Polyphenol oxidase from Flammulina velutipes was purified and characterized. Purification of polyphenol oxidase was achieved by ammonium sulfate precipitation, Superdex G-200 gel filtration chromatography, Phenyl superose affinity chromatography, Mono-Q anion exchange chromatography and Superdex S-200 gel filtration chromatography on FPLC. After these purification steps specific activity of purified polyphenol oxidase increased to 199.1 units/mg. Polyphenol oxidase from F. velutipes was composed of a single polypeptide with molecular weight of about 40 kDa. Optimum pH and temperature for the enzyme reaction were found to be 6.0 and $25^{\circ}C$, respectively. The activity of the enzyme gradually decreased at acidic pH between 3 and 5, and the enzyme lost its activity at alkaline pH between 8 and 10. This enzyme exhibited high substrate specificity to o-diphenols. Km-values for L-DOPA and caffeic acid were found to be 3.97 mM and 1.78 mM, respectively. 2-mercaptoethanol, L-ascorbic acid, sodium bisulfite, EDTA and $Mg^{2+}$ inhibited the activity of pholyphenol oxidase and $Cu^{2+}$, $Fe^{2+}$, $Zn^{2+}$ and $Ni^{2+}$ increased enzyme activity. The activity of enzyme was well maintained at $-70^{\circ}C$ for over 4 months, and at $-20^{\circ}C$ for 1 months.
This study was performed to produce the high reactive lignin zero substrates from autohydrolyzed wood resources. In chemical compositions of used raw-materials, there were significant differences between two species, Japanese larch (Larix leptolepis) and oak (Quercus mongolica) woods. Japanese larch contained 25 to 3.5 times higher amounts of extractives than oak wood, which is mainly derived from high content of arabinogalactan in Japanese larch wood. Oak wood has 5% lower lignin content and 3% higher holocellulose and pentosans than larch wood. Concerned to changes in wood components during autohydrolysis pretreatment at 22 kg/cm2 steaming pressure for 5~60 min, glucose content was constant during pretreatment, while hemicellulose and lignin were abruptly changed. Hemicellulose fraction was decreased significantly and lignin contents increased because of its condensation reaction with hemicellulose degradation products. The pH of hydrolyzates during pretreatment was decreased, reached upto pH 3 and since then leveled off. In the case of oak wood, same tendency was observed as in Japanese larch. Autohydrolysis followed by sodium chlorite and sulfite or bisulfite pretreatment was very effective in delignification of the substrates. In particular, two-stage delignification of autohydrolyzed woods with alkali and O2-alkali resulted in very low lignin content substrates, such as 0~0.2% lignin substrate.
Seawater desalination process using a reverse osmosis (RO) membrane has been considered as one of the most promising technologies in solving the water scarcity problems in many arid regions around the world. To protect RO membrane in the process, a thorough understanding of the pretreatment process is particularly needed. Seawater organic matters (SWOMs) may form a gel layer on the membrane surface, which will increase a concentration polarization. As the SWOMs can be utilized as a substrate, membrane biofouling will be progressed on the RO membrane surface, resulting in the flux decline and increase of trans-membrane pressure drop and salt passage. In the middle of disinfection, an optimal chlorine dosage and neutralizer (sodium bisulfite, SBS) should be practiced to prevent oxidizing the surface of RO membranes. Additional fundamental research including novel non-susceptible biofouling membranes would be necessary to provide a guide line for the proper pretreatment process.
Al2O3 positively charged nanofiltration composite membrane was successfully prepared with aluminate coupling agent (ACA) as modifier, sodium bisulfite (NaHSO3) and potassium persulfate (K2S2O8) as initiator and methacryloyloxyethyl trimethylammonium chloride (DMC) as crosslinking monomer. The surface of the membrane before grafting and after polymerization were characterized by SEM and FT-IR. Three factor and three-level orthogonal experiments were designed to explore the optimal conditions for membrane preparation, and the optimal group was successfully prepared. The filtration experiments of different salt solutions were carried out, and the retention molecular weight was determined by polyethylene glycol (PEG). The results showed that the polymerization temperature had the greatest effect on the rejection rate, followed by the reaction time, and the concentration of DMC had the least effect on the rejection rate. The rejection rates of CaCl2, MgSO4, NaCl and Na2SO4 in the optimal group were 83.8%, 81.3%, 28.1% and 23.6% (average value), respectively. The molecule weight cut-off of 90% (MWCO) of the optimal group was about 460, which belongs to nanofiltration membrane.
Enzymatic browning is considered desirable in tea and tobacco processing but undesirable in many fruits processing at the present time. It is necessary to understand the nature of the enzyme, phenoloxidase, in order to control browning reactions, and extend its effects to formation of browning products as antioxidants in ginseng. Ginseng exhibits antioxidant activity when incorporated with turkey dark meat patties. The activity in red ginseng showed about two times stronger than white ginseng. One of the phenolic antioxidants from fresh, white and reprocessed white ginseng was identified as phenol 2.6 Bis(1.1 dimethyl ethyl) 4-methyl among several unknown compounds by GC/mass spectrometer. In red ginseng, no phenol 2.6 Bis (1.1 dimethyl ethyl) 4-methyl was detected, the compound may be polymerized by phenoloxidase and form some higher molecular compounds which may possess high antioxidant activity. Phenoloxidase isozymes in fresh Korean ginseng (panax ginseng C.A. Meyer) were extracted with phosphate buffer at pH 7.3. The isozymes were purified through ammonium sulfate fractionation, dialysis and chromatography on a DEAE-cellulose column. Two groups of phenoloxidase were shown to be present, one in the floating agglomerated group and the other in the precipitate. group from the 0.85 saturation ammonium sulfate. The DEAE-cellulose column chromatography, the phenoloxidase isozyme present in the precipitate appears as the first peak (I), and that in the agglomerate in the second peak (II). Isozyme I showed higher activity with catechin and catechal, and isozyme II showed higher activity with p-cresol. The isozyme showed two optimum pH activity one at pH 4.5 and the other at 8.5 with catechin as substrate. Korean ginseng phenoloxidase has high heat stability. When heated at $75^{\circ}C$ for 2 hours, its activity remained $90\%\;and\;80\%$ on phenoloxidase I and II respectively. Phenoloxidase I was most active on (+) catechin followed by p-cresal, catechol and epicatechin. Phenoloxidase II was most active on p-cresal followed by (+) catechin, catechol, p-coumanic acid and epicatechin. Sodium bisulfite, sodium cyanide, ascorbic acid glutachion in the oxidized form, sodium diethyl dithiocarbomate and ethylendiamine tetra acetate (EDTA) acted as inhibitors. Red ginseng color development was initiated by phenoloxidase and finished by a followed sun drying process. The antiaging activity of ginseng may be initiated by the antioxidant in the ginseng.
Inflammatory bowel disease (IBD) is a disease strongly associated with colorectal cancer (CRC) as a well-known precancerous condition. Alterations in DNA methylation and mutation in K-ras are believed to play an early etiopathogenic role in CRC and may also an initiating event through deregulation of molecular signaling. Epigenetic silencing of APC and SFRP2 in the WNT signaling pathway may also be involved in IBD-CRC. The role of aberrant DNA methylation in precancerous state of colorectal cancer (CRC) is under intensive investigation worldwide. The aim of this study was to investigate the status of promoter methylation of MGMT-B, APC1A and SFRP2 genes, in inflamed and normal colon tissues of patients with IBD compared with control normal tissues. A total of 52 IBD tissues as well as corresponding normal tissues and 30 samples from healthy participants were obtained. We determined promoter methylation status of MGMT-B, SFRP2 and APC1A genes by chemical treatment with sodium bisulfite and subsequent MSP. The most frequently methylated locus was MGMT-B (71%; 34 of 48), followed by SFRP2 (66.6 %; 32 of 48), and APC1A (43.7%; 21 of 48). Our study demonstrated for the first time that hypermethylation of the MGMT-B and the SFRP2 gene promoter regions might be involved in IBD development. Methylation of MGMT-B and SFRP2 in IBD patients may provide a method for early detection of IBD-associated neoplasia.
Kim, Hong-Rye;Han, Rong-Xun;Lee, Hye-Ran;Yoon, Jong-Taek;Cheong, Hee-Tae;Park, Chang-Sik;Jin, Dong-Il
Reproductive and Developmental Biology
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v.31
no.2
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pp.97-102
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2007
The objective of this study was to analyzed pattern of proteins expression abnormally in cloned bovine placenta. TIMP-2 protein whose function is related to extracellular matrix degradation and tissue remodeling processes was one of differentially up-regulated proteins in SCNT placenta. And one of down-regulated protein in SCNT placenta was identified as vimentin protein that is presumed to stabilize the architecture of the cytoplasm. The expression patterns of these proteins were validated by Western blotting. To evaluate how regulatory loci. of TIMP-2 and vimentin genes was programmed reprogramming in cloned placenta. the status of DNA methylation in the promoter region of TIMP-2 and vimentin genes was analyzed by sodium Bisulfite mapping. The DNA methylation results showed that there was not difference in methylation pattern of TIMP-2 and vimentin loci between cloned and normal placenta. Histone H3 acetylation state of the nucleosome was analyzed in the cloned placental and normal placenta by Western blotting. A small portion of the protein lysates were subjected to Western blotting with the antibodies against anti acetyl-Histone H3. Overall histone H3 acetylation state of SCNT placenta was significantly higher than those of normal placenta cells. It is postulated that cloned placenta at the end of gestation seems to be unusual in function and morphology of placenta via improper expression of TIMP-2 and vimentin by abnormal acetylation states of cloned genome.
Poly(urethaneethyl acrylate) hybrid emulsions were synthesized to improve their thermomechanical and solvent resistance properties. In the synthesis, dimethylol propionic acid was used to impart hydrophilicity to the hybrid polymers, and ethyl acrylate monomer was added to the polyurethane prepolymer after neutralization with triethylamine. After dispersion of the neutralized prepolymer, chain extension was carried out with ethylene diamine. Consequently, poly(urethaneethyl acrylate) hybrid emulsion was prepared via soap free emulsion polymerization of ethyl acrylate with reduction-oxidation initiator couple of t-butyl hydroperoxide/sodium bisulfite at $50^{\circ}C$. Tehsile strength, 100% modulus, elongation, and solvent-resistance properties of the hybrid emulsion were measured and compared with those of polyurethane homopolymer, poly(ethyl acrylate) homopolymer, and simple blended samples.
The effects of two-step fixation of steaming and baking on the dischargeability of cotton fabrics dyed with C.I. Reactive Black 5(Bl-5) were investigated when the concentrations of $K_2CO_3$ and benzaldehyde sodium bisulfite(BASB) were increased over 120/kg. Remarkably increased dischargeability resulted from baking for 3 min or more at 160t after steaming for 8 min or more at $102^\circ{C}$, but 120g/kg or more amounts of $K_2CO_3$ and BASB(50%) had little influence on dischargeability. Therefore the discharge mechanism can be suggested that covalent bonds between cellulose and Bl-5 undergo $S_N2$ attack by hydroxide ion formed by the reaction of $K_2CO_3$ and water in steaming at $102^\circ{C}$ first and then, through transition states they are cleavaged in baking at 160t to yield hydrolyzed Bl-S and compounds of BASB and Bl-5 isolated from fiber, which are undyeable and removed by washing. The effect of urea, one of the hydrotrope agents, on discharge printing was also studied. The result which dischargeability was greatly improved by increasing the steaming time from 8 min to 15 min at $102^\circ{C}$ or by increasing the amount of urea obviously shows that water in steaming and urea in print paste play an important role in discharge printing. And as an increase of the baking time from 5 min to 7 min at $160^\circ{C}$ makes it possible to improve dischargeability, it is once more confirmed that high temperature of about 160t is exactly required to discharge the dyed Bl-5. The colored discharge printing demands a more amount of urea because urea contributes to the putting color fixation as well as the discharge reaction.
The solubility and physicochemical stability of caroverine hydrochloride (CRV), an antispasmodic, in buffered aqueous solutions were studied using a reverse phase high performance liquid chromatography. The solubilty of the drug at pH 2.76-5.40 was similar at the range 31.9-36.2 mg/ml $(34^{circ}C)$, but, at the pH higher than 6.0, markedly decreased. The use of polyethylene glycol 400 as a cosolvent did not increase the solubility at any compositions examined. Moreover. increasing molar concentration of aqueous phosphate buffer from 0 to 0.5 M remarkably decreased the solubility. The degradation of CRY followed the apparent first-order kinetics. The degradation was accelerated with decreasing pH and increasing storage temperature. The half-lives for the degradation of CRY (1.0 mg/ml) at pH 1.28. 4.01 and 5.93 $(45^{\circ}C)$ were 2.8, 31.4 and 124 hr. respectively. The pHs of incubated solutions were to some extent lowered perhaps due to the formation of acidic degradation products. The addition of disodium edetate (0.01%) to the CRY solution (pH 4.95) retarded 2.5 times the degradation rate at $45^{\circ}C$, but the use of sodium bisulfite (0.1%) accelerated 2.9 times the rate. The activation energy for the CRY solution (20 mg/ml. pH 5.4) containing 0.01% EDTA was calculated to be 5.98 kcal/mole. When the solution was stored under nitrogen displacement in ampoule, there was no significant degradation even after 3 months at $40^{\circ}C$, indicating that protection from oxidation by air (oxygen) is essential for the complete stabilization of CRY solution.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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