• 동의생리병리학회지
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• 제20권6호
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• pp.1604-1611
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• 2006

Ostreae concha is natural products of sea that haves good function for anti-stress. WE observed the effect of Otreae concha, Yukkwooltang and yukwool-tang add Ostreae concha for catecholamine, GOT, GPT, LDH and TG after immobilization stress, Ostreae concha depressed the stress response. In immunohistochemical analysis, The area of withe pulp of the spleen decreased in the control groups as compared with control ones. At same time, more severe histological changes of spleen such as the decreased diameter of periarterial lymphoid sheath and splenic node were demonstrated in the rats challenged with emotional stress. But these changes were slightly recovered in rats pretreated with Sample I, Sample II and Sample III. Immunohistochemical analysis showed that the expression of the inflammation-related protein tended to increase. But a decline of these expression, especially TNF-${\alpha}$ by pretreated with Sample I, were observed in the red pulp of spleen of the experimental rats. These results suggest that ostreae concha may act as a therapeutic agent for stress disease through a regulation of stress-related hormones.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제29권5호
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• pp.749-757
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• 2019

Nitrilase is a valuable hydrolase that catalyzes nitriles into carboxylic acid and ammonia. Its applications, however, are severely restricted by the harsh conditions of industrial reaction processes. To solve this problem, a nitrilase from Acidovorax facilis 72W was inserted into an Escherichia coli-Bacillus subtilis shuttle vector for spore surface display. Western blot, enzyme activity measurements and flow cytometric analysis results all indicated a successful spore surface display of the CotB-nit fusion protein. In addition, the optimal catalytic pH value and temperature of the displayed nitrilase were determined to be 7.0 and $50^{\circ}C$, respectively. Moreover, results of reusability tests revealed that 64% of the initial activity of the displayed nitrilase was still retained at the $10^{th}$ cycle. Furthermore, hydrolysis efficiency of upscale production of cyanocarboxylic acid was significantly higher in the displayed nitrilase-treated group than in the free group expressed by E. coli (pET-28a-nit). Generally, the display of A. facilis 72W nitrilase on the spore surface of Bacillus subtilis may be a useful method for immobilization of enzyme and consequent biocatalytic stabilization.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.85-88
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• 2001

hGH 와 GST 절편으로 구성된 융합 단백질의 고정화 UK 칼럼에 의한 절단 반응 후 용출액의 pH를 3.5 로 낮춤으로써 이물질들을 침전시키고 이를 expanded bed chromatography 칼럼에 통과시킨 결과, 이물질들의 제거와 hGH 단량체의 흡착분리가 동시에 이루어겼다 . 흡착된 단량체는 NaCl 에 의해 용출되었으며 이 단계의 수율은 거의 100% 이었다 , 따라서 칼럼에 의한 절단 반응과 산 침전에 의한 이물질 침잔 반응 EBA 에 의한 이물질 제거 및 단량체 회수 반응을 연속적으로 진행할 수 있는 기초를 제시하였다 . 또한 고정화된 UK 는 guanidine HCl(6M)을 이용하여 unfolding 시키고 이를 세척하여 refolding 시킨 결과 20 회의 반복적인 처리 후에도 초기 활성의 약 80% 수준을 유지하였다. 이는 UK 가 공유결합된 상태에서 solid-phase refolding 이 가능하다는 증거이며, 고정화 효소 칼럼의 수영을 크게 향상시켜 경제성을 확보하는 방안으로 이용될 것으로 기대된다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제12권3호
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• pp.117-123
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• 2008

Although growth associated protein-43 (GAP-43) is known to playa significant role in the regulation of axonal growth and the formation of new neuronal connections in the hippocampus, there is only a few studies on the effects of acute stress on GAP-43 mRNA expression in the hippocampus. Moreover, the effects of repeated citalopram treatment on chronic mild stress (CMS)-induced changes in GAP-43 mRNA expression in the hippocampus have not been explored before. To explore this question, male rats were exposed to acute immobilization stress or CMS. Also, citalopram was given prior to stress everyday during CMS procedures. Acute immobilization stress significantly increased GAP-43 mRNA expression in all subfields of the hippocampus, while CMS significantly decreased GAP-43 mRNA expression in the dentate granule cell layer (GCL). Repeated citalopram treatment decreased GAP-43 mRNA expression in the GCL compared with unstressed controls, but this decrease was not further potentiated by CMS exposure. Similar decreases in GAP-43 mRNA expression were observed in CA1, CA3 and CA4 areas of the hippocampus only after repeated citalopram treatment in CMS-exposed rats. This result indicates that GAP-43 mRNA expression in the hippocampus may differently respond to acute and chronic stress, and that repeated citalopram treatment does not change CMS-induced decreases in GAP-43 mRNA expression in the GCL.

• 한국식품과학회지
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• 제46권3호
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• pp.315-322
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• 2014

본 연구는 미생물로부터 유래된 5종(AH, AK, AY, PS와 R)의 lipase들을 Amberlite XAD 7에 흡착법으로 고정화 시킨 후 각 immobilized lipase들의 특성을 알아보았다. 고정화 전과 후의 단백질 함량 및 각 free lipase들과 immobilized lipase들을 이용한 interesterification 반응물의 지방산과 TAG 조성을 분석하였다. 또한, immobilized lipase에 있어 중요한 요인인 reusability를 확인하였다. Free lipase의 단백질 함량은 2.22-11.41%로 AH가 가장 높았던 반면, immobilized lipase에서는 AH, PS와 AK가 mg protein/g support이 높았다. 한편, 반응 특성을 알아보기 위해 카놀라유, PEE와 StEE를 기질로 하여 batch type interesterification을 진행하였을 때, free lipase의 경우 free lipase R을 제외한 다른 free lipase들은 반응시간이 1시간에서 72시간으로 증가함에 따라 총 포화지방산 함량이 증가하였으며 그 중 free lipase AH가 반응성이 가장 높았다. 또한, RP-HPLC를 통해 free lipase AK 반응물을 분석한 결과, 반응시간이 길어질수록 카놀라유(0시간)에서 볼 수 있었던 57.49 area%의 ${\bigcirc}{\bigcirc}{\bigcirc}$가 6.53 area%로 감소하였다. 이는 각 free lipase들이 PEE와 StEE를 효소적 반응에 이용했기 때문이라고 판단된다. 한편, immobilized lipase AY와 R의 경우 반응시간이 1시간에서 48시간으로 증가하여도 카놀라유(0시간)의 총 포화지방산 함량과 큰 차이가 없었으나 immobilized AK의 경우 48시간에서 38.3 area%의 포화지방산 함량으로 가장 높은 활성을 보였다. 또한, 이를 사용하여 continuous type으로 반응하였을 때 유속이 느릴수록 효소와 기질 사이의 접촉 시간이 길어져 반응물의 총 포화지방산 함량이 증가함을 알 수 있었다. Reusability는 immobilized AK, AH와 PS 모두에서 두 번째 반복 반응을 하였을 때, 첫 번째 반응보다 총 포화지방산이 120-196.5% 증가하였다. 그러나 bounding protein 함량이 가장 높았던 immobilized AK는 support에 흡착되었던 free lipase AK의 탈착이 일어나 2번째 반응 후부터 활성이 감소한 반면, immobilized AH와 PS는 활성이 비교적 유지되었다.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권1호
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• pp.15-19
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• 2008

This research was conducted to develop a quick and sensitive method of detecting carbamate residues using the immobilization of antibody-antigen interactions with surface plasmon resonance (SPR). We have used commercialized surface plasmon resonance equipment (Biacore 3000). The antibody used for the immunoassay was specific for glutathione-s-transferase (GST) and the antigens included several carbamate pesticides (carbofuran, carbaryl, and benfuracarb). When antigens were applied to the protein GST, the detection limit was 2 ng/mL of carbamate pesticide. The fabricated protein GST maintained its activity for over 200 measurements. Thus we determined that the SPR biosensors could detect the specific reversible binding of a reactant in solution to a binding partner immobilized on the surface of the sensor and allow real-time detection and monitoring.

• 한국식품과학회지
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• 제30권5호
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• pp.1222-1228
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• 1998

스트레스에 의해서 생체는 에너지 대사를 증가시키며, 에너지 대사의 증가는 높은 반응성의 ROS를 생성한다. ROS는 높은 반응성으로 인해 지질, 단백질 등을 과산화시켜 원래의 활성을 잃게함으로 이런 ROS에 대해서 높은 소거능을 지니고 흡수가 쉬운 SOD 유사물질의 투여가 스트레스로 인한 생체내 산화적 손상을 억제할 수 있을 것으로 생각된다. 이것을 확인하기위해서 실험용 흰 쥐에게 4주간의 고정화 스트레스를 가한 결과, 체중 증가량을 감소시켰으며 스트레스 호르몬의 하나인 5-HIAA의 수준을 증가시켰다. 시험관에서 높은 항산화력을 확인한 루이보스티 추출액을 스트레스를 받은 흰 쥐에게 투여한 결과는 체중 증가량 감소는 완화시켰으나 5-HIAA의 수준을 변화시키지 못하여 스트레스 반응 자체를 억제하지 않는 것으로 판명되었다. 루이보스티의 투여는 스트레스로 인해서 유도되는 뇌 조직의 지질과산화와 단백질 산화를 억제하였으나 SOD, GPx 등의 대표적 항산화 효소 활성의 변화를 유발하지 않았다. 따라서, 루이보스티는 스트레스 반응 자체보다는 그에 따른 2차적 독성 대사산물에 대해서 효소 활성의 증가가 아닌 루이보스티 추출액의 구성분 자체가 세포를 보호한 것으로 생각되며, 루이보스티의 추출액이 열수하에서 추출된 것이기 때문에 지질과산화에 대해서보다 단백질 과산화에 대해 더 높은 보호 활성이 나타난 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제60권4호
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• pp.412-418
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• 2006

연구배경 : 클라미디아 감염의 진단은 혈청검사로 이루어진다. 현재 표준 방법은 MIF(microimmunofluorescence)이나 이 방법은 주관적이고 시간이 많이 걸리는 단점이 있다. 최근을 SPR(surface plasmon resonance) 센서를 이용한 단백질 칩이 감염의 새로운 진단 방법으로 제시되고 있다. 클라미디아 감염의 진단을 위한 단백질 칩 개발을 위하여 금 칩 표면에 세균을 고정하고 클라미디아 균에 대한 항체와 표면 위 세균과의 반응을 SPR 센서를 이용하여 측정하고자 하였다. 방법 : 표면 항원으로 배양한 Chlamydophila pneumoniae LKK1의 EB를 정제하였다. 양전하를 띤 PDDA (polydiallyldimethylammonium chloride)를 이용하여 전하를 이용한 단백질 칩을 제작하였다. 클라미디아 균을 고정시킨 후에 atomic force microscopy를 이용하여 표면을 관찰하였다. 클라미디아 균에 대한 항체를 투여하고 나서 자체 제작한 SPR 센서를 이용하여 항원 항체 반응을 SPR 파장 변화로 측정하였다. 결과 : 양전하를 띤 PDDA 표면위에서 클라미디아 균이 고정되었음을 확인 하였다. 그리고, 항체를 투여한 후에 SPR 파장의 증가를 확인하였다. 파장 변화는 항원의 농도와 관련이 있었다. 결론 : 전하를 이용하여 클라미디아 폐렴균의 EB를 단백질 칩에 고정하였고, 단백질 칩 위에서의 항원 항체 반응을 확인하였다. 비정형 폐렴의 진단에 SPR 센서가 기여할 수 있을 것으로 사료되나, 실제 임상 시료에의 적용을 위해서는 좀더 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제33권10호
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• pp.3233-3240
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• 2012

We demonstrated the combined applications of online protein digestion using trypsin immobilized enzyme reactor (IMER) and dual tandem mass spectrometry with collisionally activated dissociation (CAD) and electron transfer dissociation (ETD) for tryptic peptides eluted through the trypsin-IMER. For the trypsin-IMER, the organic and inorganic hybrid monolithic material was used. By employing the trypsin-IMER, the long digestion time could be saved with little or no sacrifice of the digestion efficiency, which was demonstrated for standard protein samples. For three model proteins (cytochrome c, carbonic anhydrase, and bovine serum albumin), the tryptic peptides digested by the IMER were analyzed using LC-MS/MS with the dual application of CAD and ETD. As previously shown by others, the dual application of CAD and ETD increased the sequence coverage in comparison with CAD application only. In particular, ETD was very useful for the analysis of highly-protontated peptide cations, e.g., ${\geq}3+$. The combination approach provided the advantages of both trypsin-IMER and CAD/ETD dual tandem mass spectrometry applications, which are rapid digestion (i.e., 10 min), good digestion efficiency, online coupling of trypsin-IMER and liquid chromatography, and high sequence coverage.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제28권10호
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• pp.1792-1796
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• 2007

Insulating effects on Au electrode according to the thickness and density of coated materials are well-known. To do electrochemical immunoassay reproducibly the glod electrode would be coated with self-assembled monolayers and antobodies. To get reproducibility, the antobody monolayer should be packed at highest density so that the amount of immobilized antibody at defined area should be the same. The calix[4]crown-5 SAMs could provide the basis for the antibodies to be immobilized reproducibly and at highest density. But the insulating effect would be highest too. We proved that the compactly packed protein monolayers on SAMs inhibited the electron transfer by block the free shuttling of redox molecules. The inhibition was minimized by inserting redox molecules in between the proteins during immobilization process. In this paper, we demonstrated that the calix[4]crown-5 SAMs would provide the protein monolayers with highest density and new method to minimize the insulating effect by inserted redox molecules in between the compactly packed protein monolayers.