• Animal cells and systems
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• 제13권3호
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• pp.267-274
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• 2009

The dissociative culture technique of Aplysia neuron is one of the key methods that have been used for studies of cellular and molecular mechanisms of neuronal functioning. However, despite the advantages this method offers as an experimental model, its technical efficiency has had room for improvement. In this study, we examined certain putative factors that might affect the culture quality. The effects of neuronal damage induced by physical injuries, heat shock, and surface protein degradation were evaluated along with the correlation between the culture quality and animal behavior. As a result, we found that physical injury can be a critical factor that affects culture quality, whereas the heat shock and surface protein degradation had negligible effect on it. In addition, we discovered that siphon retraction time was not a good measurement for healthy neurons. Based on these findings, we suggest here an improved method in which the degree of physical injury is reduced by means of multiple protease treatment.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권1호
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• pp.6-12
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• 1998

폐단백질을 활용하는 방도의 하나로 폐단백질 자원으로 부터 불용성 단백질의 분리 효율성을 높이고 기능성을 개선하기 위하여 protease를 생산하는 Aspergillus sp. MS-18 균주를 토양으로 부터 분리하고 이 균주가 생산하는 효소를 정제하여 특성을 살펴보았다. 효소 생산을 위한 최적 배양조건은 3% arabinose, 0.5% polypepton, 0.1% ammonium sulfate, 0.1% magnesium chloride 첨가로 3 일 배양이었다. 효소는 ion exchange chromatography, gel filtration 등으로 16.9 배 정제할 수 있었으며 비활성역가는 340.4 unit/mg이었다. 정제효소는 polyacryl amide gel 전기영동상 단일 밴드로 나타났으며, 분자량은 30,000 정도로 추정되었고 결정구조는 모서리가 둥그스럼한 막대 모양이었다. 정제 효소의 최적작용 pH와 온도는 9.0, $60^{\circ}C$였으며, pH 7.0-12.0까지 $50^{\circ}C$에서 안정하였다. 금속이온중 $Na^+$, $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$등에 의해 활성이 증대 되었으나, $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Pb^{2+}$에 의해 효소 활성이 저해되었고 저해제중 ethylenediaminetetra acetic acid와 phenyl methanesulfonyl fluoride에 의한 활성 저해가 관찰되어 금속 이온이 효소 활성에 관여하는 serine protease로 추정되었으며 정제효소의 Km, Vmax는 $29.33\;{\mu}mole/L$, $5.13\;{\mu}g/min$이었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제30권9호
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• pp.1303-1313
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• 2017

Objective: This study evaluated the change and function of the pancreas, and small intestine in relation to growth performance of broilers on diets supplemented with raw soybean meal (RSBM) and protease. Samples of test ingredients and diets, after mixing and prior to being used were also assessed on contents of anti-nutritional factors. Methods: A $3{\times}3$ factorial study was used, with three levels of RSBM (commercial soybean meal [SBM] was replaced by RSBM at 0, 10%, or 20%) and protease (0.1, 0.2, or 0.3 g/kg). Each treatment was replicated six times with nine birds per replicate. Birds were housed in cages, in climate-controlled room and fed starter, grower and finisher diets. Results: Levels of trypsin inhibitors in the diets, containing varying levels of RSBM ranged between 1,730.5 and 9,913.2 trypsin inhibitor units/g DM. Neither RSBM nor protease supplementation in diets significantly affected (p>0.05) the body weight of broilers in the entire periods (0 to 35-d). Increasing the level of RSBM in diets increased the weight of the pancreas at d 10 (p<0.000), d 24 (p<0.001), and d 35 (p<0.05). Increasing levels of RSBM in the diets reduced the apparent ileal digestibility of crude protein (CP), and amino acid (AA) at d 24. Increasing level of RSBM in the diets decreased (p<0.01) pancreatic protein content, but this was increased (p<0.05) when protease was added to the diets (0 to 10-d). Increasing the level of protease improved the pancreatic digestive enzymes, including trypsin (p<0.05), chymotrypsin (p<0.01), and general proteolytic enzymes (p<0.05). Conclusion: The commercial SBM could be replaced at up to 20% by RSBM for broilers. Although protease supplementation slightly improved the digestive enzymes, and the ileal digestibilities of CP and AA, the CP and AA were negatively affected by increasing RSBM.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권1호
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• pp.13-17
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• 1998

폐단백질을 활용하는 방도의 하나로 폐단백질 자원으로 부터 불용성 단백질의 분리 효율성을 높이고 기능성을 개선하기 위하여 protease를 생산하는 Aspergillus sp. MS-18균주를 토양으로 부터 분리하고 이 균주가 생산하는 효소를 이용한 단백질 추출 최적 조건을 규명하고 추출 단백질의 기능성을 비교 검토하였다. 참깨박 단백질의 용출을 위한 최적 pH, 최적 온도, 최적 처리 시간과 최적 첨가 효소량은 pH 9.0, $60^{\circ}C$, 8시간 처리, 40 unit 이었다. 효소 처리된 참깨박 단백질은 효소 처리의 경우 대조구에 비해 기포 형성력과 기포 안정성이 매우 증가하였고, 참깨박 단백질의 유화력은 효소 처리구의 경우 전 pH의 범위에서 유화력과 유화 안정성이 매우 증가하였다. 참깨박 단백질의 유지 흡착력과 수분 흡착력은 효소 처리구가 대조구에 비해서 높은값을 나타내었다.

• 한국동물학회지
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• 제39권1호
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• pp.65-74
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• 1996

재생중인 양서류의 다리에 레티노익산을 처리하면 패턴 복제가 유발되며 이러한 현상은 탈분화 정도와 깊이 연관이 있다. 본 연구에서는 한국산 도롱뇽(Hynobius leechii)과 멕시코산 도롱뇽의 일종인 엑소로틀(Ambystoma mexicanum)의 다리 재생 과정에서 탈분화 과정에 관여할 것으로 추정되는 트립신 및 키모트립신과 유사한 단백질 분해 효소의 활성도를 재생 단계에 따라 조사해 봄으로써 이들 단백질 분해효소의 활성도와 레티노익산에 의해 증가되는 탈분화 상태의 정도사이에 상관 관계가 있는지를 알아 보고자 하였으며 다리 생산 기간중 상기 효소의 활성도 변화에 종 특이적 차이가 존재하는 지를 알아보고자 하였다. 연구 결과, 이들 효소의 활성도는 탈분화시기에서 최대에 도달함을 알수 있었고 레티노익산 처리는 트립신 유사 단백질 분해 효소의 활성도를 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 효과는 한국산 도롱뇽에서 두드러졌고 이는 레티노익산 처리에 의한 반응에 종 특이적 차이가 있음을 반영하는 것으로 해석 되었다. 본 연구 결과는 트립신 및 키모트립신 유사 단백질 분해 효소가 재생중인 다리의 탈분화 과정에 중요한 작용을 하고 있으며, 이들 단백질 분해 효소가 레티노익산 처리에 의한 탈분화 과정의 강화에 관여하리라는 것을 암시한다.

• BMB Reports
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• 제28권2호
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• pp.138-142
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• 1995

An anticoagulant/fibrinolytic protease was purified to homogeneity from the earthworm Lumbricus rubellus. The protein was a single chain glycoprotein of 32 kDa that exhibited strong proteolytic activity on human thrombin and fibrin clots. Proteolytic degradation of these plasma proteins by the purified enzyme occurred at a neutral pH range. Among several human plasma proteins tested as possible substrates for the protease reaction, the 32 kDa enzyme specifically hydrolyzed both thrombin and fibrin polymers without affecting other proteins, such as serum albumin, immunoglobulin, and hemoglobin. Treatment of the purified enzyme at neutral pH with either phenylmethylsulfonylfluoride or soybean trypsin inhibitor resulted in a loss of catalytic activity. The enzyme hydrolyzed the chromogenic substrate H-D-Phe-L-Pipecolyl-L-Arg-p-nitroanilide with a $K_m$ value of 1.1 ${\mu}M$ at a neutral pH. These results suggest that the anticoagulant/fibrinolytic enzyme from Lumbricus rubellus is a member of the serine protease family having a trypsin-like active site, and one of the potential clevage sites for the enzyme is the carbonyl side of arginine residues in polypeptide chains.

• KSBB Journal
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• 제15권1호
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• pp.55-59
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• 2000

생난황으로부터 시알산 함유 올리고당을 직접 생산하기 위한 biphasic system(water-immiscible hexane system)의 최적 조건을 조사하였다. Biphasic system I은 II보다 생산수율이 높았으며, 온도, 함수율 및 반응 시간의 최적조건은 각각 $30^{\circ}C$, 20%, 12시간이었다. Biphasic system I 에서, 난황을 가수분해하기 위한 3종류의 효소(protease A, corolase 7089, neutrase 0.5L)의 활성은 함수율과 온도에 강하게 영향을 받았으나, biphasic system II에서는 온도($30^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$)의 영향을 거의 받지 않았다. 두 종류의 biphasic system에서 반응시간 12시간까지는 시알산 함유 올리고당의 생산량이 증가되었으나, 15시간 이후에는 거의 증가하지 않았다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제18권3호
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• pp.279-286
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• 1989

Alkaline protease 생성능이 강한 Aspergillus fumigatus을 토양에서 분리동정하고, 효소생산조건을 구명한 결과 $30^{\circ}C$에서 3일간 배양하였을 때 최고활성을 나타냈으며 생산된 조효소를 황산암모늄염석, Sephadex G-25, G-150 gel filteration과 DEAE-Cellulose컬럼 chromatography로 정제하여 수율 6.4%, 정제정도 86.13배의 효소를 얻었고 polyacrylamide gel 전기영동에 의해 단일밴드인 것을 확인하였다. 정제효소의 분자량은 63000정도 였으며, 17종의 아미노산으로 구성되어 있고, 그 중 glycine과 glutamic acid가 가장 많고 methionine과 cystine이 가장 적었다.

• 생명과학회지
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• 제17권7호통권87호
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• pp.948-955
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• 2007

생체 면역반응에 중요한 역할을 하는 호중구의 세포사멸은 자연적으로 일어나거나 여러 외부자극에 의한 신호의 전달에 의해 증가하거나 지연된다. 또한 사이토카인과 같은 분화제에 의해 세포사멸이 지연되고 항원 제시 기능을 가진 수지상 세포로 분화되기도 한다. 본 연구에서는 세포사멸 억제제와 사이토카인을 이용한 시스템에서 호중구가 수지상 세포로 분화되는가를 조사하였다. Pancaspase와 serine protease의 억제제인 zVAD-fmk와 AEBSF를 처리하였을 때 호중구의 세포사멸은 현저히 감소되며 AEBSF는 caspase-3와 serine protease활성을 모두 억제하였다. 호중구의 세포사멸을 효과적으로 억제하는 AEBSF와 함께 분화제로 널리 쓰이는 CM-CSF를 같이 처리하여 3일 동안 배양하면 수지상 세포에서 높이 발현되는 CD8O, CD83 및 MHC class ll의 세포표면 마커의 발현이 증가하였다. AEBSF와 CM-CSF를 처리한 호중구를 T-세포와 함께 배양하였을 때 SEB가 존재할 경우 T-세포가 증식되었으며 SEB가 없이도 $IFN{\gamma}$는 생성되었다. 이들 결과들로 부터 serine protease 억제제인 AEBSF를 호중구에 처리하여 세포사멸을 효과적으로 억제하는 것과 수지상 세포로의 분화를 촉진하는 사이토카인인 CM-CSF의작용을 나타내게 하는 조건과는 서로 상호적으로 연관되어 작용할 수 있다는 것을 제시하고 있다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권2호
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• pp.169-177
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• 1992

토양으로부터 alkaline protease 생성능이 강한 Streptomyces griseus HC-1141을 분리하였으며, 효소생산의 최적 배양조건은 0.5 casein, 0.05 ammonium chloride, 0.1 ferrous sulfate, 2.0의 lactose, pH 8.0에서 84시간 배양했을 때이다. 효소의 정제는 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration, crystallization으로 하여 53.23배 정제할 수 있었으며 polyacrylamide gel 전기영동상 단일밴드를 나타내었다.