Cirsium pendulum plants were collected from Hongcheon, Pyeongchang, Wonju, Yangyang in Kangwondo, Gapyeong in Gyeongkido, and Choongju in Choongcheongbukdo. Cirsium setidens plants were collected from Taebaek in Kangwondo and Bonghwa in Kyeongsangbukdo. Genomic DNA was prepared from those plants and used for the amplification of 18S rDNA, ITS1, 5.8S rDNA, ITS2, and part of 28S rDNA. The PCR products were sequenced, and the sequence was deposited in the GenBank. The comparison of those sequences has revealed that the rDNA sequences are identical for all six C. pendulum plants, but that the ITS1 and ITS2 sequences contain variable nucleotides. The two C. setidens plants had different nucleotides in 18S rDNA, ITS1, and ITS2. The comparison of the DNA sequences of C. pendulum and C. setidens collected in this study with C. pendulum of Hokkaido in Japan and C. japonicum of Anhui in China indicated that the plants of those three species are clearly divided into three distinct groups. The silymarin content of the collected plants was analyzed and turned out to be quite high. Therefore, it has been found that both C. pendulum and C. setidens plants are producing large amounts of silymarin, which has been reported to have various medicinal effects.
Phylogenetic signal present in the mitochondrial 16S ribosomal RNA gene (16S rDNA) and the nuclear large subunit ribosomal RNA gene (28S rDNA) was explored to assess their utility in resolving family level relationships of the superfamily Tephritoidea. These two genes were chosen because they appear to evolve at different rates, and might contribute to resolve both shallow and deeper phylogenetic branches within a highly diversified group. For the 16S rDNA data set, the number of aligned sites was 1,258 bp, but 1,204 bp were used for analysis after excluding sites of ambiguous alignment. Among these 1,204 sites, 662 sites were variable and 450 sites were informative for parsimony analysis. For the 28S rDNA data set, the number of aligned sites was 1,102 bp, but 1,000 bp were used for analysis after excluding sites of ambiguous alignment. Among these 1000 sites, 235 sites were variable and 95 sites were informative for parsimony analysis. Our analyses suggest that: (1) while 16S rDNA is useful for resolving more recent phylogenetic divergences, 28S rDNA can be used to define much deeper phylogenetic branches; (2) the combined analysis of the 16S and 28S rDNAs enhances the overall resolution without losing phylogenetic signal from either single gene analysis; and (3) additional genes that evolve at intermediate rates between the 16S and 28S rDNAs are needed to further resolve relationships among the tephritoid families.
Jujube trees infected with phytoplasma exhibit symptoms of typical witches' broom, such as yellowing, abnormally small leaves, short internodes and proliferation of shoots. A 1.2 kb fragment of the 16S rDNA from jujube phytoplasma was generated by R16F2n/R16R2 primer pair from earlier amplified P1/P7 PCR products of cloned jujube witches' broom phytoplasmas. Enzymatic restriction fragment length polymorphism (RFLP) and sequence analysis of 16S rDNA revealed that the jujube tree was infected with 16S rDNA I and V groups of phytoplasmas. Extensive comparative analyses of restriction enzyme profiles from Alu I, Hha I, Msp I, and Rsa I clearly classified the two into different phytoplasma groups. The phylogenie analyses based on 16S rDNA showed that the similarity of the two different clones was 87.5%. This is the first report of a mixed phytoplasmal infection in a single jujube tree.
The effect of 400 R total-body X-irradiation on the rate of deoxycytidine-2-$^14 C$(CdR-2-$^14 C$) into DNA and on the degradation of DNA has been studied in the liver, spleen and thymus of the rat. The postirradiation period can be divided into a radiation reaction period followed by a regeneration period. During the period of radiation reaction, which consists of days 1-2, markdely decreased CdR-2-$^14 C$ incorporation into DNA of each organ is observed. Rate of incorporation of labeled precursor in the thymus shows the most profound decrease, whereas those in the liver and spleen show similar decrease when expressed as percent of normal. The change in the amount of DNA as percent of normal exhibits a similar pattern in all organs, but the rate of decrease is larger in the spleen and thymus compared to that in the liver. The period of regeneration as judged by the incorporation experiment appears day 4 to 5, which consists of the second phase of the regeneration period. The second phase is highlighted by a markedly increased rate of CdR-2-$^14 C$ incorporation and by a slow and continued increase in the amount of DNA in all organs. The regeneration occurs faster in the liver and spleen than in the thymus which is the most radiosensitive of the all. The findings of the present experiments are strongly suggestive of the fact that the radiation-induced loss of spleen and thymus DNA as well as the radiation-caused inhibition in the CdR incorporation into DNA of the thymus are the important factors in the elevated levels of CdR in the urine and plasma.
Wild-type and four mutant R100 merR genes were cloned and the proteins overproduced under tac promoter control of pKK223-3. His118Ala, Cys117Ser, Cys126Ser, and wild-type MerR were successfully overproduced although amino-terminal 14 amino acids deletion mutant MerR was not successful. The amount of overproduced wild-type MerR protein as well as other mutant MerR was between 15%-20% of the total protein. The protein was able to be purified up to 95% homogeneity. Specific DNA-protein blotting experiments showed that the 95 bp operator containing DNA fragment could bind to Cys126Ser, His118Ala, and wild- type MerR, but not to Cys117Ser. These results were consistent with the previously reported complementation experiment results that His118Ala, Cys126Ser, and wild-type MerR could repress the mer operon but Cys117Ser could not.
This study was conducted to investigate the variation in sequence, the base composition and the sequence similarity of 18S rDNA (18S ribosomal RNA coding region) in the 10 Polygonatum spp. collections. The entire 18S rDNA region of 10 Polygonatum spp. collections ranged from 913 bp to 914 bp. There were 8 variable sites in the entire 18S region, and they were attributable to nucleotide substitution and deletion. $T{\rightarrow}C$ transition happened in 4 sites, and $A{\rightarrow}G$ transition happened in 1 site. $C{\rightarrow}A$ transversion happened in 1 site, and deletion happened in 2 sites. Transition rates were five times that of transversion. Base compositions of 18S rDNA were $23.09{\sim}23.33%$ in adenine, $23.33{\sim}23.52%$ in guanine, $25.60{\sim}25.85%$ in thymine and $27.38{\sim}27.79%$ in cytosine. The A + T content of 18S rDNA of 10 Polygonatum spp. collections averages 48.99%, ranging from 48.80% to 49.18%, and the G + C content averages 51.01%, ranging from 50.82% to 51.20%. Pairwise sequence comparisons indicated that 18S rDNA sequence similarity ranged from 99.7% to 100%.
In the previous study(6), we constructed the CheY-OmpR hybrid, Chp, which affects the expressions of ompF and om pC genes. Here we further characterize these effects and present the regulatory mechanism based on in vivo and in vitro data. Although Chp retained the sequence-specific DNA-binding ability, it was not possible to enhance transcriptional activity, suggesting that it may act as a competitive inhibitor to OmpR. The DNA-binding affinity of Chp was not modulated by phosphorylation of its Che Y portion. Chp was able to increase ompR transcription. FurthemlOre, it was found that the wild-type OmpR also exerts the same effect, which is also eOlltrolled by changes in medium osmolarity and in EnvZ activity.
Fusarium oxysporum f. sp. fragariae is a fungal pathogen causing strawberry wilt disease. The random amplified polymorphic DNA (RAPD) and restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) of intergenic spacer (IGS) region of rDNA were used to identify genetic variation among 22 F. oxysporum f. sp. fragariae isolates. All isolates could be distinguished from each other by RAPD analysis and RFLP of 2.6 kb amplified with primer CNS1 and CNL12 for IGS region of rDNA. Cluster analysis using UPGMA showed eight distinct clusters based on the banding patterns obtained from RAPD and rDNA RFLP. These results indicate that F. oxysporum f. sp. fragariae isolates are genetically distinct from each other, There was a high level genetic variation among F. oxysporum f. sp. fragariae.
Diversity of myxobacteria in five soil samples from Asansi and Uponeup in Korea was explored by means of polymerase chain reaction (PCR) using primers that specifically bind 16S rDNA of myxobacteria. DNA sequence analysis of 76 PCR fragments containing myxobacterial 16S rDNA revealed five putative novel myxobacterial genera whose 16S rDNA sequences shared <95% sequence identity with those of the type strains. This finding indicates the presence of many uncultured and unidentified myxobacterial species in Korean soil.
The bacterial community of water stream, soil and guano in Gossi cave was examined by using PCR amplified the 16S rDNA-denaturing gradient gel electrophoyesis (DGGE). In this study, the genetic diversity and the similarity of bacterial community between open area and non - open area toy cave tour were investigated, and the seasonable variation pattern was compared each other. DGGE is attractive technique, as it sepayate same length dsDNA according to sequence variation typical 16S rDNA genes. The diversity and similarity of bacterial community in cave was analyzed by GC341f and PRUN518r primer sets foy amplification of V3 region of eubacteria 16S rDNA. The specific DGGE band profile of the cave water gives the possibility that the specific bacterial cell can be adapting to the specific cave environment and living in the cave. The DGGE band profiles of all samples with guano were compared and analyzed by image analyzer, in which mutual band profile was compared to be and the band intensity of guano was the highest. From these result, it is thought that the guano was main nutrient source and influenced on the community structure of the cave environment where is nutritionally limited. Pseudomonas sp. NZ060, Pseudomonas pseudoalcaligenes, uncultured Variovorax sp. and soli bacterium NS7 were identified to be on some sample from analysing DNA sequence of some DGGE band.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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