Oxidative stress in skin cells can induce the formation of reactive oxygen species (ROS), which are critical for pathogenic processes such as immunosuppression, inflammation, and skin aging. In this study, we confirmed improvements from gamma-irradiated silk sericin (I-sericin) and gamma-irradiated silk fibroin (I-fibroin) to skin cells damaged by oxidative stress. We found that I-sericin and I-fibroin effectively attenuated oxidative stress-induced ROS generation and decreased oxidative stress-induced inflammatory factors COX-2, iNOS, tumor necrosis factor-α, and interleukin-1β compared to the use of non-irradiated sericin or fibroin. I-sericin and Ifibroin effects were balanced by competition with skin regenerative protein factors reacting to oxidative stress. Taken together, our results indicated that, compared to non-irradiated sericin or fibroin, I-sericin, and I-fibroin had anti-oxidation and antiinflammation activity and protective effects against skin cell damage from oxidative stress. Therefore, gamma-irradiation may be useful in the development of cosmetics to maintain skin health.
Sericin은 실크를 싸고 있는 고분자 수용성 당단백질로서 세포배양에 사용되며 세포분화를 촉진한다. 본 연구의 목적은 갑상선세포(FRTL-5)에서 thyroglobulin (Tg)의 분비에 sericin이 영향을 주는지를 알려고 한다. Sericin에 의해서 Tg의 분비가 촉진되었지만 Tg-mRNA의 발현은 촉진되지 않았다. 이런 상태에서 소포체 샤페론(Bip & calreticulin)과 소포체 막 단백질(IRE1, PERK & ATF6)의 발현이 증가한 것이 확인되었다. 한편 IRE1의 하부 신호전달자인 XBP1의 mRNA splicing 이 약하게 확인되었지만 PERK의 하부 신호전달자인 $eIF2{\alpha}$의 인산화는 일어나지 않았다. 그리고 sericin은 MTT assay 결과 cell viability을 촉진시키는 것도 확인되었다. 위의 결과는 sericin은 재조합 단백질생산에 유용하게 이용될 수 있는 새로운 생체물질로 증명되었다.
본 연구에서는 아토피 피부염 동물 모델인 NC/Nga mice에 실크단백질 sericin과 fibroin을 식이 공급 후 피부의 세라마이드 함량 및 관련인자 발현 변화를 정상대조군인 BALB/c mice 및 아토피 피부염 대조군과 비교 분석하였다. 세라마이드 함량은 아토피 대조군인 CA군이 정상대조군 C군보다 현저히 낮았으나, 정제된 건조 분말을 별다른 처리 없이 그대로 실크단백질 sericin을 식이공급한 S군은 정상대조군인 C군 이상의 수준으로 높였으며, 실크단백질 fibroin(F군)은 세라마이드 함량을 정상대조군 수준이상으로 올려주지는 못하였다. 세라마이드 합성효소인 SPT의 mRNA 및 protein 발현은 아토피 대조군인 CA군은 정상대조군인 C군보다 높았으나, 실크단백질 공급군인 S군 및 F군은 모두 정상대조군 C군보다 현저히 낮았다. 반면, 세라마이드 분해효소인 ceramidase의 mRNA 및 protein 발현은 아토피 대조군인 CA군은 정상대조군인 C군보다 높았으나, 실크단백질을 식이섭취한 S군 및 F군에서는 정상대조군인 C군과 유사한 수준으로 CA군에 비해서는 유의적으로 낮았다. 결론적으로 실크단백질 sericin의 10주간 식이섭취는 아토피 피부염 동물모델 NC/Nga mice 표피의 세라마이드 함량을 정상대조군 수준 이상으로 증가시켰으며, 궁극적으로 표피의 장벽기능을 정상대조군의 수준으로 변화시켰다. 이는 serine이 다량 함유되어있는 실크단백질 sericin을 공급에 의해 증가되었는데, serine은 그 자체로서 보습기능을 하여 표피의 장벽기능을 보완하였기 때문에 SPT에 의한 생합성은 불필요하였으며 또한, ceramidase에 의한 세라마이드 분해를 정상수준이하로 억제하여 세라마이드의 생성보다는 분해억제에 의한 것으로 여겨진다.
실크 세리신 단백질을 추출정제하여 새로운 기능성 소재로 활용하기 위하여 세리신 추출법에 따른 세리신의 특성을 분석하고 약리효능과 피부친화성 소재로의 응용 가능성을 관능평가를 통하여 조사한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 실크 세리신 단백질을 효과적으로 추출하는 방법은 NaOH(0.02wt.%)로 처리하는 방법과 질소공기 하에서 식용효소인 Flavourzyme 3%로 처리하는 방법이 연감을 25wt.% 내외로 거의 100% 세리신을 회수하였다. 2. 추출된 세리신의 분자량 분포는 10,000-30,000 범위였으며 용해도는 90 wt.% 이상이었다. 또한 Actinase 등 단백질 분해 효소로 처리하여 분자량 2,700-4,200 의 저분자화 세리신을 얻을 수 있었으나 아미노산 조성은 고온고압 추출 세리신과 큰 차이가 없었다. 3.세리신의 항산화, 혈당강하 및 알콜대사에 미치는 영향을 살펴본 결과 유의성 있는 항산화 효과를 나타내지는 않았으나 세리신 투여시 sucrose와 maltose에 의하여 유발되는 혈당을 각각 62.6%, 41.5% 낮추는 효과를 나타내었다. 4. 피부친화성 소재로서 세리신의 활용가능성을 검토하기 위하여 중금속 함량을 측정한 결과 활성탄이나 wool filter를 이용함으로서 효과적으로 중금속을 제거할 수 있었으며, 세리신을 포함한 비누와 입욕제에 대한 관능평가 결과 세정력, 기포성, 세면후 피부보습성 등이 우수한 것으로 판정되어 실크 세리신 단백질은 피부친화성 미용 소재로 적용이 가능할 것으로 확인되었다.
세리신은 누에고치에서 추출한 단백질로 많은 건강상의 이점을 가지고 있다. 본 연구는 화장품 소재로서 누에고치에서 유래된 세리신 표준품의 항주름 활성 및 항염증 활성을 평가하기 위해 수행되었다. 세리신의 항산화 효과는 DPPH 및 ABTS 측정법에 의해 측정되었다. 또한 대식세포인 Raw 264.7 cell에서의 세포 생존율을 확인하였으며, lipoplyscaccharide를 이용하여 유도된 염증반응을 이용하여 세리신의 항염증 효과를 조사하였다. 그 결과 세리신은 DPPH, ABTS에서 항산화 활성을 보였으며 세포 독성을 가지지 않은 1,000 ㎍/mL의 농도에서 NO를 억제하였다. 종합하여 세리신은 항산화 활성을 가지며 항노화 및 항염증 화장품의 우수한 소재가 될 수 있음을 보여준다.
실크단백질 식이공급이 동물대장암에 미치는 효과를 알아본 결과 다음과 같은 결과를 얻을 수 있었다. 1. 동물 대장암에 투여한 식이공급용 선발 실크단백질의 피브로인 및 세리신 단백질은 각각 Mw 65,000 내외의 피브로인 및 Mw 100,000만 내외의 세리신 단백질이며, 동물사료의 경우, 섭식 등 물성 등이 작년대비 개선된 3% 첨가된 전용 사료를 조제하여 섭식하도록 하였다. 2. 1,2-DMH에 의한 동물 대장암 유발(1회/1주, 4회 주사)후 6주 시료 투여에 있어서 대장암 유발군(CA)의 경우, 체중변화 및 식이 섭취량의 관계인 식이효율은 세리신 섭취군(S)의 경우 정상군(C)의 85% 수준을 나타내었다. 3. 동물대장암 조직의 조직관찰에 있어서는 대장암 조직의 COX-2 발현을 염색한 결과, 대장암 유도군(CA)의 경우 확실한 COX-2에 의한 발현을 나타내었으며, 세리신 섭취군(S)의 경우는 그 정도가 미비함을 나타내어 대장암에 효과가 있음을 나타내었다. 4. 대장암 인자변화를 정량적으로 확인한 결과, 정상군(C)에 비하여 대장암 유발군(CA)은 확실한 7배 정도의 COX-2량이 확인되었으며, 세리신 섭취군(S)의 경우는 유발군(CA) 대비 1/2 이하 수준으로 줄어듬을 확인할 수 있어서 금후 대장 질환 관련 소재 개발 가능성을 나타내었다.
Free amino acids in epidermis function as a major component of Natural Moisturizing Factor (NMF), which maintains the optimal level of water in skin even at the low humidity. In fact, the depletion of free amino acids is reported in the epidermis of atopic dermatitis, the skin condition involving dryness. As an effort searching the dietary source for improving the level of water and free amino acid in epidermis, the dietary effects of silk protein, sericin (S) and fibroin (F) on trans epidermal water loss (TEWL), and plasma and epidermal levels of free amino acids were compared in this study. Thirty of male NC/Nga mice, an animal model of atopic dermatitis, were divided into three groups: group CA as an atopic control with control diet, group S: 1% sericin diet and group F: 1% fibroin diet. Ten of male BALB/c mice were served as group C (control group) with control diet. All mice were fed on diet and water ad libitum for 10weeks. Dry skin condition was established in group CA as TEWL was increased (148.7% of group C). In parallel, epidermal level of glutamate, one of major amino acids functioning as NMF, was dramatically decreased and epidermal levels of methionine and alanine were inversely elevated. Dietary supplementation of sericin (group S) reduced TEWL at the similar level with group C and increased epidermal levels of glutamate as well as serine and glycine, the other major amino acids as NMF. Despite a marked decrease of methionine and alanine, the reduction of TEWL and epidermal levels of glutamate, serine and glycine of group F were less than of group S. Furthermore, in contrast to similar levels of other free amino acids in plasma and epidermis of group S and group C, plasma and epidermal levels of other free amino acids, specifically phenylalanine, isoleucine, cysteine and tyrosine in epidermis of group F, were significantly higher than of group C. Together, our data demonstrate that dietary supplementation of sericin is more effective at improving dry skin condition that paralleled with the normalization of free amino acids in plasma and epidermis of NC/Nga mice.
Silk sericin protein was hydrolyzed by seven proteolytic enzymes in order to examine the effectiveness of the hydrolysates in binding calcium. The amino acid nitrogen content of hydrolysates from Flavourzyme was higher than that for other enzymes, and its calcium binding capacity showed a dose-dependent increase. We examined the effects of calcium binding peptide from sericin hydolysates on the bioavailability of Ca-deficient rats. Three-week-old male rats were fed an Ca-deficient diet for three weeks. Rats were divided into four groups (DD: non-treated group on calcium deficient diet; DD+MC: milk-calcium treated group; DD+OC: organic calcium made using sericin hydolysates; and DD+IC: inorganic calcium ($CaCl_2$). After oral administration of calcium supplements for one week, the calcium content of the serum and liver were significantly higher in DD+OC ($101.7{\mu}g$/mL and $49.3{\mu}g$/mL) and DD+MC ($83.6{\mu}g$/mL and $42.8{\mu}g$/mL) than DD ($86.3{\mu}g$/mL and $43.4{\mu}g$/mL). The alkaline phosphatase (ALP) content in the treated groups was significantly lower than DD, but no significant difference among groups was shown. Aspartate aminotransferase (AST) levels did not show any significant difference between groups. Alanine aminotransferase (ALT) levels were significantly reduced compared to the DD group. In conclusion, binding calcium to peptides from sericin hydrolysates seems to improve its bioavailability, and to hasten the cure of calcium deficiency in experimental rats.
본 연구의 목적은 나노복합막을 제조하여 가수분해된 세리신 용액에 함유되어 있는 염의 제거 거동을 살펴보는 것이다. 계면중합법으로 나노복합막을 제조하고 상용화되어 있는 나노복합막과 탈염 거동을 비교하였다. 세리신 용액은 단백질 분해효소에 의해서 분해하여 저분자화하였고 전기영동에 의해 분자량 분포를 살펴보았다. 상대투과유량을 조사하여 나노복합막의 막오염 정도를 살펴보았다. 기공크기가 큰 나노복합막이 탈염에 효율적인 것을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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