We have developed an efficient and precise method for genome manipulations in Bacillus subtilis that allows rapid alteration of a gene sequence or multiple gene sequences without altering the chromosome in any other way. In our approach, the Escherichia coli toxin gene mazF, which was used as a counter-selectable marker, was placed under the control of a xylose-inducible expression system and associated with an antibiotic resistance gene to create a "mazF-cassette". A polymerase chain reaction (PCR)-generated fragment, consisting of two homology regions joined to the mazF-cassette, was integrated into the chromosome at the target locus by homologous recombination, using positive selection for antibiotic resistance. Then, the excision of the mazF-cassette from the chromosome by a single-crossover event between two short directly repeated (DR) sequences, included in the design of the PCR products, was achieved by counter-selection of mazF. We used this method efficiently and precisely to deliver a point mutation, to inactivate a specific gene, to delete a large genomic region, and to generate the in-frame deletion with minimal polar effects in the same background.
보호식물이며, 약용식물인 깽깽이풀 (Jeffersonia dubia)을 대상으로 핵형 분석과 McFISH 기법을 이용한 염색체 분석을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 체세포 염색체 수는 2n=2x=12였으며, 2쌍의 중부 염색체 (염색체 1, 3), 2쌍의 차중부 염색체 (염색체 2, 4) 그리고 2쌍의 차단부 염색체 (염색체 5, 6)로 구분되었고, 염색체의 평균 길이는 $1.95{\sim}3.50{\mu}M$이었다. McFISH기법을 이용하여 45S와 5S rDNA의 염색체상의 위치를 확인한 바, 3쌍의 45S rDNA signal은 4번, 5번 그리고 6번 염색체의 단완 말단 부위에서 관찰되었고, 한 쌍의 5S rDNA signal은 2번 염색체의 동원체 부위에서 관찰되었다.
We herein report an analysis of a female baby with a de novo dup(10p)/del(10q) chromosomal aberration. A prenatal cytogenetic analysis was performed owing to abnormal ultrasound findings including a choroid plexus cyst, prominent cisterna magna, and a slightly medially displaced stomach. The fetal karyotype showed additional material attached to the terminal region of chromosome 10q. Parental karyotypes were both normal. At birth, the baby showed hypotonia, upslanting palpebral fissures, a nodular back mass, respiratory distress, neonatal jaundice and a suspicious polycystic kidney. We ascertained that the karyotype of the baby was 46,XX,der(10)($pter{\rightarrow}q26.3::p11.2{\rightarrow}pter$) by cytogenetic and molecular cytogenetic analyses including high resolution GTG-and RBG-banding, fluorescence in situ hybridization, comparative genomic hybridization, and short tandem repeat marker analyses. While almost all reported cases of 10p duplication originated from one of the parents with a pericentric inversion, our case is extraordinarily rare as the de novo dup(10p)/del(10q) presumably originated from a rearrangement at the premeiotic stage of the parental germ cell or from parental germline mosaicism.
Gyu-Hyeon Eom;Jae-Ryoung Park;Yoon-Hee Jang;Eun-Gyeong Kim;Nari Kim;Saleem Asif;Kyung-Min Kim
한국작물학회:학술대회논문집
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한국작물학회 2022년도 추계학술대회
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pp.281-281
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2022
Rice is a staple crop used by more than 50% of the world's population. However, in rapidly changing climates such as abnormal high temperatures and typhoons, the food security of rice is greatly threatened. Plant factories have the advantage of being able to grow crops regardless of climate change, so they can be a response to climate change. However, in plant factories, crops are grown by placing the culture bed vertically, so shorter crops are more efficient. Therefore, in order to search for genes related to the height of rice, QTL analysis was performed by investigating the plant height of Cheongcheong/Nagdong doubled haploids from 2017 to 2021. Plant height of rice investigated for five years showed a normal distribution, meaning that genes related to rice height are quantitative traits. As a result of QTL analysis, a total of 12 QTLs were detected, and QTLs overlapped for 5 years in RM12285-RM212 on chromosome 1. Also, The QTLs of plant height detected in 2019 has a LOD score of 17.64 in RM12285-RM212 region of chromosome 1. As a result of QTL analysis, 44 height-related genes were searched from the detected chromosomes, and among them, Os01g0757200 in RM 12285-RM212 on chromosome 1 region, named OsGA2ox3q1, were selected as genes related to the height of rice. The relative gene expression level of OsGA2ox3q1 was highly expressed in cultivar with short culm lines, and was low expressed in cultivar with long culm lines. OsGA2ox3q1 can be used to breed semi-dwarf cultivar in rice more efficiently.
Short tendem repeat (STR) loci have been used in the field of forensic science. There are literally hundreds of STR systems which have been mapped throughout the human genome. These STR loci are found in almost every chromosome in the genome. They may be amplified using a variety of PCR primers. In this study, a DNA genotyping system based on the multiplex amplification of highly polymorphic STR loci was developed. Three STR loci with nonoverlapping allele size ranges have been utilized in the multiplex amplification including the Neurotensin receptor gene, D21S11, and Human tyrosine hydroxylase gene. The optimal condition for triplex PCr was obtained in a solution with a total volume of $25{\mu}l$ containing 2.0 U of Taq polymerase, 3 mM of $MgCl_2$, $300{\mu}M$ of dNTP, 10 pmole of each primer set, an annealing temperature of $62^{\circ}C$, and 35 cycles. The optimized condition was successfully employed in a family paternity test.
국내(國內)에서 식재(植載)되고 있는 소나무류(類)(Hard Pine) 6종(種)과 잣나무류(類)(Soft Pine) 5종류(種類)의 Root-tip을 재료(材料)로하여 염색체(染色體)의 Long, Short arm과 총(總)길이를 측정(測定)S/L ratio를 구(求)하고 이차내착(二次猍窄)의 위치(位置)를 찾아내고 Idiogram을 도해(圖解)하여 Long arm의 Descending order의 순서(順序)가 바뀌는 Pattern을 밝혔다. 소나무속(屬)의 염색체(染色體)는 기본수(基本數)가 n=12, 길이가 거의 비슷하고 S/L ratio가 l에 가까운 M형(型)이 10개(個), SM형(型)이거나 SM형(型)에 가까운 길이가 짧은 것 2개(個)가 합(合)해서 Chromosone 1set를 구성(構成)한다. 이차내착(二次猍窄)의 수(數)와 위치(位置), Long arm의 Descending order의 순위(順位)가 바뀌는 Pattern으로 종간(種間)의 식별(識別)이 가능(可能)했고 Long arm의 Descending order Pattern을 비교분석(比較分析)함으로서 산지(産地)에 따라 종내변이(種內變異)를 인정(認定)할 수 있었다. 소나무류(類)와 잣나무류(類) group의 염색체구조상(染色體構造上)의 차이(差異)는 있었지만 외부형태적(外部形態的) 특성(特性)에 차이(差異)만큼 크지는 않았다. 염색체(染色體)는 시약(試藥)의 처리농도(處理濃度), 시간(時間)에 따라 아주 예민한 반응(反應)을 일으키므로 최우점(最遇點)을 맞추기가 어렵고 반복(反復)되는 실험(實驗)에서 정확(正確)히 동일(同一)하게 처리(處理)하기가 어렵다. 따라서 약간(若干)씩 다른 결과(結果)가 나올 수 있다. 또 preparatur 제작상(製作上)의 여러 가지 어려움 때문에 분석상(分析上)에 착오(錯誤)를 일으킬 가능성(可能性)이 있었다.
사람에 있어서 C-이질염색질의 다형성을 관찰하기 위하여, 일반환자 234명(여자 165, 남자 69)의 말초혈액백혈구을 배양하였다. 슬라이드 제작후 C-분염법(NOR-염색법, GC-분염법 포함)에 의해 염색체 1, 9, 16번 그리고 Y의 이질염색질(qh)과 D와 G군의 부수체와 단완의 변이를 관찰한후 변이를 나타낸 환자와 임상적 고찰을 함께 실시 하였다. I. 234명중 변이세포를 갖는 사람은 91명(여 68, 남 23)이었으며, 변이세포를 갖고 있지않은 사람은 143명(여97, 남 46)이다. 변이세포를 갖고있는 91명에 대한 총변이수는 125예로서 다음과 같다. 1) 염색체 1, 9, 16번과 Y의 qh변이의 수는 99예 였고, 2) D와 G군의 부수체(Satellite)와 단완의 변이의 수는 21예 였으며, 3) 염색체 9번의 편동원체 역위인 경우가 5예였다. II. 염색체 1번, 9번, Y에서 이질염색질이 크게 증가한 환자 12명의 병력을 조사하여 다음과 같은 결과을 얻었다. 1) 생식기관의 이상(reproductive failure)인 경우가 3예 (1qh+)였고, 2) 3회이상의 반복유산(habitual abortion)인 경우가 3예, 즉 inv(9)이 2예, 1qh+가 1예 이고, 3) 암의 초기상태(precancerous state)가 2예, 즉 inv(9)이 1예, 1qh+가 1예, 4) 결핵(tuberculosis)은 1예(1qh+), 5) 정상(normal)은 3예, (1qh +2예, Yqh+1예)였다. 위와같은 결과를 통하여, 본 실험에서의 염색체 1, 9, 16번 그리고 Y의 qh의 변이중 이질염색 질의 감소(qh-)는 단순한 다형현상이라 생각되며, 이질염색질의 증가(qh+)와 9번염색체의 편동원체 역위현상은 임상적 질환과 상당한 연관성이 있다고 사료된다. 추후 이러한 C-이질염색질의 다형성과 임상적 이상과의 관계에 대한 지속적인 연구가 필요하다고 사료된다.
This paper reports 3 cases with 46,XX sex reversed male. Three 46,XX hypogonadal subjects showed complete sex reversal and had normal phallus and azoospermia. We studied them under clinical, cytogenetic and molecular aspects to find out the origin of the sex reversal. Patients had markedly elevated serum follicle-stimulating hormone (FSH) and lutenizing hormone (LH) and decreased or normal range of serum testosterone. The testicular volumes were small (3-8ml). Testicular biopsy showed Leydig cell hyperplasia and atrophy of seminiferous tubules. We obtained the results of normal 46,XX, and the presence of Y chromosome mosaicism was ruled out through XY dual fluorescent in situ hybridization (FISH). By using polymerase chain reaction (PCR), we amplified short arm (SRY, PABY, ZFY and DYS14), centromere (DYZ3), and heterochromatin (DYZ1) region of the Y chromosome. PCR amplification of DNA from these patients showed the presence of the sex-determining region of the Y chromosome (SRY) but didn't show the centromere and heterochromatin region sequence. The SRY gene was detected in all the three patients. Amplification patterns of the other regions were different in these patients; one had four amplified loci (PABY+, SRY+, ZFY+, DYS14+), another had two loci (SRY+, ZFY+) and the other had two loci (PABY+, SRY+). We have found that each patient's translocation elements had different breakpoints at upstream and downstream of the SRY gene region. We conclude that the testicular development in 46,XX male patients were due to insertion or translocation of SRY gene into X chromosome or autosomes.
Ji-Yoon Han;Seong-Wook Kang;Sejin Oh;Yumi Lee;Myoung-Jae Shin;Sukyeung Lee;Seong-Woo Cho
한국작물학회지
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제68권3호
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pp.216-223
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2023
This study aimed to identify and compare the characteristics of Elymus humidus on common wheat (Triticum aestivum L. cv. Chinse Spring, CS). The seed length, width, height, and weight of E. humidus were smaller than those of the CS. In particular, the germination rate of E. humidus was substantially lower than that of CS. In the anatomical dissection of the leaf, E. humidus showed a considerably different xylem diameter of the main vascular bundle in the main vein; however, there was no difference in the phloem of the main vascular bundle compared with the xylem and phloem of the main vascular bundle in the main vein of CS, although E. humidus showed a leaf structure similar to that of CS. In addition, E. humidus had a thinner epidermis than that of CS. Regarding stomatal traits, E. humidus showed a graminoid stomata type similar to that of CS. On the adaxial and abaxial sides, the density, length, and width of the stomata in E. humidus were smaller than those in CS, whereas the distance between stomata in E. humidus was greater than that in CS. The chromosomes of E. humidus were classified as long and short based on their respective lengths. Long chromosomes were classified based on the ratio of the long arm to the short arm e.g., 1:1 or 2:1. Short chromosomes showed the same trend and some short chromosomes were microsatellites. To evaluate genetic diversity, 38 barley EST markers with polymorphisms between E. humidus and CS were selected from 236 barley EST markers.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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