• 대한의생명과학회지
• /
• 제8권3호
• /
• pp.161-165
• /
• 2002

Apoptosis can be difficult to detect in routine histological sections. Since extensive DNA fragmentation is an important characteristic of this process, visualization of DNA breaks could greatly facilitate the identification of apoptotic cells. Several techniques for the qualitative and quantitative detection of this process have been established; recently, an in situ nick end-labelling technique based on the detection of DNA fragmentation, which is a molecular characteristic of apoptotic cell death, was described. Applying this method to paraffin sections of rat tissues, sensitivity was observed to be inconsistently low with regard to the expected number of apoptotic cells. I describe a new modified method for formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections, pretense pretreatment to permeate the tissue sections that involves an TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling) is acknowledged as a method of choice in the rapid identification and quantification of the apoptotic cell fraction in paraffin tissue preparations. TUNEL was performed without apoptosis and with apopotosis samples to each of the three concentrations of proteinase K (10, 25, 40 mg/ml) pretreatments. In this study, I show that chemical pretreatments of the tissue sections in proteinase K (25 mg/ml for 15 min at room temperature) considerably enhances the sensitivity of this nick end labelling technique.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
• /
• 제4권1호
• /
• pp.63-68
• /
• 2002

A cDNA encoding a putative member of cathepsin B of the thiol pretense superfamily was cloned from a cDNA library of the mulberry longicorn beetle, Apriona germari. Sequence analysis of the cDNA encoding the cathepsin B of A. germari (AgCatB) revealed that the 972 bp cDNA has an open reading frame of 324 amino acid residues. The deduced protein sequence of the AgCatB showed high homology with cathepsin B of the insects, Bombyx mori (47.3% amino acid identity), Helicoverpa armigera (46.6%) and Sarcophaga peregrina (45.6%), and the lowest homology with Aedes aegypti (33.2%). The AgCatB contains six disulfate bonds typical for cysteine pretenses. The three amino acid positions Cys-109, His-267, and Asn-287 which are conserved, active sites characteristic for cathepsin B, were also found. Phylogenetic analysis further confirmed that the AgCatB has a close relationship with that of B. mori, H. armigera and S. peregrina.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제17권5호
• /
• pp.407-411
• /
• 1989

Oxytetracycline 생산균주인 Streptomyces rimosus를 maltose 2%, NH$_4$Cl 0.5%, yeast extract 0.4 %, MGSO$_4$.7$H_2O$ 0.2% 조성의 배지를 배양초기 PH 6.5로 하여 3$0^{\circ}C$, 72시간 진탕배양하여 얻은, 세포외 protease를 유안분획, Sephadex A-50 이온교환, Sephadex G-100 gel 여과를 행하여 정제하였다. 효소의 최적온도는 5$0^{\circ}C$이며, 최적 pH는 8.0이었으며, Co$^{2+}$ 이온에 의해 활성화되며 Hg$^{2+}$, Fe$^{2+}$ 및 EDTA에 의해 저해를 받으며 casein 분자량을 23,600으로 추정하여 구한 Km값은 2.7$\times$$10^{-4}$M이었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
• /
• 한국생물공학회 2000년도 추계학술발표대회 및 bio-venture fair
• /
• pp.167-170
• /
• 2000

B. Stearothermophilus 단백질 분해 효소는 2가 금속 이온인 $Ca^{2+}$에 의하여 내열성이 향상되며 $75^{\circ}C$에서 최대 역가를 나타내었다. 2mM $Ca^{2+}$를 첨가하여 B. Stearothermophilus를 이용한 호열 ${\cdot}$ 호기성 소화공정 운전할 경우 각각 최대량 대비 51%와 27%의 DOC 및 세포외단백질의 분해가 이루어지는 것을 확인하였다.

• 한국식품영양학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.152-157
• /
• 2003

Serratia marcescen ATCC 25419 protease를 ammonium sulfate treatment, DEAE-cellulose anion exchange chromatography등의 방법으로 정제하였는데 최종 단계에서 667.5 unit/mg 이었으며 회수율은 43%이었고 448배 정제되었다. 정제한 S. marcescens protease로부터 아포효소를 만든 후 금속 재활성화에 대해 조사하였다. S. marcescens protease는 EDTA에 의해 완전히 활성을 잃는 metalloenzyme이며 Hg, Fe, Cu 등에 의해서 효소 활성을 70% 이상 잃은 반면, Co는 효소 활성을 약 20% 정도 증가시켰다. 아포효소의 재활성화는 pH 6~8에서 Mn, Co, Zn 등이 효과적이었다. Mn, Co, Zn등을 아포효소에 가하여 만든 효소들 중에서 Zn-효소는 효소 활성도, 알칼리-불활성화, 열-안정성 면에서 원래 protease와 유사하였다.

• 대한의용생체공학회:의공학회지
• /
• 제8권1호
• /
• pp.87-92
• /
• 1987

In order to evaluate the artificial skin for burn would covering materials, copoly(N. carbobenzoxy-L-Iysine-L-leucine)s were prepared by Ipolymerization of N - carbobenzoxy-L- I sine anhydride and L-leucine anhydride in homogeneous solvents using triethylamine as an initiator. The synthetic polypeptides and the oxter type polyurethane(PV)of medical grade were used as the sheet type membranes were prepared ; monolayer membrances were composed of only the polypeptides, bilayer membranes and blend membranes were controlled by composition of the polypeptides and PU. Test of the swelling degree, mechanical tensile strength, elongation, oxygen permeability, water-vapor loss and In vitro degradation treated by pretense TV of samples of artificial skin were measured by adequate methods so as to mechanical, physincal characterization and biodegradation. As a result, all the values of samples were found to be similar to desired value of skin which was nature. The Artificial skin based on polypeptides can be considered as ideal burn wound covering materials.

• 한국산학기술학회논문지
• /
• 제9권2호
• /
• pp.550-555
• /
• 2008

세포벽 분해 효소와 단백질 분해 효소를 이용하여 스피루리나 추출물을 효율적으로 생산할 수 있는 방법을 조사하였다. 특히 단백질 분해 효소의 처리 조건을 최적화하여 효율적인 스피루리나 추출물의 제조공정을 제시하였다. 세포벽 분해 효소인 Tunicase는 스피루리나의 중량 기준으로 2%를 사용하였고 2시간 동안 반응시켰다. 상업용 단백질 분해 효소로는 Alcalase를 사용하였다. 이때, Alcalase의 최적 사용량은 1%이었으며, 효소 반응 시간은 2시간이 적절하였다. Tunicase와 Alcalase의 처리 방법에서 Tunicase를 먼저 사용한 후 Alcalase를 사용하는 순차적으로 처리하는 것이 고형분 회수율과 spirulina extraction (SE) index를 최대로 증가시킬 수 있는 효과적인 방법이었다. 두 효소를 순차적으로 반응시키면 단순 열수 추출보다 고형분 회수율은 약 56%($45.2%\;{\rightarrow}\;70.7%$), SE index는 약 100%($11.4%\;{\rightarrow}\;22.8%$) 증가하였다.

• 한국의류학회지
• /
• 제20권3호
• /
• pp.550-559
• /
• 1996

The Effect of protease (subtilisin Carlsberg) on the removal of hemoglobin as protein soil was studied. The hydrolysis characteristics of subtilisin Carlsberg was examined by electrophoretic techniques. The fragmentation patterns of hemoglobin were analyzed by SDS-PAGE. The hydrolysis efficiency was evaluated by analysis of protein bands shown on gels before and after hydrolysis by using densitometer. 1. The hydrolysis of hemoglobin by subtilisin Carlsberg was increased markedly with the increase of the enzyme concentration. 2. The hydrolysis of hemoglobin by subtilisin Carlsberg was effectively increased in proportion to increasing of the hemoglobin concentration up to a certain point, but it began to decrease above the point. 3. The hydrolysis of hemoglobin by subtilisin Carlsberg followed the first order kinetics, yielding a rate constant of $4.05\time10^{-4}S^{-1}s$. 4. The hydrolysis of hemoglobin by subtilisin Carlsberg was highest at $50^{\circ}C$ and was decreased markedly at $80^{\circ}C$. 5. The hydrolysis of hemoglobin was comparatively low at pH 7.0~8.0, and highest at pH 11.0.

• 한국식품조리과학회지
• /
• 제17권5호
• /
• pp.497-502
• /
• 2001

능이버섯 〔Sarcodon aspratus(Berk.) S.Ito〕으로부터 단백질 가수분해 효소를 추출하여 75%(NH$_4$)$_2$SO$_4$ 염석과 DE52 anion exchange column chromatography 와 sepharyl-S 200 column 및 Mono s column chromatography 에 의해 정제하였는데 조 효소의 특이 활성은 55.2U/mg protein으로 조효소액에 비하여 11.26배 증가하였고 수율은 49.5%로 나타났다. 정제된 효소는 전기영동을 행한 결과 단일 band를 나타내었으며 분자량은 29,300으로 추정되었다. pH의 안정성은 4$^{\circ}C$에서 48시간 보존하였을 때 pH 8.5에서 가장 안정하였고, pH 5.5~10.5까지 높은 활성을 유지하였다. 온도에 대한 안정성은 30분간 보존 한 후 활성을 검토한 결과 단백분해능은 5$0^{\circ}C$까지 비교적 처음활성을 유지하다가 6$0^{\circ}C$에서는 53%정도의 활성이 유지되었으나 그 이상의 온도에서는 급격히 실화하여 7$0^{\circ}C$에서는 완전히 실화하였다. 금속 이온에 의해서는 크게 저해를 받지 않았으나 PMSF 저해제에 대하여 저해되어 본 효소가 serine protease임을 시사하였다.

• 한국축산식품학회지
• /
• 제22권3호
• /
• pp.234-239
• /
• 2002

전기자극 처리는 도체의 온도가 저하되기 전 사후강직에 도달하게 하여 저온 단축을 줄이는 효과와 함께 연화 시작점을 빠르게 하여 근섬유 분해속도를 증가시킨다고 보고되고 있다. 전도체 또는 반도체에 전기자극을 한후 냉각을 했을 때 근육의 종류와 부위에 따른 사후 대사/강직/냉각의 속도가 각기 다르기 때문에 국소 전기자극기 같은 처리와 전기자극 효과의 그 직접적 기능 및 상대적 중요성은 앞으로 많은 연구를 필요로 하고 있다. 결론적으로 각각의 실험 조건과 방법이 달라 대폭 그 결과가 달라짐으로써 직접적인 비교가 어려웠다는 점을 강조하고 싶다.