The present study has been perromed to investigate the optimal conditions for protoplast formation and regeneration of oleandomycin-producing Streptomyces antibioticus (S. antibioticus) KCTC 1081. Mycelia were grown in YME medium containing 0.2% (w/v) glycine and converted into the protoplast by incubating at 35.deg.C for 60 minutes in protoplast buffer (P buffer) containing 4 mg/ml lysozyme. The reversion of protoplasts to the normal filamentous state was examined by the growth on various synthetic agar media. A high reversion rate was obtained by incubating the protoplasts on a hypertonic agar medium containing 20 mM $Mg^{++}$, 5 mM $Ca^{++}$ and 0.3 M sucrose at 28.deg.C for 5 days. From these experiments, we established the improved regeneration medium and a protocol which supports higher and more consistent levels of regeneration of S. antibioticus protoplasts. The regenerant showed an increased antimicrobial activity compared with that of the initial strain.n.n.
Many studies on the analysis of cations in blood have been reported. However, no suitable method for the pretreatment of blood for the determination of cations by Ion Chromotography. As a result, pretreatment method that the membrane filtration of plasma a diluted 1 to 100 fold acidified pH 3.5 was found to be the most suitable. The recoveris of monovalent cations in blood were yield 101%(Na$^{+}$). 102%(NH$^{+}_{4}$) and 101%(K$^{+}$) Determinations of divalent cations(Mg and Ca ions) in blood by Ion chromatography were summarized as followed conditions Separator Column : CS$_{3}$. Suppressor Column : CMMS. Eluent conen : 25m M-HCl/2mM-Histidine. Regenerant conen: 40mM-Ba(OH)$_{2}$.
바이오에너지작물의 중요한 소재를 제공하는 화본과 식물인 홍띠(Imperata cylindrica 'Rubra')의 기내재생 식물체의 유전적 안정성을 조사하고자 생장점 부위를 기내배양하여 재분화시킨 녹색 재생식물체의 변이성을 ISSR 마커로 조사하였다. MS(Murashige and Skoog, 1962) 배지에 식물체 기부의 생장점 부위를 적출하여 캘러스를 유도하고(0.1 mg/L 2,4-D와 2 mg/L BA), 캘러스 증식(0.1 mg/L 2,4-D와 0.05 mg/L BA), 신초 재분화(0.01 mg/L NAA와 2 mg/L BA) 후 MS 배지에서 발근시켜 재분화 식물체를 유도하고 100% 활착시켰다. 대조구인 모식물체 홍띠 8개체, 1년간 노지 포장에서 재배중인 재분화 녹색 식물체 10개체와 실험실 내 화분에서 재배중인 재분화 녹색 식물체 10개체, 총 28개체에 대하여 ISSR 분석한 결과 유전적 다형성은 재분화 식물체가 실내포트 재배식물체 4.1% 및 노지 재배식물체 3.1%로 0%인 대조구보다 높게 나타났다. 또한, 총 28개체들 간의 유전적 유사도를 평가한 결과, 유전적 유사도 지수는 0.919~1.0 사이에 분포하며, 평균 0.972로 유전적 충실도가 높게 나타났다. 군집분석 결과 노지에서 재배한 재분화 식물체와 모식물체(대조군)가 독립적으로 유집되었다.
주요 약용작물로 사용하고 있는 천궁의 경정을 기내배양 하여 건전한 종경을 대량으로 증식하는데 적함한 배양조건을 구명하기 위하여 실험한 결과를 요약하면 7월에 채취한 재료를 1%의 NaOCI에 20분간 표면살균한 후, carbenicillin 500 mg/L, BA 1.0 mg/L 와 $GA_3$ 1.0 mg/L가 첨 가된 1/2 MS배지가 오염율 감소와 신초 재분화율을 높이는데 효과적이었고, 재분화한 신초의 기내증식은 BA 0.5 mg/L와 당 60 g/L가 함유된 1/2 MS가 양호하였으며 이들 유묘는 1/2 MS에 NAA 3.0 mg/L 단용배지에서 배양하였을때 발근하였다.
Park, Woo-Jin;Kang, Young-Min;Min, Ji-Yun;Park, Dong-Jin;Kim, Yong-Duck;Karigar, C.S.;Choi, Myung-Suk
한국약용작물학회지
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제12권5호
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pp.384-390
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2004
An in vtro nucellar polyembryo propagation method was established with mature seed of the Citrus junos Sieb. 7-8 nucellar polyembryos per seed were induced on MS basal medium without plant growth regulators. The polyembryos developed to complete plantlets on teatment with IBA. These shoots grew further in MS medium without plant growth regulators. Rooting of shoots occurred on MS medium supplemented with IBA. These plantlets were successfully transplanted to small plastic pot containing soil mixture. Somatic embryos were induced from nucellar polyembryo and maturation occurred spontaneously from proliferating cultures on MS medium without growth regulators. Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) marker analysis of in vitro and in vivo grown junos orange showed identical polymorphism indicative of their genetic stability. The RAPD polymorphism produced revealed same banding pattern in each regenerant. Hence, propagaton of junos orange by nucellalr polyembryos was efficient and produced in genetically stable plants under in vitro conditions.
An efficient system for the regeneration of adventitious shoots from in vitro cultured leaf sections of Lycium chinense Miller was developed and silent somaclones from the regenerants detected with RAPD method. Among the eight media tested (B5, SH, N&N, 1/2MS, MS, 3/2MS, GD and WPM), and four cytokinins (BA, kinetin, 2ip and zeatin) with different concentrations (1, 5, 10, 20, 30 and 40 $\mu{M}$), 1/2 MS medium supplemented with 20 and 30 $\mu{M}$ zeatin showed the best regeneration frequency (100% and 93.7%) and higher average number of shoots (9.0 and 9.4). All regenerants easily elongated after subculturing on 1/4MS without growth stimulants and produced spontaneous adventitious roots from their basal parts. With phenotypically normal 40 regenerants, RAPD analysis with 15 different random primers was performed to examine the cryptic somaclonal variants. No substantial differences in banding patterns were found in the amplified polymorphic DNAs implying no DNA changes during dedifferentiation into adventitious shoots. However, one (OPF-4) of the 15 primers detected silent somaclonal variation in one regenerant in which two different polymorphic bands did not appear when compared with the rest regenerants. The results indicate that regenerantion via intervening callus phase can be used to establish true-to-type planting stocks for homogeneous population.
Seo, Bong-Bo;Lee, Seon-Hee;Park, Jae-Hong;Kim, In-Sun;Song, Seung-Dal
Journal of Plant Biology
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제39권4호
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pp.231-235
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1996
The calli obtained from the bulbs of A. victorialis var. platyphyllum on MS based medium containing 2 mg/L 2, 4-D and 1mg/L BA. Plants from calli were regenerated on MS basal media supplemented with combinations of NAA and four kinds of cytokinin, BA, zeatin, kinetin and 2iP, and with only each cytokinin. The good response of shoot regeneration was observed in the media with combinations of NAA and BA or zeatin, and with only BA or zeatin. Shoot regenerating response in the medium with combinations of NAA and BA or zeatin, and with only BA or zeatin. Shoot regerating response in the medium with combinations of NAA and BA or zeatin was about two times higher than that in the mediuim with only BA or zeatin. From the karyotypic analysis of the regenerated plants, abnormal diploids, aneuploids and mixoploid with structural aberrations were investigated. The somaclonal variants (AV 16-04, AV 13-03) were shown the considerable differences from normal diploid regenerant (AV 18-03) in the external morphology.
Corydalis remota for. peatinata의 꽃자루에서 캘러스를 유도한 후 MS기본배지에 생장조절물질을 첨가하여 체세포 배발생 및 재분화를 시도하였다. 생장조절 물질에 따른 캘러스 유도율을 비교하면 2,4-D 2.0 mg/L 에 zeatin 2.0 mg/L를 혼용 처리한 배지에서 아주 양호한 캘러스 유도 및 생장율을 나타냈다. 식물생장조절물질 또는 호르몬 첨가에 의한 체세포 배의 발생율은 광조건에서 cytokinin류의 농도가 0.5mg/L 단독 첨가한 배지에서 가장 높았다. 또한 발생된 부정배중 MS기본배지에 zeatin 1.0mg/L을 단독처리한 경우가 가장 쌍자엽형성율이 높은 것으로 나타났다. 또한 2,4-D를 미량 첨가하고 cytokinin류를 혼용첨가한 배지나 BAP를 단독 처리한 배지에서는 소식물체의 배지 접지면인 뿌리부분에 활발한 2차 배발생이 나타났다.
더덕 (Codonopsis lanceolata)의 자엽기의 체세포배 는 생장조절제 를 함유하지 않은 MS고체배지에 배양하였을 때 완전한 식물체로 분화되었다. 체세포배로부터 줄기 재분화에는 2% sucrose가, 뿌리의 분화에는 8% sucrose가 가장 좋았다. 줄기의 생장은 2% sucrose가, 뿌리의 생장은 4% sucrose 농도에서 가장 좋았다. 자연산 더덕뿌리, 재분화 개체의 뿌리, 배발생 캘러스, 비배발생 캘러스에서의 saponin계 물질의 함량을 HPLC로 조사한 결과 각 조직간의 물질 함량은 커다란 차이를 보였으며, 고농도의 sucrose 함유 배지에서 재분화된 뿌리의 saponin계 물질의 함량은 자연산뿌리와 비슷하였다. 세포분화가 진행됨에 따라 saponin계 물질의 함량은 급격히 감소하였다. 이러한 결과는 식물의 유용물질 생산에 효율적으로 활용될 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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