Sialic acid, which is contained in about 60-160 mg/kg in the edible bird's nest (EBN), is known to facilitate in the proper formation of synapses and improve memory function. The objective of this study is to extract effectively the sialic acid from edible bird's nest using affinity bead technology (ABT). After preparing the non-polar polymeric bead "KJM-278-28A" having a porous network structure, and then desorbed sialic acid was concentrated and dried. The analysis of the physicochemical properties of bead "KJM-278-28A" showed that the particle size was 400-700 ㎛, the moisture holding capacity was 67-70%, the surface area (BET) was 705-900 ㎡/g, and the average pore diameter 70-87 Å. The adsorption capacity of the bead "KJM-278-28A" for sialic acid was shown a strong physical force to bind sialic acid to the bead surface of 400 mg/L. In addition, as a result of analyzing the adsorption and desorption effects of sialic acid on water, ethanol, and 10% ethanol on the bead, it was confirmed that desorption effectively occurs from the beads when only ethanol is used. As a result of HPLC measurement of the separated sialic acid solution, a total of four sialic acid peaks of N-acetyl-neuraminic acid (Neu5Ac), α,β-anomer of Neu5Ac and N-glycoly-neuraminic acid were identified. Through these results, it was confirmed that it is possible to separate sialic acid from EBN extract with efficient and high yield when using ABT.
k-casein은 유단백질 분획으로 GMP를 포함하고있으떠 GMP는 sialic acid를 포함하고 있으므로 k-casein index로 sialic acid 가 사용될 수 있다. 탈지분유 분리 단백질 용해도는 칼슘카페인 보다 일반적으로 낮으므로 용매처리시 야기되는 k-casein의 손실과 저용해도와의 관계를 규명하고자 하였다. 특히 용매처리시 주요 stabilizing fraction k-casein의 손실 혹은 손상을 고려해야만 한다. 용매처리시 sialic acid 는 제1차 추출용매에 16.5%, 제2차 추출용매에 4.0%손실되어 전체 20.5%가 용매처리시 손실되었다. 또 사용한 메탄올의 농도가 증가할수록 sialic acid손실이 감소하여 sialic acid 손실은 메탄을분획보다 물분획에따라 좌우된 것 같다. 따라서 sialic acid를 함유한 분말 extracted solid의 feed back 실험 결과 10%첨 가시최대 용해도를 나타냈으며 유당은 용해도 변화에 기여하지 못하였다 결론적으로 탈지분유 단백의 저용해도 헌상은 용매처리시 k-casein의 가용성 물질 손실에도 일부 기인한 것으로 사료된다.
The objective of this study was to produce a nutrient delivery system (NDS) using sialic acid extracted from edible bird's nest (EBN), which improves brain function in patients with Alzheimer's disease and Parkinson's disease, by affinity bead technology (ABT). The inhibitory activity of acetylcholinesterase (AChE) and pyramidal cells in the dentate gyrus of the hippocampus were analyzed to investigate the effect of a sialic acid NDS on Alzheimer's disease. Also, the effect of a sialic acid NDS on Parkinson's disease was evaluated by rota-rod test and pole test in an animal model. Among the groups treated with donepezil, EBN, and sialic acid NDS, the AChE activity was the lowest in the sialic acid NDS-treated group. The results of the hippocampus analysis of the rat model confirmed that the sialic acid NDS inhibited amyloid-beta accumulation depending upon the concentration. Also, the sialic acid NDS group showed more improvement in motor deterioration than the1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)-induced group in both the rota-rod test and pole test. Therefore, the sialic acid NDS had an effect of protecting not only Alzheimer's disease by inhibiting AChE and amyloid-beta accumulation, but Parkinson's disease by preventing neurotoxicity induced by MPTP.
본 시험은 GMP 내 기본적으로 7%로 결합되어 있는 sialic acid의 함유량을 그대로 보유하도록 제조한 유청단백가수분말(시험물질명: 7%-GNANA)을 기능성 식품 원료 개발함에 최종 연구목표를 두었다. 시험물질은 GMP(7% sialic acid 함유)를 원료로 하고, 여기에 식품첨가물로 허용된 효소인 Alcalase를 사용하여 지표성분인 sialic acid를 100% 효율로 분리시킨 후, 동결 건조한 7%-GNANA(7% sialic acid와 GMP 단백질로 구성, 제품명: HELICOBACTROL-7)을 (주)한일바이오메드사(한국)에서 공여 받아 GLP 가이드라인에 따라 미생물복귀돌연변이시험을 실시하였다. 미생물에 대한 돌연변이 유발성 유무를 검색하기 위해 히스티딘 요구성 균주인 Sal. typhimurium TA98, TA100, TA1535 및 TA1537과 트립토판 요구성 균주인 E. coli WP2uvrA를 이용하였다. 미생물복귀돌연변이시험은 시험물질을 5단계의 농도군(0, 61.7, 185, 556, 1,670, $5,000{\mu}g/plate$)으로 하여 평가하였다. 본 시험을 통한 평가결과, 대사활성계 존재 유무와 관계없이 모든 균주에서 시험물질의 각 농도에 의한 복귀돌연변이 유발원 양성기준인 콜로니 생성수치가 재현성 있는 증가를 나타내지 않았으며, 용량의존성도 확인되지 않았다. 결론적으로, 시험물질인 7% G-NANA의 식품첨가물로서 등록을 위하여 수행한 미생물돌연변이시험에서 안전성이 확인되었다.
The infection of pandemic influenza viruses such as swine flu (H1N1) and avian flu viruses to the host cells is related to the following two factors: First, the surface protein such as HA (hemagglutinin) and NA (neuraminidase) of the influenza virus. Second, the specific structure of the oligosaccharide [sialic acid(${\alpha}2$-6) galactose(${\beta}1$-4)glucose or sialic acid(${\alpha}2$-3)galactose(${\beta}1$-4)glucose] on the host cell. After recognizing the specific structure of the oligosaccharide on the surface of host cells by the surface protein of the influenza virus, the influenza virus can secrete sialidase and cleave the sialic acid attached on the final position of the specific structure of the oligosaccharide on the surface of host cells. Tamiflu (oseltamivir), known as a remedy of swine flu, has a saccharide analog structure, especially the sialic acid analog. Tamiflu can inhibit the invasion of influenza viruses (swine flu and avian flu viruses) into the host cells by competition with sialic acid on the terminal position of the specific oligosaccharide on the surface of the host cell. Because of the emergence of Tamiflu resistance, the development of new potent anti-influenza inhibitors is needed. The inhibitors with positive-charge groups have potential as antiviral therapeutics, and the strain specificity must also be resolved.
난황 단백질의 효소에 의한 가수분해에서 에탄올의 농도가 증가할수록 고형물과 단백질의 회수가 증가함을 알 수 있었다. 이것은 유화층을 에탄올의 증가가 감소시켰기 때문이다. 그러나 가수분해물에서 단백질 함량이나 sialic acid의 함량은 에탄을 농도와는 관계없이 일정하였다. 한외여과 후에 retentate에 대한 에탄올의 영향을 조사하였다. 마찬가지로 고형물의 회수는 에탄을 농도의 증가와 함께 증가하였다. 그리고 retentate에서 sialic acid의 함량은 대략 $2.5\%$정도로 일정하고 에탄올의 농도에 영향을 받지 않았다 이상의 결과로부터 난황 단백질의 효소 가수분해를 통해 sialic acid가 함유된 제품을 얻고자 할 때는 원료 난황단백질에 포함된 에탄올의 함량을 증가시킬수록 높은 수율의 제품을 얻을 수 있다. 본 실험에서는 원료 난황 단백질 중에서 $40\%$의 에탄을 함량까지는 제품 수율이 계속 증가하는 경향을 보였다. 난황 단백질 가수분해물의 한외여과에서 농축단계에서는 막 모듈의 MWCO의 차이에도 불구하고 retentate에서 총 고형물의 회수율은 비슷함을 나타내었으며, 투석에서 회수율은 MWCO가 작을수록 높아지지는 않았다. 제품에서의 sialic acid의 함량은 사용한 모듈에서 약 $2.0\%$를 나타내었다. 이것은 단백질 가수분해물에 비해 5배정도 상승한 결과이다. 본 연구에서 사용된 막 모듈 가운데서 Amicon 모듈이 제품의 회수율과 함량면에서 가장 우수한 특성을 보였다. 결론적으로 난황 단백질의 protease에 의한 가수분해에서 한외여과에 의해 순도를 높일 때 MWCO, 막 모듈의 type 그리고 운전조건 등을 잘 고려해 줄 때 최적의 조업조건을 얻을 수 있었다.
로타바이러스는 유아와 어린 포유동물에 있어서 위장염을 일으키는 원인체로서 다양한 혈청형에 의해 발병되기 때문에 효과적인 백신 개발이 되지 않고 있다. 본 연구는 국내 분리 한우송아지 로타바이러스 S97과 JBR(Jeju island bovine rotavirus)에 $textsc{k}$-casein, GMf, sialic acid를 첨가하여 MA-104세포에 감염시켰을 때 그 억제 효과를 규명하기 위해 시행하였다. 한우송아지 로타바이러스 597과 JBR을 무혈청 Ml99배지의 MA-104세포에 감염시켜 37$^{\circ}C$에서 6일간 회전 배양하여 활성화시킨 다음, 로타바이러스 역가를 분석하였고, MA-104 세포에 활성화된 BRV를 감염시키고, $textsc{k}$-casein, GMP sialic acid를 각각 농도에 따라 첨가하여 15시간 배양한 다음 AEC 염색법으로 염색시켜 현미경 상에서 감염된 세포수를 계산하였다. 한우송아지 로타바이러스 S97과 GMR의 역가는 각각 2.5$\times$107과 2.0$\times$106 PFU/ml이었다. $textsc{k}$-casein, GMP의 농도 20001M에서 S97의 세포감염율은 97.4%와 97.44%로 나타났고, $textsc{k}$-casein, GWP의 농도 2000$\mu$M에서 JBR의 세포감염 억제율은 99.52%와 99.78%로 나타났다. Sialic acid의 농도 2000$\mu$M에서의 S97과 JBR의 세포감염 억제율은 3.85%와 3.63%로 나타났다. $textsc{k}$-casein, CU는 로타바이러스 S97과 JBR에 대해 농도 2000UM에서 97%이상의 억제효과를 나타냈으며, sialic acid는 억제효과가 거의 없었다. K-casein, GMP는 송아지뿐만 아니라 유아의 로타바이러스에 의한 설사를 억제할 수 있을 것으로 기대된다.
The very low density apolipoproteins were separated by a newly developed method of isoelectric focusing in a narrow pH gradient. Four polypeptides were isolated that differed from the major proteins of the high density or low density lipoproteins. Three of these proteins had indistinguishable amino acid compositions, but different isoelectric points, COOH-terminal alanine, no isoleucine, cysteine or cystine. Two of these polypeptides had $NH_2-terminal$ serine. The polymorphism of apolipoprotein-Ala, so designated from the COOH-terminal residue, was related to sialic acid content; one form contained 2 moles of sialic acid per mole of protein, the second, 1 mole of protein, and the third, no sialic acid. The fourth polypeptide had an amino acid composition different from the first three polypeptides and from other polypetides obtained from very low density lipoprotein. This polypeptide had $NH_2-terminal$ threonine, COOH-terminal resistant to carboxypeptidase A, no histidine, cysteine, cystine or sialic acid. These four polypeptides constituted approx. 40% of the total protein in very low density lipoprotein.
본 시험은 안전식품인 우유단백질에서 분리되어 영유아 식품 등에 세계적으로 사용되고 있는 GMP 내 기본적으로 7%로 결합되어 있는 지표성분인 sialic acid의 함유량이 높게 제조한 23%-GNANA를 기능성 식품 원료 개발함에 최종 연구 목표를 두었다. 시험물질은 23% sialic acid와 GMP 단백질로 구성(제품명: HELICOBACTROL-23)되어 있으며, (주)한일바이오메드사(한국)에서 공여 받아 미생물복귀돌연변이시험을 실시하였다. 미생물에 대한 돌연변이 유발성 유무를 검색하기 위해 히스티딘 요구성 균주인 Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA1535 및 TA1537과 트립토판 요구성 균주인 Escherichia coli WP2uvrA를 이용하였다. 미생물복귀돌연변이시험은 시험물질을 5단계의 농도군(0, 61.7, 185, 556, 1,670, $5,000{\mu}g/plate$)으로 하여 평가하였다. 평가결과로서, 대사활성계 존재 유무와 관계없이 5균주 모두에서 시험물질의 각 농도에 의한 복귀돌연변이 유발원 양성기준인 콜로니 생성수치가 재현성있는 증가를 나타내지 않았으며, 용량의존성도 확인되지 않았다. 결론적으로, 시험물질인 23%-GNANA의 식품첨가물로서 등록을 위하여 수행한 미생물돌연변이시험에서 안전성이 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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