• BMB Reports
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• 제28권1호
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• pp.12-16
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• 1995

The branched-chain ${\alpha}$-keto acid dehydrogenase (BCKAD) complex is a rate limiting enzyme which catalyzes the oxidative decarboxylation of branched-chain ${\alpha}$-keto acids. Numerous studies have suggested that BCKAD is subject to covalent modification in vitro via phosphorylation and dephosphorylation, which are catalyzed by a specific kinase and phosphatase, respectively. The biggest difficulty in the assay of BCKAD activity is to arrest the interconversion between the active and inactive forms. BCKAD activity was determined from fresh rat heart and liver tissues using homogenizing and assay buffers containing inhibitors of phosphatase and kinase. The results suggest that a radiochemical assay using ${\alpha}$-keto[1-$^{14}C$]-isovalerate as a substrate for the enzyme can be applied as a reliable method to determine in vitro enzyme activity with arrested interconversion between the active and inactive forms of the BCKAD complex.

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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• pp.217.2-217.2
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• 2003

In the type II system. there are two elongation enzymes in E. coli, FabB is well-known to its ability to elongate cis-3-decenoly-ACP (C10:1) in unsaturated fatty acid synthesis, whereas FabF is important for the thermal regulation of fatty acid composition by its ability to elongate palmitoleic acid to vaccenic acid. based on their genetic mutation anaylsis. Radiochemical enzyme assay was performed using myristoyl-ACP as a substrate, which is known for general substrate of FabB and FabF. (omitted)

• 방사선산업학회지
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• 제12권4호
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• pp.355-363
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• 2018

A novel $N_3S_1$ chelate, Pro-Lys-Cys (PKC) to cyclic RGD to radiolabel with $^{99m}Tc$ was conjugated in an effort to decrease the high intestinal accumulation observed for $^{99m}Tc$-labeled PGC-RGD. The target specificity of the resulting PKC-RGD was similar to that of PGC-RGD as determined by a cell binding assay and a competition binding assay. The $^{99m}Tc$ radiolabeling of PKC-RGD resulted in radiochemical yields of 98% under mild conditions at high specific activities. Biodistribution data in normal mice clearly showed a significant decrease in intestinal uptake at 2 h postinjection for the $^{99m}Tc-PKC-c$ (RGDyK) compared to the $^{99m}Tc-GC-c$ (RGDyK) (from $19.65%ID{\cdot}g^{-1}$ to $7.31%ID{\cdot}g^{-1}$ for the GI tract). The $^{99m}Tc-PKC-c$ (RGDyK) biodistribution was also shown by a higher retention of radioactivity in the whole body, but with kidney accumulation over 8-fold higher than observed with $^{99m}Tc-PGC-c$ (RGDyK) at 2 h ($12.62%ID{\cdot}g^{-1}$ for PKC-RGD and $1.54%ID{\cdot}g^{-1}$ for PGC-RGD, respectively). These results show that the biodistribution may be altered especially concerning lipophilicity resulting in renal rather than hepatobiliary excretion. This comparative study made it possible to explore the effects of lipophilicity on the biodistribution of $^{99m}Tc$-labeled c (RGDyK) through the use of different tripeptide $N_3S_1$ chelators. Therefore, $^{99m}Tc-PKC-c$ (RGDyK) may be an attractive alternative for the in vivo imaging of integrin receptors.

• 대한핵의학회지
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• 제38권6호
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• pp.532-539
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• 2004

목적: 사람 대식세포 유주 저지 인자는 많은 감염성 질환에 의한 패혈증의 병인론과 숙주의 염증 및 면역 반응의 조절에 중요한 역할은 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 사람의 혈중에서 대식세포 유주 저지 인자를 측정할 수 있는 방사면역측정법을 개발하고자 하였다. 대상 및 방법 : 사람 대식세포 유주저지 인자에 대한 단클론 항체를 포획항체로, 비오틴화된 다클론항체를 검출 항체로 사용하였다. 사람 대식세포 유주 저지인자를 검출하기 위하여 스트렙타비딘에 $^{125}I$를 방사성추적자로 사용하고 재조합 사람 대식세포 유주저지인자를 이용하여 표준투여 응답곡선을 작성하였다. 스트렙타비딘에 $^{125}I$의 표지는 Chloramine-T법을 사용하고, 분리정제는 한외여과법을 사용하였다. $^{125}I$-스트렙타비딘의 안정성을 60일까지 평가하였다. 표지수율과 안정성은 ITLC법을 사용하였다. 방사면역측정법의 유용성은 intra- 와 inter-assay의 변이계수 측정, 재현도 및 희석 실험 등을 시행하였다. 결과: $^{125}I$-스트렙타비딘의 표지수율은 88%이었으며, 분리 정제된 $^{125}I$-SA의 방사화학적 수율은 99%였다. $^{125}I$-스트렙타비딘는 60일까지 93%의 안정성을 나타내어 방사면역측정의 방사성추적자로 사용하는데 적합하였다. 작성된 표준투여 응답곡선에서 재조합 사람 대식세포 유주 저지 인자의 농도와 결합된 $^{125}I$-스트렙타비딘의 방사능 값은 높은 상관관계를 나타내었다($R^2=0.99$). 가장 높은 intra-와 inter-assay의 변이계수 간이 각각 5.5%와 7.6%로 나타났다. 시료 내에서 평균 recovery 측정값은 102%였다. 시료의 농도 희석에 따른 방사능의 측정치는 직선적인 상관관계를 나타내었다($R^2=0.97$). 결론: 대식세포 유주 저지 인자의 농도 측정을 위하여 방사성추적자로 $^{125}I$-스트렙타비딘를 이용한 방사면역측정법을 확립하였으며, 이 방법을 이용하여 다양한 염증성 질환을 가진 임상환자에서 대식세포 유주 저지 인자의 혈중 농도와 임상적 의의와의 상관관계를 규명하는데 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권6호
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• pp.357-362
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• 1994

키틴 가수분해 효소와 베타-1,3-글루카네이즈는 식물체의 주요 방어효소로 여겨지고 있다. 본 논문에서는 아기장대풀의 잎조직으로부터 고정된 현탁배양주를 만들고 이어서 에틸렌과 유인제 (elicitor) 처리에 의한 키틴 가수분해 효소유도양상을 분석하였다. 키틴 가수분해 효소활성은 $^3$H으로 표지된 키토산을 기질로 한 radiochemical 분석방법이나 담배식물체의 키틴 가수분해 효소를 대상으로 얻어진 항체를 이용하여 Western 분석방법을 사용하였다. 이 결과 에틸렌과 유인제 처리 공히 48시간후에 가장 활성이 높게 나타남을 관찰하였다. 또한 씨앗, 새싹, 식물체의 잎, 뿌리 등에서의 활성을 조사하여 뿌리에서 키틴 가수분해 효소 활성이 높음을 확인하였다.