• Journal of Chest Surgery
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• 제40권4호
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• pp.264-272
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• 2007

배경: 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)는 혈관평활근세포(vascular smooth muscle cell)의 증식과 이동을 촉진함으로써 혈관신생에 중요한 역할을 한다. 당뇨병은 VEGF의 발현과 연관되어 정상 혈당상태에서 보다 세포의 증식을 더욱 촉진시킨다. 당뇨병쥐에서 VEGF 수용체의 선택적 차단이 손상된 혈관에서 신내막 형성과 혈관평활근세포의 이동에 미치는 영향에 대해 알아보고자 했다. 대상 뜻 방법: 당뇨병 쥐의 경동맥 풍선손상 모델에서 위약을 투여하거나, 혈관내피 성장 인자 수용체-1(VEGFR-1)에 선택적으로 작용하는 항-Flt-1 펩타이드(anti-Flt-1 peptide; Gly-Asn-Gln-Trp-Phe-Ile)를 풍선손상 2일 전부터 0.5mg/kg의 용량으로 2주간 매일 투여한 군으로 나누어 Hematoxylin-Eosin 염색을 하여 신내막의 형성정도와 혈관내강의 협착정도를 비교하였으며, proliferative cell nuclear antigen (PCNA)에 대한 면역조직화학염색법을 시행하여 세포의 증식정도를 관찰하였다. 혈관평활근세포를 고혈당환경에서 배양하고 transwell assay를 시행하여 혈관평활근세포의 이동 정도를 측정하였다. 고혈당 환경에서 자라고 있는 혈관평활근세포에 50ng/mL의 VEGF를 단독 또는 3ug/mL의 항-Flt-1 펩타이드와 함께 처리하고 일정시간이 지난 후 matrigel filter를 통과한 세포를 세어 아무런 처치를 받지 않은 세포가 이동한 정도와 비교하였다. 또한, 혈관평활근세포에 세포이동 정도 측정 시와 같은 처리를 한 후, RNA를 분리하고 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)을 시행하여 기질금속단백분해효소(matrix metalloprotenase, MMP)의 발현 정도를 관찰하였다. 결과: 신내막의 면적은 위약 투여 쥐는 $0.24{\pm}0.03 mm^2$이었으나, 항-Flt-1 펩타이드의 처리에 의해 $0.15{\pm}0.04 mm^2$로 유의하게 감소하였으며(p<0.01), 신내막 형성에 따른 내강의 협착 정도도 위약 투여 쥐는 $61.85{\pm}5.11%$, 항-Flt-1 펩타이드 투여 쥐는 $36.03{\pm}3.78%$로 항-Flt-1 펩타이드 투여에 의하여 유의하게 감소하였다(p<0.01). 신내막의 전체 세포수에 대한 PCNA(+)인 세포를 백분율로 구하였으며, 위약 투여 쥐와 항- Flt-1 펩타이드 투여 쥐에서 각각 $52.82{\pm}4.20%,\;38.11{\pm}6.89%$로 나타나 항-Flt-1 펩타이드를 투여한 쥐에서 PCNA(+)인 세포가 유의하게 적음을 보이고 있다(p<0.05). 혈관평활근세포의 이동 정도 측정에서는 항-Flt-1 펩타이드 처리에 의하여 VEGF에 의한 혈관평활근 세포의 이동이 유의하게 감소하였다(p<0.01). 또한, 항-Flt-1 펩타이드 처리에 의하여 VEGF에 의한 MMP-3와 MMP-9 mRNA의 발현 증가가 억제되었다. 결론: 항-Flt-1 펩타이드는 당뇨병쥐의 경동맥손상모델에서 신내막 형성을 억제하였으며, 고혈당 환경에서 배양된 혈관평활근세포의 이동과, MMP-3와 MMP-9의 활성을 억제하였다.

• Laboratory Medicine Online
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• 제7권1호
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• pp.13-19
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• 2017

배경: 저자들은 FLT3-ITD (fms-like tyrosine kinase-internal tandem duplication) 돌연변이의 정량 및 반복 염기 길이를 동시에 측정하는 정량 절편 분석법(fragment analysis)의 민감도를 평가하고, 분석적 성능을 검증하였다. 방법: FLT3-ITD 돌연변이의 정량과 수는 절편분석법으로 측정하였다. 변이 대립유전자와 정상 대립유전자를 혼합한 계대희석 표준물질로 절편 분석법, 일반 PCR법, 염기서열분석법의 FLT3-ITD 변이 검출한계를 측정하였다. 정상 공여자 50검체를 이용하여 특이도를 평가하였다. 급성골수성백혈병 환자의 481검체에 대하여 절편 분석법과 일반 PCR법으로 검사를 시행하고 그 결과를 비교 분석하였다. 결과: 절편 분석법의 돌연변이 최소 검출 농도는 5%였으며, 일반 PCR 검사법과 직접염기서열분석법은 각각 10%, 20%의 결과를 보였다. 급성골수성백혈병 환자의 481 검체를 분석한 결과, FLT3-ITD는 40.1% (193/481)에서 양성이었다. 변이 대립유전자의 정량값은 1.7-94.1% (중앙값 28.2%)로 다양하였으며, 반복 염기의 길이의 범위는 14bp-153 bp (중앙값 49bp)였다. 일반 PCR 검사법과 비교한 결과 방법간 일치도는 97.7% (470/481)였다. 절편 분석법이 일반 PCR 검사법에 비해 더 높은 민감도를 보였고, 11건의 돌연변이가 더 검출되었다. 이 중 7검체는 변이 대립유전자의 양이 10% 미만으로 일반 PCR 검사에서 검출되지 않았다(3.3-9.5%). 또 다른 불일치 세 검체에서는 PCR inhibitor의 영향으로 일반 PCR 방법에서 위음성 결과를 보였으며, 다른 한 검체는 돌연변이 중복 길이가 14 bp로 매우 짧아 일반 PCR에서 정상 밴드와 구별되지 않는 경우였다. 결론: 본 연구에서 저자들이 사용한 절편 분석법은 FLT3-ITD 돌연변이의 정량값과 중복된 길이를 동시에 측정할 수 있는 검사법으로, 민감하고 정확하여 급성골수성백혈병 환자에서 FLT3-ITD의 진단 및 추적 검사에 유용할 것으로 기대된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제13권9호
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• pp.4215-4220
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• 2012

AML (Acute myeloid leukemia) is a form of blood cancer where growth of myeloid cells occurs in the bone marrow. The prognosis is poor in general for many reasons. One is the presence of leukaemia-specific recognition markers such as FLT3 (fms-like tyrosine kinase 3). Another name of FLT3 is stem cell tyrosine kinase-1 (STK1), which is known to take part in proliferation, differentiation and apoptosis of hematopoietic cells, usually being present on haemopoietic progenitor cells in the bone marrow. FLT3 act as an independent prognostic factor for AML. Although a vast literature is available about the association of FLT3 with AML there still is a need of a brief up to date overview which draw a clear picture about this association and their effect on overall survival.

• IMMUNE NETWORK
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• 제7권4호
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• pp.203-208
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• 2007

Background: Angiogenesis mediated by VEGF constitutes a new target for anti-cancer therapy which has explored through different ways of intervention aiming at the blocking of the tumoral angiogenesis. In the present study, we developed the assays by which efficacies of anti-VEGF inhibitor candidates are evaluated at the various levels. Methods & Results: First, we developed two sandwich ELISAs using coated anti-VEGF Ab and soluble Flt-1 receptor fusion protein (sFlt-1/Fc). As low as 200 pg/ml of hVEGF diluted in human sera was detectable by these assays. In addition, we found that VEGF inhibitors ($2{\mu}g/ml$ of either anti-VEGF Ab or sFlt-1/Fc) completely block 5 ng/ml VEGF in these ELISAs. Subsequently, two bioassays, wound healing and HUVEC tube formation assays, revealed that anti-VEGF Ab $(1{\mu}g/ml)$ & sFlt-1/Fc Ab $(1{\mu}g/ml)$, or SU5416 (VEGFR tyrosine kinase inhibitor, $1{\mu}M$) prevents the activity of VEGF $(1{\sim}10ng/ml)$. Finally, secretion of MMP-9 by VEGF-stimulated macrophages was abolished by treatment of anti-VEGF Ab $(1{\mu}g/ml)$ in gelatin zymography. Conclusion: ELISAs together with bioassays developed in this study are appropriate for evaluation of the efficacy of inhibitors of VEGF.

• Journal of Genetic Medicine
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• 제7권2호
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• pp.138-144
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• 2010

목 적: 자궁내막의 신혈관 형성을 조정하는 혈관내피전구세포는 자궁-태반 순환에서의 신혈관 형성에 관여하는 것으로 알려져 있다. 혈관내피전구세포의 정량적 지표로 사용되는 집락생성단위(CFU)의 감소는 혈관질환의 예측 표지자로서 보고되고 있다. 본 연구에서는 정상 산모와 자간전증 산모 간에 CFU의 수적인 차이를 비교해 보고자 하였다. 대상 및 방법: 임신말기의 단태 정상 산모 26명과 자간전증산모 20명을 대상으로 혈관내피전구세포의 수를 CFU로 정량화하였다. 효소면역분석법을 이용하여 혈장내의 VEGF와 sFlt-1, PlGF 농도를 분석하였다. 결 과: CFU의 수는 정상 산모에 비해 자간전증 산모에서 매우 감소하였다[median value: 3 (range: 1-12) vs median value: 31(range:3-81) CFU/ well, P<0.001). 집락을 구성하는 대부분의 세포는 혈관내피세포의 특징적인 성질을 보였다(Ulex europaeus lectin의 발현 및 acetylated lowdensity lipoprotein의 섭취). 혈장내의 sFlt-1 농도는 정상 산모에 비해 자간전증 산모에서 매우 높은 반면(P<0.001), PlGF의 농도는 매우 낮았으며(P=0.004), sFlt-1과 PlGF의 농도는 CFU의 수와 연관성이 없었다. 결 론: 산모 말초혈액내의 CFU의 수적 감소가 자간전증 발생에 기여할 것으로 생각된다.

• 대한핵의학회:학술대회논문집
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• 대한핵의학회 2003년도 추계학술대회 및 총회
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• pp.11.1-11.1
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• 2003

• 대한방사선치료학회지
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• 제14권1호
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• pp.165-174
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• 2002

혈관내피세포 성장 인자(Vascular endothelial growth factor, VEGF)는 혈관내피세포 특이하게 성장요인으로 작용하는 물질로 알려져 있다. 전리방사선에 대한 혈관내피세포의 효과는 정상조직에 대한 반응에 있어 아주 중요한 요소일 것으로 생각된다. 본 연구는 방사선 조사에 의해 배양시킨 혈관내피세포에서 apoptosis가 유도되는지, 유도가 된다면 VEGF에 의해 apoptosis가 억제되는지 그리고 apoptosis의 억제가 어떤 경로를 경유하는지를 실험하였다. 혈관내피세포에 방사선를 조사한 결과, 대조군에 비하여 선량이 증가함에 따라 apoptosis가 증가하였다. 같은 조건하에서 VEGF는 농도 의존적으로 apoptosis를 억제하였다. Antiapoptotic factor로서 VEGF가 어떤 신호 과정을 경유하는지를 밝히고자, 혈관내피세포에 방사선을 조사하여 apoptosis를 유도하면서 Flt-1과 Flk-1/KDR receptor를 처리하였다. 그결과 VEGF에 유도된 apoptosis 억제효과가 차단되었다. Phosphatidylinositol 3'-kinase(PI3-kinase) 특정 억제 물질인 Wortmanin과 LY294002를 방사선 조사한 혈관내피에 VEGF와 함께 처리했을 때 VEGF에 의해 유도된 apoptosis를 억제하였다. 이같은 결과는 VEGF가 방사선 조사로 일어나는 세포 치사를 억제하는 중요한 역할을 담당하며, In Vivo의 실험이 더 이루어져야 할 것으로 생각된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권3호
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• pp.1247-1253
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• 2014

Mutations in the DNMT3A and IDH genes represent the most common genetic alteration after FLT3/NPM1 in acute myeloid leukemia (AML). We here analyzed the frequency and distribution pattern of DNMT3A and IDH mutations and their associations with other molecular markers in normal karyotype AML patients. Fortyfive patients were screened for mutations in DNMT3A (R882), IDH1 (R132) and IDH2 (R140 and R172) genes by direct sequencing. Of the 45 patients screened, DNMT3A and IDH mutations were observed in 6 (13.3%) and 7 (15.4%), respectively. Patients with isolated DNMT3A mutations were seen in 4 cases (9%), isolated IDH mutations in 5 (11.1%), while interestingly, two cases showed both DNMT3A and IDH mutations (4.3%). Nucleotide sequencing of DNMT3A revealed missense mutations (R882H and R882C), while that of IDH revealed R172K, R140Q, R132H and R132S. Both DNMT3A and IDH mutations were observed only in adults, with a higher frequency in males. DNMT3A and IDH mutations were significantly associated with NPM1, while trends towards higher coexistence with FLT3 mutations were observed. This is the first study to evaluate DNMT3A/IDH mutations in Indian patients. Significant associations among the various molecular markers was observed, that highlights cooperation between them and possible roles in improved risk stratification.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제22권1호
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• pp.1-9
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• 2014

Vascular endothelial growth factor (VEGF)-VEGF receptor (VEGFR) system has been shown to play central roles not only in physiological angiogenesis, but also in pathological angiogenesis in diseases such as cancer. Based on these findings, a variety of anti-angiogenic drugs, including anti-VEGF antibodies and VEGFR/multi-receptor kinase inhibitors have been developed and approved for the clinical use. While the clinical efficacy of these drugs has been clearly demonstrated in cancer patients, they have not been shown to be effective in curing cancer, suggesting that further improvement in their design is necessary. Abnormal expression of an endogenous VEGF-inhibitor sFlt-1 has been shown to be involved in a variety of diseases, such as preeclampsia and aged macular degeneration. In addition, various factors modulating angiogenic processes have been recently isolated. Given this complexity then, extensive studies on the interrelationship between VEGF signals and other angiogenesis-regulatory systems will be important for developing future strategies to suppress diseases with an angiogenic component.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제44권1호
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• pp.73-80
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• 2006

본 연구에서는 제대혈 유래의 조혈줄기세포를 효과적으로 배양하기 위한 선행 연구로서 세포 배양 환경에 따른 조혈줄기세포 증식능의 변화를 관찰하였다. 제대혈의 단핵구 세포에서 분리한 $CD34^+$ 세포를 성장인자 조성-I(이하, coc-I) (EPO, GM-CSF, SCF, IL-3) 및 성장인자 조성-II(이하, coc-II) (TPO, G-CSF, SCF, IL-6, Flt3/Flk-2 ligand)가 포함되어 있는 IMDM(Iscove's modified Dulbecco's medium) 및 무혈청 배지(serum free media, SFM)에서 배양하였으며, 우태아혈청(FBS)의 첨가 영향, 2차원 및 3차원 배양 후 각 조건에서의 세포 증식 및 콜로니 형성능을 비교하였다. 일반적으로 coc-I에서의 세포 증식 및 콜로니 증식이 coc-II에서보다 높았다. 3차원 배양(methocult)에서는 가장 높은 세포 증식($2,258{\pm}456$배)을 나타냈으며, 같은 조성의 2차원 배양(IMDM + coc-I + FBS)에서는 가장 높은 콜로니 증식(BFU-E: $652{\pm}19$, CFU-GM: $520{\pm}58$, CFU-GEMM: $339{\pm}100$배)이 나타났다. 배지를 기준으로 보면, coc-II 조성에 우태아혈청이 포함되지 않은 경우를 제외한 모든 경우에서 세포 증식 및 콜로니 증식이 무혈청 배지에서보다 IMDM에서 높았다. 결론적으로, 모든 배양 조건 중에서 'IMDM + coc-I + FBS' 및 'IMDM + coc-I'에서 가장 좋은 콜로니 증식을 보였으며, 우태아혈청의 첨가 및 2차원 배양 조건이 콜로니 증식에 더 효과적인 것으로 확인되었다. 본 연구 결과는 앞으로 조혈줄기세포의 체외 증식에 필요한 공정개발이나 생물반응기 설계에 유용한 정보를 제공할 수 있을 것으로 사료된다.