연구배경: 폐특이 전사조절 유전자인 Thyroid Transcription Factor-1 (TTF-1)유전자는 폐에 선택적인 유전자의 표현의 조절에 중요한 전사인자로 작용하고 폐의 발생에서 morphogenic protein으로서 작용한다. 그러나 현재까지 이 TTF-1 유전자의 전사인자에 대한 연구는 거의 미미하다. DNase 1 hypersensitive(DH) regions은 활동적인 염색체에 대한 중요한 표식자이며 유전자를 조절하는 많은 DNA sequences와 밀접한 관계가 있다. 방법 : 추정적인 distal regulatory elements를 밝혀 내기 위해서 TTF-1을 표현하는 인간의 폐선암 세포주인 NCI-H441을 사용해 DNase 1 hypersensitive site assay를 이용하였다. 결과 : TTF-1 유전자에는 전사의 시작부위에서 +150, -450, -800, 그리고 -1500 base pair부위에 4곳의 DH sites가 있음을 할 수 있었다. 결론 : 이상의 결과로 전사 조절부위가 TTF-1 유전자 내에 그리고 5' prime부위에 위치함을 추정할 수 있었다.
Ikaros, a transcription factor containing zinc-finger motif, has known as a critical regulator of hematopoiesis in immune system. Ikaros protein modulates the transcription of target genes via binding to the regulatory elements of the genes promoters. However the regulatory function of Ikaros in other organelle except nuclear remains to be determined. This study explored radiation-induced modulatory function of Ikaros in cytoplasm. The results showed that Ikaros protein lost its DNA binding ability after LDIR (low-dose ionizing radiation) exposure. Cell fractionation and Western blot analysis showed that Ikaros protein was translocated into cytoplasm from nuclear by LDIR. This was confirmed by immunofluorescence assay. We identified Autotaxin as a novel protein which potentially interacts with Ikaros through in vitro protein-binding screening. Co-immunoprecipitation assay revealed that Ikaros and Autotaxin are able to bind each other. Autotaxin is a crucial enzyme generating lysophosphatidic acid (LPA), a phospholipid mediator, which has potential regulatory effects on immune cell growth and motility. Our results indicate that LDIR potentially regulates immune system via protein-protein interaction of Ikaros and Autotaxin.
Li, Yue;Jiang, Zhao-Zhao;Chen, Hai-Xu;Leung, Wai-Keung;Sung, Joseph J.Y.;Ma, Wei-Jun
BMB Reports
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제38권4호
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pp.500-506
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2005
HOX11 encodes a homeodomain-containing transcription factor which directs the development of the spleen during embryogenesis. While HOX11 expression is normally silenced through an unknown mechanism in all tissues by adulthood, the deregulation of HOX11 expression is associated with leukemia, such as T-cell acute lymphoblastic leukemia. The elucidation of regulatory elements contributing to the molecular mechanism underlying the regulation of HOX11 gene expression is of great importance. Previous reports of HOX11 regulatory elements mainly focused on the 5'-flanking region of HOX11 on the chromosome related to transcriptional control. To expand the search of putative cis-elements involved in HOX11 regulation at the post-transcriptional level, we analyzed HOX11 mRNA 3'-untranslated region (3'UTR) and found an AU-rich region. To characterize this AU-rich region, in vitro analysis of HOX11 mRNA 3'UTR was performed with human RNA-binding protein HuR, which interacts with AU-rich element (ARE) existing in the 3'UTR of many growth factors' and cytokines' mRNAs. Our results showed that the HOX11 mRNA 3'UTR can specifically bind with human HuR protein in vitro. This specific binding could be competed effectively by typical ARE containing RNA. After the deletion of the AU-rich region present in the HOX11 mRNA 3'UTR, the interaction of HOX11 mRNA 3'UTR with HuR protein was abolished. These findings suggest that HOX11 mRNA 3'UTR contains cis-acting element which shares similarity in the action pattern with RE-HuR interactions and may involve in the post-transcriptional regulation of the HOX11 gene.
Numerous studies have reported that genes with similar expression patterns are co-regulated. From gene expression data, we have assumed that genes having similar expression pattern would share similar transcription factor binding sites (TFBSs). These function as the binding regions for transcription factors (TFs) and thereby regulate gene expression. In this context, various analysis tools have been developed. However, they have shortcomings in the combined analysis of expression patterns and significant TFBSs and in the functional analysis of target genes of significantly overrepresented putative regulators. In this study, we present a web-based A Functional Clustering Analysis Tool for Predicted Transcription Regulatory Elements and Gene Ontology Terms (FCAnalyzer). This system integrates microarray clustering data with similar expression patterns, and TFBS data in each cluster. FCAnalyzer is designed to perform two independent clustering procedures. The first process clusters gene expression profiles using the K-means clustering method, and the second process clusters predicted TFBSs in the upstream region of previously clustered genes using the hierarchical biclustering method for simultaneous grouping of genes and samples. This system offers retrieved information for predicted TFBSs in each cluster using $Match^{TM}$ in the TRANSFAC database. We used gene ontology term analysis for functional annotation of genes in the same cluster. We also provide the user with a combinatorial TFBS analysis of TFBS pairs. The enrichment of TFBS analysis and GO term analysis is statistically by the calculation of P values based on Fisher’s exact test, hypergeometric distribution and Bonferroni correction. FCAnalyzer is a web-based, user-friendly functional clustering analysis system that facilitates the transcriptional regulatory analysis of co-expressed genes. This system presents the analyses of clustered genes, significant TFBSs, significantly enriched TFBS combinations, their target genes and TFBS-TF pairs.
The binding ability of leaf nuclear extracts to the lighbresponsive elements (LREs) of cab promoters of Arabidopsis thaliana has been investigated. The cab promoters were fragmented with restr ction endonucleases into LRE that were identified by Mitra et al. [Plant Mol. Biol. 12, 169179 ( 1989)] and other small fragments. After end labeling with Klenow fragment, the fragments were assayed for binding with the leaf nuclear proteins that were prepared by solubilizing the purified nuclei with 0.5 M ammonium sulfate. The binding ability was assayed by mobility shift assay. To perform successful mobility shift assay, several factors affecting the interaction of protein with DNA were optimized before performing the assay. The LREs had several retardation bands. However, the other promoter fragments from the transcription start site to the far upstream region of the promoters had also retardation bands. No particular relationships could be found between the retardation band distributions and the loci of LRE. It is likely that the light-regulation of cab gene expression may be controlled by the multiple interactions of the regulatory protein factors with DNA motifs.
Himani, Himani;Ramkumar, Thakku R.;Tyagi, Shivi;Sharma, Himanshu;Upadhyay, Santosh K.;Sembi, Jaspreet K.
Journal of Plant Biotechnology
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제46권4호
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pp.255-273
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2019
Orchids are indispensable to the floriculture industry due to their unique floral organization. The flowers have two outer whorls of tepals including a lip (labellum), and two inner whorls, pollinia and gynostemiun (column). The floral organization and development is controlled at the molecular level, mainly by the MADS-box gene family, comprising homeotic genes divided into type I and type II groups. The type I group has four sub-groups, Mα, Mβ, Mγ, and Mδ, playing roles in seed, embryo, and female reproductive organ development; the type II group genes form classes A, B, C, D, and E, which are a part of the MIKCC subgroup with specific roles in florigenesis and organization. The coordinated functioning of these classes regulates the development of various floral whorls. The availability of genome and transcriptome sequence data for Phalaenopsis equestris offers an opportunity to validate the ABCDE model of flower development. Hence, this study sought to characterize the MADS-box gene family and elucidate of the ABCDE model. A total of 48 identified MADS-box proteins, including 20 type I [Mα (12), Mγ (8)] and 28 type II [MIKCC (27), MIKC*(1)] members, were characterized for physico-chemical features and domains and motifs organization. The exon-intron distribution and the upstream cis-regulatory elements in the promoter regions of MADS-box genes were also analysed. The discrete pace of duplication events in type I and type II genes suggested differential evolutionary constraints between groups. The correlation of spatio-temporal expression pattern with the presence of specific cis-regulatory elements and putative protein-protein interaction within the different classes of MADS-box gene family endorse the ABCDE model of floral development.
Plants are constantly exposed to a variety of abiotic stresses, such as drought, heat, cold, flood, and salinity. To survive under such unfavorable conditions, plants have evolutionarily developed their own resistant-mechanisms. For several decades, many studies have clarified specific stress response pathways of plants through various molecular and genetic studies. In particular, it was recently discovered that ubiquitin proteasome system (UPS), a regulatory mechanism for protein turn over, is greatly involved in the stress responsive pathways. In the UPS, many E3 ligases play key roles in recognizing and tethering poly-ubiquitins on target proteins for subsequent degradation by the 26S proteasome. Here we discuss the roles of RING ligases that have been defined in related to abiotic stress responses in plants.
In this paper, we investigate the nonlinear dynamic behavior of TPP (thiamine pyrophosphate) riboswitches in E. coli (Escherichia coli). TPP riboswitches are highly conserved RNA regulatory elements, embedded within the 5’'untranslated region of three TPP biosynthesis operons. The three operons thiCEFSGH, thiMD, and thiBPQ are involved in the biosynthesis, salvage, and transport of TPP, respectively. TPP riboswitches modulate their expressions in response to changing TPP concentration, without involving protein cofactors. Interestingly, the expression of thiMD is regulated at the translational level, while that of thiCEFSGH at both levels of transcription and translation. We develop a mathematical model of the TPP riboswitch’s regulatory system possessed by thiCEFSGH and thiMD, so as to simulate the time-course experiments of TPP biosynthesis in E. coli. The simulation results are validated against three sets of reported experimental data in order to gain insight into the nature of steady states and the stability of TPP riboswitches, and to explain the biological significance of regulating at level of transcription or translation, or even both. Our findings suggest that in the TPP biosynthesis pathway of E. coli, the biological effect of down-regulating thiCEFSGH operon at the translational level by TPP riboswitch is less prominent than that at the transcriptional level.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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