• KSBB Journal
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• 제15권2호
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• pp.145-149
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• 2000

Thiobacillus thiooxidans KCTC2505에서 메칠머캅탄(MM) 가스를 기질로 메칠머캅탄 산화효소(MMO)를 유도할 수 있었으며 DEAE-Sephacel과 Superose 12 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 이때 얻어진 각 효소의 비활성은 각각 19.7과 80.1 units/mg-protein이었으며 효소의 최적 온도는 $43^{\circ}C$였다. 상기 정제된 효소액은 SDS-PAGE상에서 68.1 kDa의 분자량을 가진다. 이 효소는 암모늄염의 존재하에서는 활성이 증가하였으나 KCl 존재하에서는 감소하였으며 NaCl에 대해서는 거의 영향을 받지 않는 특성을 가지고 있다. 에탄올, 메탄올, 글리세린의 첨가에 대해 효소활성은 부분적으로 불활성화되었으며 아세톤의 경우에는 완전히 저해되었다. Purpald 발색법을 이용한 흡광도의 변화는 구강내 존재하는 MM 가스로부터 생성될 수 있는 수 십 nmol의 범위의 포름알데하이드에 대해 눈으로 인지가능한 발색시스템에 사용할 수 있음을 확인하였다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제5권6호
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• pp.465-468
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• 2000

Methyl mercaptan oxidase was successfully induced from Rhodococcus rhodochrous IGTS8 using methyl mercaptan gas and purified to homogeneity for the detection of mercaptans. The purification procedure involved DEAE-Sephacel and Superose 12 column chromatography with recovery yields of 85.8 and 83.3%, and a specific activity of 92.7 and 303.4 units/mg-protein, respectively. The molecular weight of purified methyl mercaptan oxidase was determined to be 64.5 kDa by SDS-PAGE. The extract from gel filtration chromatography oxidizes methyl mercaptan to produce formaldehyde, which can be easily detected by the purpald-coloring method. Optimum temperature for activity was achieved at 60$^{\circ}C$. This enzyme was inhibited by both K$_2$SO$_4$and NaCl at concentration of less than 100mM and recovered to original activity at concentration of 200mM. In the presence of methanol, the activity decreased by 33%.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제7권6호
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• pp.375-379
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• 2002

Methyl mercaptan oxidase was successfully induced in Thiobacillus thioparus TK-m using methyl mercaptan gas, and was purified for the detection of mercaptans. The purification procedure Involved a DEAE (diethylaminoethyl) -Sephacel, or Superose 12, column chromatography with recovery yields of 47.5 and 48.5%, and specific activities of 374 and 1240.8 units/mg-protein, respectively, The molecular weight of the purified methyl mercaptan oxidase was 66.1kDa, as determined by SDS-PAGE. The extract, from gel filtration chromatography oxidizes methyl mercaptan, producing formaldehyde, which can be easily detected by the purpald-coloring method. The optimized temperature for activity was found to be at 55$\^{C}$. This enzyme was inhibited by both NH$_4$Cl and (NH$_4$)$_2$SO$_4$, but was unaffected by either KCl or NaCl at less than 200 mM. With K$_2$SO$_4$, the activity decreased at 20 mM, but recovered at 150 mM. In the presence of methanol, full activity was maintained, but decreased in the presence of glycerin, ethanol and acetone 43, 78 and 75%, respectively.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2000년도 춘계학술발표대회
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• pp.485-488
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• 2000

Thiobacillus thioparus TK-m에서 메칠머캅탄(MM) 가스를 기질로 메칠머캅탄 산화효소(MMO)를 유도할 수 있었으며 DEAE-Sephacel과 Superose 12 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 이때 얻어진 각 효소의 비활성은 각각 374과 1240.8 units/mg-protein이었으며 효소의 최적 온도는 $55\;^{circ}C$였다. 상기 정제된 효소액은 SDS-PAGE상에서 66.1 kDa의 분자량을 가지며 20 mM $(NH_4)_2SO_4$ 혹은 200 mM NaCl의 첨가에 대해 최대 활성을 보였다. 글리세린, 에탄올, 아세톤의 첨가에 대해 효소활성은 부분적으로 불활성화되었으며 메탄올에 대해서는 저해받지 않았다. Purpald 발색법을 이용한 흡광도의 변화는 구강내 존재하는 MM 가스로부터 생성될 수 있는 수 십 nmol의 범위의 포름알데하이드에 대해 눈으로 인지가능한 발색시스템에 사용할 수 있음을 확인하였다.

• Journal of Chest Surgery
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• 제43권6호
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• pp.576-587
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• 2010

배경: 이종조직판막이나 조직이 임상적으로 이용되기 위해서는 조직의 장기간의 내구성이 동반된 효과적인 보존과 적절한 고정과정이 필요하다. 본 연구에서는 소심낭을 sodium dodecyl sulfate (SDS)와 N-lauroylsarcosinate를 이용하여 무세포화하고, 알파-갈락토시다아제를 처리한 뒤, 이를 다양한 방법으로 고정함으로써 조직손상과 면역반응을 최소화할 수 있는 효과적인 우심낭 보존 방법에 대해 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 우심낭으로부터 이종 이식 보철편을 채취한 뒤 SDS와 N-lauroylsarcosinate를 이용하여 무세포화 하였고, 알파-갈락토시다아제를 처리하였다. 이 두 가지 군에 대하여 각기 다른 조건 즉 glutaraldehyde (GA), l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide (EDC)/Nhydroxysuccinamide (NHS)의 처리를 달리하여 고정하였다. 이후 각 군들의 물리적 성상, 인장강도, 열 안정성 검사, 세포독성 검사, 프로나아제 저항 시험과 Pronase-Ninhydrin 시험, 투과도와 유순도 검사, purpald 검사 등을 시행하였으며, H&E 염색과 DNA 정량, 알파-갈 항원결정인자 염색 등도 함께 시행하였다. 결과: GA 단독 고정군은 EDC/NHS 고정군에 비해 물리적인 성상과 열안정성에서 더 우수하였고, EDC/NHS와 GA의 이중 고정군은 EDC/NHS 고정군에 비해 물리적인 성상과 열안정성에서 더 우수하였으며, GA단독 고정군과 비교해서 열안정성에서 더 우수하였다. 프로나아제 저항 시험과 Pronase-Ninhydrin 시험을 통해 알아본 crosslinking 정도는, GA 고정 군과 EDC/NHS의 이중 고정군이 EDC/NHS 고정군에 비해 높은 것으로 관찰되었다. EDC/NHS와 GA의 이중 고정군은 GA 고정군에 비해 투과도와 유순도가 다소 증가하였으나, GA 고정군에 비해 인장강도가 높고 세포 독성이 감소하는 것으로 관찰되었다. 결론: GA와 EDC/NHS의 이중고정을 통해서, GA단독 고정의 독성을 줄이면서 효과적인 crosslinking을 시행할 수 있음을 확인하였다. 향후 생체내 시험을 통해서 GA와 EDC/NHS의 이중고정이 석회화의 감소와 조직부전에 어떠한 영향을 미치는지 추가적인 연구와 검증이 필요하다.