• Mycobiology
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• 제29권4호
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• pp.218-223
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• 2001

A rapid radicle assay for prescreening antagonistic bacteria to Phytophthora capsic4 causal agent of Phytophthora blight of pepper was developed. Sixty-four bacterial strains with in vitro antifungal activity selected out of 1,400 strains isolated from soils of Ansung, Chunan, Koyang, and Paju, Korea in 1998 were used for development of the bioassay. Uniformly germinated pepper seeds dipped in bacterial cells for 3 hours were placed near the edges of growing mycelia of P. capsici on water agar containing 0.02% glucose. Five-week-old pepper plants(cv. Nockwang) were inoculated to compare with results of the radicle assay developed in this study. For plant inoculation, pepper seeds were sown in potting mixtures incorporated with the bacterial strains, then transplanted into steam-sterilized soils 3 weeks later. Plants were hole-inoculated with zoospores of P. capsici 2 weeks after transplanting. Disease incidence and severity were determined in radicle and plant assessments, respectively. In radicle assay, six strains, GK-B15, GK-B25, OA-B26, OA-B36, PK-B09, and VK-B14 consistently showed the significant(P=0.05) disease reduction against radicle infection by the fungus, four of which also did in plant assessments. Strains OA-B36 and GK-B15 consistently reduced the fungal infection in both the radicle assay and the plant assessment. Therefore, prescreening strains using the radicle assay developed in this study followed by plant assay could reduce time and labor, and improved the possibility of selecting antagonistic bacteria for control of Phytophthora blight of peppers.

• 식물조직배양학회지
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• 제26권4호
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• pp.289-291
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• 1999

발아 7일된 오이 (Cucumis sativus L.) F$_1$ 5품종과 순계 4품종의 하배축 절편을 1mg/L 2,4-D가 첨가된 MS고체배지에 치상하여 3주간 배양하였다. F$_1$ 1품종과 순계 2품종에서 발달한 캘러스의 8%이하에서 체세포배가 발생하였다. 체세포 배 절편을 동일한 배지에 4주간 배양하여 배발생캘러스를 유도하였다. 배발생캘러스는 동일조성의 MS액체배지에 현탁되어 증식하였다. 액체배지에서 배발생캘러스는 수많은 체세포 배로 발달하였으며, 생장조절제가 첨가되지 않은 MS기본배지에서 95%이상의 체세포배가 식물체로 발아하였다. 재분화된 식물체는 화분에서 생육되어 개화 후 착과하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제24권6호
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• pp.369-374
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• 1997

카네이션의 종묘 급속증식 기술 및 형질전환 연구의 기초 연구로서 체세포배발생 조직배양 방법을 개발하고자 수행되었다. 'Desio' 카네이션의 20 mm 이하의 미숙화뢰를 2,4-D가 1 ㎎/L 함유된 MS 기본배지에서 배양하면 배발생 캘러스가 5-l0%의 효율로 유도되었으나, 줄기 정단분열조직, 잎, 절간조직과 20 ㎜ 이상의 화뢰에서는 비배발생 캘러스만이 형성되었다. 동일한 배양방법을 16품종의 절화용 카네이션에 적용한 결과, 7품종에서 배발생 캘러스를 유도할 수 있었다. 일부 배발생 캘러스 세포주는 120주 이상 배발생능 상실 없이 계대배양을 통해 증식할 수 있었으며, 액체 진탕 배양을 통해 배발생 세포괴 상태로 급속 증식하는 배양체가 획득되었다. 배발생 캘러스 또는 액체배양 배발생 세포괴를 호르몬이 포함되지 않은 MS 한천배지에 이식하며 2-3주내에 체세포배 발생을 통하여 식물체가 재분화되었다. 토양이식된 식물체는 정상적으로 생장하여 20주 후 개화하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권5호
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• pp.329-333
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• 1998

Escherichia coli의 $\beta$-glucuronidase (GUS) 유전자를 고구마의 배발생세포괴에 particle bombardment로 도입하여 재분화 식물체에 발현시켰다. CaMV35S-GUS 융합유전자와 선발표지로서 neomycin phosphotransferase유전자가 들어있는 binary 운반체 pBI121 DNA를 텅스텐 입자로 코팅하여 정단분열 조직 유래의 배발생 세포괴에 bombarding하였다. Bombarding된 세포괴를 1mg/L 2,4-D와 100mg/L kanamycin이 첨가된 MS 배지로 옮겨 한달 간격으로 6개월동안 계대배양하였다. Kanamycin 저항성 캘러스를 0.03mg/L 2iP, 0.03 mg/L ABA 및 50 mg/L kanamycin이 들어있는 MS 배지로 옮겨 체세포배를 유도하였고, kanamycin이 첨가되지 않은 MS 기본배지에서 식물체로 발달시켰다. 토양에서 생육중인 6개체의 식물을 대상으로 PCR과 northern분석을 수행한 결과 GUS 유전자가 식물체 genome에 안정적으로 도입, 발현되었음이 확인되었다. 조직화학적 분석으로 GUS 유전자가 형질전환 식물체에서 발현됨을 밝혔다.

• Mycobiology
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• 제30권1호
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• pp.31-36
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• 2002

Soil bacteria were screened for the ability to control cucumber anthracnose caused by Colletotrichum orbiculare through induced systemic resistance(ISR). Sixty-four bacterial strains having in vitro antifungal activity were used for selecting ISR-inducing strains in cucumber. Cucumber seeds(cv. Baeknokdadagi) were sown in potting mixtures incorporated with the soil bacteria, at a rate of ca. $10^8$ cells per gram of the mixture. Two week-old plants were then transplanted into the steam-sterilized soil. Three leaf-stage plants were inoculated with a conidial suspension($5{\times}10^5$ conidia/ml) of C. orbiculare. Diseased leaf area(%) and number of lesions per $cm^2$ leaf were evaluated on third leaves of the plants, $5{\sim}6$ days after inoculation. Among 64 strains tested, nine strains, GC-B19, GC-B35, GK-B18, MM-B22, PK-B14, RC-B41, RC-B64, RC-B65, and RC-B77 significantly(P=0.05) reduced anthracnose disease compared to the untreated control. In contrast, some bacterial strains promoted susceptibility of cucumber to the disease. From the repeated experiments using the nine bacterial strains, GC-B19, MM-B22, PK-B14, and RC-B65 significantly(P=0.05) reduced both diseased leaf area(%) and number of lesions per $cm^2$ leaf in at lease one experiment. These strains with control efficacy of $37{\sim}80%$ were determined to be effective ISR-inducing strains.

• 식물조직배양학회지
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• 제22권4호
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• pp.212-216
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• 1995

조직배양을 이용하여 시클라멘의 급속증식체계를 확립하기 위한 기초실험으로 자엽과 엽병을 auxin류와 cytokinin류가 혼용처리된 MS배지에 배양한 후 캘러스 발생 및 기관 재분화에 미치는 치상절편, 부위별, 생장조절제의 효과를 조사하였다. 절편부위별 효과는 자엽조직이 엽병조직보다 캘러스 및 캘러스로부터 shoot 분화에 좋은 반응을 보였다. 2,4-D와 kinetin 혼용처리구에서 자엽은 전혀 반응이 없었고 엽병절편에서는 2,4-D와 kinetin이 1.0 mg/L씩 혼용배지에서만 캘러스로부터 shoot가 재분화되었다. NAA와 BA 혼용배지의 경우 자엽절편에서는 모든 배지에서 캘러스가 유도되었으며 shoot 재분화는 0.2 mg/L NAA와 0.5 mg/L BA 혼용 배지에서 가장 양호하였고, 엽병조직은 0.2mg/L NAA와 2.0 mg/L BA 혼용배지에서 다수의 shoot가 재분화되어 가장 효과적이었다. Shoot로부터 발근에 적합한 NAA와 IAA의 효과를 조사하였던 바 NAA가 IAA보다 뿌리발생에 양호하였고 특히 1.0 mg/L NAA에서 다수의 뿌리가 발생되어 효과적이었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권5호
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• pp.315-318
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• 1994

CaMV35S promoter-$\beta$-glucuronidase (GUS) 유전자와 선발 표지로서 neomycin phosphotransferase 유전자를 가진 pBI121 binary 벡터를 도입한 Agrobacterium turmfaciens LAB4404와 더덕 유식물체의 자엽 절편을 1 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 48시간 동안 공동배양한 후 1 mg/L BA, 250 mg/L carbenicillin 100 mg/L kanamycin sulfate을 첨가한 고체배지에 옮겨 명조건에서 배양하였다. 배양 2주 후 절편의 절단면 부근으로부터 수많은 부정아가 형성되기 시작하였다. 이들 부정아의 GUS 활성을 조사한 결과 15%가 양성반응을 나타내었다. 배양 6주 후 절편이 형성한 수많은 부정아로부터 56.7% 빈도로 shoot이 발달하였다. 이들 shoot은 기본배지에 옮겨서 4주 경과되었을 때 대부분 발근하였으며, 재분화된 개체는 토양에 이식하였다. Southem 분석결과 GUS양성을 보인 재분화 개체의 게놈 DNA에 GUS 유전자가 삽입되었음이 확인되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제29권3호
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• pp.185-188
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• 2002

유자의 성숙종자를 MS 기본배지에 치상하여 종자의 내피에서 주심조직 유래의 희고 부서지기 쉬운 배발생캘러스가 1.2%의 빈도로 형성되었다. 이 캘러스는 1 mg/L 2,4-D를 첨가한 MS배지에서 증식되었다. 증식된 캘러스를 0.1 mg/L kinetin을 첨가한 MS 배지에 옮겼을 때 많은 수의 체세포배가 형성되었다. 배발생캘러스를 1 mg/L 2,4-D를 첨가한 액체 배지에 넣어 배발생 현탁배양계를 확립하였다. 배양된 현탁배양세포를 0.5 mg/L ABA를 첨가한 고체배지에 평판하였을 때 높은 빈도로 체세포배로 발달하였으며 MS 기본배지 혹은 1 mg/L kinetin 첨가배지에서 소식물체로 발달하였다. 소식물체는 성공적으로 토양으로 옮겨서 온실에서 육성되었다.

• Plant Biotechnology Reports
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• 제2권1호
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• pp.87-92
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• 2008

An improved protocol for high frequency plant regeneration via somatic embryogenesis from zygotic embryo-derived cell suspension cultures of watershield (Brasenia schreberi) was developed. Zygotic embryos formed pale-yellow globular structures and white friable callus at a frequency of 80% when cultured on halfstrength MS medium supplemented with $0.3mg\;l^{-1}$ 2,4-D. However, the frequency of formation of pale-yellow globular structures and white friable callus decreased slightly with increasing concentrations of 2,4-D up to $3mg\;l^{-1}$, where the frequency reached ~50% of the control. Cell suspension cultures from zygotic embryoderived white friable callus were established using half-strength MS medium supplemented with $0.3mg\;l^{-1}$ 2,4-D. Upon plating of cell aggregates on half-strength MS basal medium, approximately 8.3% gave rise to somatic embryos and developed into plantlets. However, the frequency of plantlet development from cell aggregates was sharply increased (by up to 55%) when activated charcoal and zeatin were applied. Regenerated plantlets were successfully transplanted to potting soil and grown to normal plants in a growth chamber. The distinctive feature of this study is the establishment of a high frequency plant regeneration system via somatic embryogenesis from zygotic embryo-derived cell suspension cultures of water-shield, which has not been previously reported. The protocol for plant regeneration of watershield through somatic embryogenesis could be useful for the mass propagation and transformation of selected elite lines.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권5호
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• pp.303-308
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• 1994

가나 재래종 카사바 식물체의 경단 분열조직을 2 mg/L 2,4-D가 함유된 MS 배지에서 배양하였을 때 32%가 체세포배를 형성하였다. 절단한 체세포배를 1 mg/L 2,4-D가 함유된 배지에 배양하였을 때는 최고 93%가 2차배를 형성하였다. 체세포배는 식물체로 전환하지 못하였으므로 종단으로 자른 체세포배를 0.1-5mg/L BA가 함유된 배지에서 배양하여 부정아를 유도하였다. 8주 경과하였을 때 최고 100%가 부정아를 형성하였으며 이들은 발근된 후에 토양으로 이식하였다