100$\mu$l of color development solutions(5% saturated KI in 15% acetic acid, 1% starch) were added to the tube, successively. After 4 hours, the purple color was observed in the upper phase of the plastic tube in the presence of lipoxygenase-1 and milky color in absence of lipoxygenase-1. The purple color was stable from 4 to 24 hours. There was no interfering effect by lipoxygenase-2 and -3. The plastic tube should be placed in the tube stand without shaking during the lipoxygenase-l test.
Lower field germination was observed in lipoxygenase- lacking soybean genotypes. This study was performed to understand seed-related traits after accelerated aging in response to planting date of soybeans. Two soybean cultivars, Jinpumkong (null lipoxygenase-2,3) and Jinpumkong 2 (lacking lipoxygenase-1, 2, 3) were evaluated for germination, and were compared with the cultivar, Taekwangkong containing lipoxygenase-1,2,3 isozymes. Greater seed coat cracking was shown in Jinpumkong and Jinpumkong 2 than Taekwangkong. Regardless of soybean genotypes, earlier planting resulted in greater seed coat cracking. After accelerated aging, seed fracturability and hardness of Jinpumkong and Jinpumkong 2 were lower than those of Taekwangkong. There was significant difference in germination percentage among soybean genotypes in response to planting date. Seeds obtained from late planting showed better germination ability. Accelerated aging resulted in lower germination percentages of Jinpumkong and Jinpumkong 2 than that of Taekwangkong, and showed higher electric conductivity in Jinpumkong and Jinpumkong 2 than Taekwangkong. After accelerated aging at 4$0^{\circ}C$ for thirty five days, germination percentages of Jinpumkong and Jinpumkong 2 were lower than that of Taekwangkong. Electric conductivity was increased continually as accelerated aging time became longer, and Jinpumkong and Jinpumkong 2 showed higher electric conductivity than Taekwangkong. Even though there were significant genotype differences in seed traits, further studies are needed to determine whether seed lipoxygenase ability is associated with germination ability.
Lipoxygenase-deficient soybeans, Jinpumkong (lipoxygenase-2, 3 lacking) and Jinpumkong 2 (lipoxygenase-1, 2, 3 lacking), were breeded for the improvement of beany flavor problem. The objectives of this study were to characterize and to examine the storage stability of two lipoxygenase-deficient soybeans by comparing with Hwangkeumkong having high lipoxygenase activity. The crude protein and crude lipid content of Jinpumkong 2 were lower than those of Hwkangkeumkong and Jimpumkong. All soybean samples were middle-sized and yellow-coated seeds. The rate of water uptake and trypsin inhibitor activity of Jinpumkong were greater than those of others. The cooking rate of Hwangkeumkong was the highest among all. The lipoxygenase activity of Hwangkeumkong was decreased when the soybeans were stored at $40^{\circ}C$ for 96hrs at 90% RH which is the condition of accelerated aging. After accelerated aging, the germination ratio of Hwangkeumkong was not changed but the ratio and speed of germination dropped rapidly in Jinpumkong and Jinpumkong 2.
Changes of rancidity of soybean powder from Yeonhaeju (Bazaz) during storage were evaluated by TBA, and compared with those of Korean soybean (Baektae). Lipoxygenase (LOX) in the soybean powder was inactivated by high pressure processing (HPP) to increase the stability of soybean powder during storage. The level of inactivation of LOX was measured by spectrophotometer at 234 nm. HPP decreased the activity of LOX in the soybean powder of Baektae, compared to that of the control (i.e., soybean powder without HPP treatment) of Baektae, while TBA values of both HPP treated Baektae and the control were increased up to 24 days of storage. However, in case of Bazas, both LOX activity TBA values decreased after HPP treatment, compared to those of controls. The antioxidant compounds in both soybeans were measured and quantitatively evaluated by on-line $ABTS^{+}$ assay. Based on the trolox equivalent (TE) value at the retention time 38.2 and 40.1 min, the antioxidant components in Bazaz were higher than that of Baektae. It might indicate that relatively lower TBA values of HPP treated Bazaz was due to lower LOX activity as well as higher antioxidant compounds in the species.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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