Fifty percent ethanol extract of Lythrum salicaria Linne root (LSR) was tested in vitro on antioxidant activity, and furthermore was investigated on antioxidative and fibrosis protecting activities in $CCL_4$-induced liver fibrosis rat model. Ratio of hepatic GSH/GSSG (reduced glutathione/oxidized glutathione) as bio-parameter of antioxidant level in $CCL_4$ plus LSR-treated rats for 6 weeks significantly increased from 2.8- to 5.7-fold than that of $CCL_4$-treated rats at p < 0.05. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) contents in $CCL_4$ plus LSR-treated rats ranged from 1.57- to 2.19-fold of normal rats and were lower than those in $CCL_4$ plus silymarin-treated rats ($1.78{\sim}2.46$-fold of normal rats) (p < 0.05). Amounts of hydroxyproline of liver tissue showing the content of total collagen, a parameter of fibrosis, in $CCL_4$ plus LSR-administrated rat livers were $4.9{\sim}8.8{\mu}g$/mg ($-47{\sim}-71%$, compared with that in $CCL_4$-treated rat livers ($16.6{\mu}g$/mg tissue), which were significantly lower than those in $CCL_4$ plus silymarin-administrated rats being $8.4{\sim}11.7{\mu}g$/mg ($-30{\sim}-50%$). This collagen reducing effect of liver tissue in $CCL_4$ plus LSR-treated rats was supported by histological observation using microscopy assay. From the results, we conclude that the root of L. salicaria have efficient antioxidant potential and effective antifibrotic activities.
To evaluate the influence of hepatic oxygen free radical systems on liver injury by topical p-phenylenediamine (PPD) application on rat skin, PPD (25 mg/16.5 $\textrm{cm}^2$) was topically applied to the abdominal region 5 times every other day and sacrificed. By PPD treatment, increasing rate of liver weight/body weight (%), serum activities of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase and decreasing rate of microsomal glucose-6-phosphatase activity were higher in the rats fed tungstate supplemented diet than those fed a standard diet. These findings indicate that group fed tungstate supplemented diet have more severe liver injury compared with group fed standard diet on topical PPD application. However, the activities of oxygen free radical generating enzymes such as xanthine oxidase (XO) and cytochrome P450 dependent aniline hydroxylase and those of oxygen free radical scavenging enzymes were not found to be different between these two animal groups. In the present study, a novel monitoring method to detect the generating of oxygen free radicals in liver extract was devised. Throughout this method, the oxidized PPD produced by oxygen free radicals was determined colorimetrically. The increasing rate of PPD oxidation by liver homogenate was higher in tungstate fed animals than in standard diet fed ones. Among the fractionations of liver extract, the mitochondrial and postmitochondrial fractions in the liver extract of tungstate fed animals led to a higher availability of PPD oxidation by PPD treatment compared with standard diet fed ones. In conclusion, these results suggest that an enhanced liver injury in tungstate fed animals treated with PPD may be due to oxygen free radicals produced in other systems except oxygen free radicals generating from cytosolic XO system. Especially, oxidative availability by PPD can be used for oxygen free radical detection in some tissue.
Purpose : 백서의 간에서 나타나는 방사선조사에 의한 조직손상에서 IL-1, IL-4, IL-6, TNF 등의 cyokine과 apoptosis와의 상관관계를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법 : 백서의 전신에 8 Gy의 방사선조사 후 각 1일, 3일, 5일, 7일, 14일에 간 조직의 변화를 현미경으로 관찰하고, apoptosis의 발현빈도를 확인하였으며, IL-1, IL-4, IL-6군 및 TNF 등의 cytoklne에 대해서 면역조직화학염색 방법과, 간 조직과 혈액에서의 IL-6의 생물학적 활성도 측정 및 방사선 면역측정 등의 실험을 하였다. 결과 : 방사선조사에 의한 간 손상은 광학현미경 소견상 방사선조사 후 1일부터 관찰되어, 3일과 5일에 염증세포의 침윤과 함께 가장 심하게 나타났고, 7일 이후부터는 섬유화가 시작되었다. Apoptosis의 발현빈도는 광학현미경 소견과 in situ detection method 모두에서 방사선조사 후 1일에 가장 높게 나타났다. 면역조직화학 염색소견상, IL기과 TNF의 발현은 조사 후 1일과 3일에 보였고, IL-4는 모든 군에서 발현되지 않았다. IL순는 방사선조사 후 1일과 3일에 강양성으로 나타난 후 점차 감소하였고, 간 조직과 혈액에서의 IL푼의 생물학적 활성도와 방사선면역측정에서도 방사선조사 후 1일에 가장 높고 이후 점차 감소하였다. 결론 : 간에 방사선조사를 시행한 결과 IL-1, IL-6군 및 TNF와 같은 cytokine의 발현이 증가되었으며, 이들 cylokine의 분비가 apoptosis를 유도함으로써 apoptosls가 방사선조사에 의한 간 손상에 중요한 기전의 하나로 작용할 것으로 생각된다.
Silymarin has been introduced fairly recently as a hepatoprotective agent. But its mechanisms of action still have not been well established. The aim of this study was to make alcoholic fatty liver model of rats in a short time and investigate silymarin's protective effects and possible mechanisms on alcoholic fatty liver for rats. The model of rat's alcoholic fatty liver was induced by intragastric infusion of ethanol and high-fat diet for six weeks. Histopathological changes were assessed by hematoxylin and eosin staining (HE). The activities of alanine transarninase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), the levels of total bilirubin (TBIL), total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) in serum were detected with routine laboratory methods using an autoanalyzer. The activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) and the level of malondialdehyde (MDA) in liver homogenates were measured by spectrophotometry. The TG content in liver tissue was determined by spectrophotometry. The expression of nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$), intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and interleukin-6 (IL-6) in the liver were analyzed by immunohistochemistry. Silymarin effectively protected liver from alcohol-induced injury as evidenced by improving histological damage situation, reducing ALT and AST activities and TBIL level in serum, increasing SOD and GPx activities and decreasing MDA content in liver homogenates and reducing TG content in liver tissue. Additionally, silymarin markedly downregulated the expression of NF-${\kappa}B$ p65, ICAM-1 and IL-6 in liver tissue. In conclusion, Silymarin could protect against the liver injury caused by ethanol administration. The effect may be related to alleviating lipid peroxidation and inhibiting the expression of NF-${\kappa}B$.
Oxidative stress and its consequent lipid peroxidation exert harmful effects, which have been currently involved in the generation of carbon tetrachloride (CCl₄)-induced fibrosis(cirrhosis). In this study, it was investigated whether dried extract of 田螺(Concha Cipangopaludinae; CC) has liver functional improvement, antioxidative and antifibrotic effect in rats those were induced liver fibrosis by CCl₄ administration. The female Sprague-Dawley rats were divided into 3 groups(Normal, AC, AC-CC) and were observed in 6 weeks. Except for normal group, liver fibrosis(cirrhosis) in rats were developed by CCl₄ administration(0.8 ㎖/rat/week). And the rats were treated with prepared CC(p. o. 2 ㎖/day/rat). At the time of sacrifice, the liver, kidney and spleen were weighed and the ratio of organ weight/body weight was calculated. The MDA, hyp and biochemical parameters(AST, ALT, ALP, t-bili) were measured in sera and liver tissue of rats. The strong yellow color of urine was observed in all CCl₄-treated group compared with normal group, but jaundice didn't appear in CCl₄-treated group. The mortality of CCl₄-treated group is very low(<13%) during 6 weeks of observation time. The ratio of liver/body as well as the weight of liver in CCl₄-treated rats significantly increased compared with that in normal group(p<0.001). The level of clinical parameters in sera of all liver fibrosis(cirrhosis) developed rats were significantly higher than that of normal group(p<0.001-0.05). Especially the value of BUN, ALP, t-bilirubin in AC-CC group showed 20.9%, 19.6%, 47.9% lower than that in AC group. The content of hyp in CCl₄-treated rats was significantly higher than normal group(p<0.001~<0.05), and showed 12.2% lower value in the AC-CC group than AC group(p<0.05). The production of lipid peroxidation(MDA) in sera and liver tissue significantly increased under the fibrotic(cirrhotic) condition(p<0.001~<0.05). Especially the MDA value of AC-CC group in sera significantly 46.5% decreased compared with that of AC group(p<0.05), and the MDA value of AC-CC in liver tissue showed 21.4% lower than that of AC group. Concha Cipangopaludinae can be improved hepatic function, and maybe have effect of liver protection, antioxidation and antifibrosis.
The effects on the radical scavenging activities and hepatic lipid levels in rats fed a high-fat diet (HFD) in the 70% ethanolic extract from Acer tegmentosum Maxim (ATM) were evaluated. Total phenol content of ATM was 168.60 mg catechin/g in the 70% ethanolic extract of Acer tegmentosum. The DPPH and ABTS radical scavenging activities were 18.32 mM TE/g and 32.25 mM TE/g, respectively. Food efficiency ratio was lower significantly in supplemented group with 150 mg/kg BW/day during 5 weeks (HFD+ATM) compared to HFD. Total cholesterol and triglyceride contents in liver tissue of HFD+ATM were lower significantly compared to those of the HFD. Supplementation of ATM significantly decreased lipid peroxide contents and increased radical scavenging activity in the liver tissue compared with that of HFD group. Moreover, the hepatocytes of HFD rats showed a typical fatty liver morphology showing the presence of cytoplasmic lipid droplets, whereas administration of ATM attenuated the number and the size of lipid droplets. In the liver tissue of ATM administrated HFD group, the mRNA levels of SREBP-1c, $PPAR{\gamma}$, and FAS were decreased. Therefore, these results suggest that Acer tegmentosum extracts could have antioxidant activities and the hypolipidemic effects in liver tissue by its phenolic compounds.
To investigate effects of ethanol and dietary fat on growth and bichemical indices of liver tissue and blood in rats 40 male rats of Sprague-Dawley wtrain weighing about 160g were divided into 5 groups (low-fat diet group ethanol-administered low-fat diet group high-fat diet group ethanol-administered high-fat diet group and commercial diet group) and fed expe-rimental diets for 8 weeks. Ethanol-administered groups consumed ethanol corresponding to 22 cal% which was considered as moderate drinking. Neither the ethanol intake nor the dietary fat level affected calorie intake. Nonetheless the low-fat diet group with ethanol had the lowest growth rate and 2-fold increase in the concentration of plasma triglyceride. There was no effect of ethanol and dietary fat level on contents of protein lipid and lipid composition of liver tissue. The level of lipid peroxide of liver tissue tended to be increased by ethanol intake but the increase was statistically insignificatnt. The low-fat ethanol group had lowered hepatic mitochondrial respiration rate and deformed structure of mitochondria of hepatocytes.
Antifibrotic drugs could be delayed or inhibited massive collagen deposition in liver tissue or inhibited collagen synthesis. we investigated antifibrotic effects by several herbs(Schisnadra chinensis, Ganoderma japonicum, Sedum sarmentosum, Alisma canaliculatum, Plantago asiatica) extract with observations of collagen accumulation in liver tissue and collagen synthesis in sera. Rats were used for experimental animal that were devided 3 groups(sham control, BDL/S, BDL/S-ER). Rats were operated for inducing liver fibrosis(cirrhosis) by bile duct obstruction. Several herbs were prepared by water extraction and were applicated p. o. $3ml/day$ during 4 weeks. After observation period, rats were sacrificed and liver tissue and sera were collected. In result, the mortality of rats was 35% in BDL/S group and 20% in BDL/S-ER The color of bile juice in BDL/S-ER was bright yellow and murky yellow in BDL/S group. The significantly lower weight of liver($16.21g{\pm}5.3,\;20.58{\pm}2.4$) and spleen($1.96g{\pm}0.96,\;3.93{\pm}0.21$) were shown in BDL/S-ER than that of BDL/S(p<0.05) group. The value of collagen in liver tissue(25.7%) in BDL/S-ER was observed significantly lower than that of BDL/S group (Tab. 2). AST. ALT, ALP, t-bilirubin, BUN levels were low in BDL/S-ER as compared with those of BDL/S group, but the significance was not proven. The trichrome stained liver tissue in BDL/S-ER group was observed mild bile duct proliferation and fibrosis compared with BDL/S group. In conclusion, natural products inhibited new collagen synthesis and delayed massive collagen deposition in liver tissue, so that they have noticeable antifibrotic effects in experimental liver fibrosis(cirrhosis).
To compare the quality of ultrastructural preservation of Scanning Electron Microscopic specimens dried with different methods; pure air-drying, air-drying with using Tetramethylsilane(TMS), four kind of air-drying using Hexamethyldisilazane(HMDS) and critical point drying(CPD), we conducted scanning electron microscopic observation on liver, skeletal muscle and intestinal tissues from laboratory rat treated with each method. In pure air drying group, severe distortion of tissue surface was observed, and in HMDS treated group, only liver tissue showed slight distortion. But in TMS treated group, each tissue showed a good presentation comparable to CPD group. The results suggest that the method of air-drying using TMS may be the former is less expensive and simple be and also time-saving.
Objective : This study was designed to investigate the anti-oxidative effects of Oldenlandiae Diffusae Herba Water extract (ODHW) on lipid peroxidation by free radicals oxidative hepatic injury. Methods : In order to evaluate anti-oxidative activities of ODHW in the liver cell, cultured normal rat liver cells(Ac2F) were incubated with or without ODHW. After 16 hours to 18 hours of experiment, cells were placed in DMEM medium without serum, and then incubated with 1mM tert-butyl hydro-peroxide(t-BHP) for two hours. Viable cells were detected by MTT assay. The levels of LPO induced by hydroxyl radical derived from H2O2-Fe2+ system in rat liver homogenate were determined by means of TBA. Inhibitory effect of ODHW on superoxide generation was measured by xanthine-xanthine oxidase system. Results : In the linoleic acid autoxidation system, ODHW exhibited antioxidant activity, which inhibited 85% of linoleic acid peroxidation. These effects were similar to those of dl-a-tocopherol. ODHW showed scavenging effects on DPPH radical, inhibited superoxide generation in xanthine-xanthine oxidase system, and also inhibited lipid peroxidation of rat liver tissue with hydroxyl radical derived from $H_2O_2-Fe^{2+}$ system. In addition, ODHW protected the cell death induced by t-BHP and it significantly increased cell viability in a normal rat liver cell(Ac2F)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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