• 한국식품영양과학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.187-194
• /
• 1992

Rhizopus oryzae CJ-2114의 polygalacturonase 생성을 위한 최적조건은 수분이 60% 함유된 밀기울 배지에 1% albumin, 0.2% (NH$_4$)$_2$C$_2$O$_4$, 1% sorbitol을 첨가하여 96시간 배양시 최대활성을 나타내었으며, Sep-hadex G-75 및 G-150을 사용한 gel filtration과 DEAE-cellulose에 의한 이온교환 크로마토그라피를 통하여 이 효소를 11.13배 정제할 수 있었고, 수율은 40.3% 였다. 정제효소는 polyacrylamide gel 전기 영동에 의하여 단일밴드로 확인되었으며 분자량은 SDS-polyacryl-amide 전기영동에 의하여 47,000정도로 측정되었다. 효소의 결정구조는 표면이 거친 기둥모양을 형성하고 있었으며 아미노산 조상은 17종류로써 glutamic acid 함량이 198.74mg/g enzyme로 가장 많았다.

• 한국균학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.64-69
• /
• 1988

사과반점낙엽병균(班點落葉病菌) Alternaria mali의 iprodione 저항성균주중(抵抗性菌株中) 병원성(病原性)이 변화(變化)된 균주( 菌株)를 구하여 pectin질(質) 분해효소(分解酵素)의 활성(活性)과 병원성(病原性)간의 관계를 알아보았다. 인공배지(人工培地)에서는 병원성(病原性)이 큰 $S_1$과 $R_3$균주(菌株)가 병원성(病原性)이 작은 $R_8$균주(菌株)보다 효소활성(酵素活性)이 높았으며 endo-polymethylgalacturonase와 endo-polygal-acturonase의 활성(活性)은 3배 이상이었다. 그러나 pectinmethylesterase와 pectin Iyase의 활성(活性)은 $S_1$균주(菌株)가 $R_3$와 $R_8$보다 높게 나타났다. 증류수(蒸溜水)로 투석(透析)시킨 사과배지(培地)에서 각 균주(菌株)는 높아진 효소활성(酵素活性)을 보였으나 균의(菌) 생장(生長)은 감소(減少)하였다. 또한 iprodione을 첨가(添加)하므로써 감수성(感受性) 균주(菌株)인 $S_1$의 효소활성(酵素活性)과 균사생장(菌絲生長)은 감소(減少)되었으나, 저항성균수(抵抗性菌洙)중 병원성(病原性)이 큰 $R_3$균주(菌株)는 투석(透析)시킨 사과배지(培地)에서 exo-polygalacturonase를 제외(除外)한 효소(酵素)의 활성(活性)이 증가(增加)되었다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.195-200
• /
• 1992

Rhizopus oryzae CJ-2114가 생성하는 polygalactur-onase의 최대활성을 위한 pH는 4.0, 최적온도는 4$0^{\circ}C$ 였으며, 효소활성화 에너지는 2.049㎉/㏖이었다. 정제효소의 Km값과 $V_{max}$ 값은 54.05mM, 13.9m mole/min이었고, pectin보다 polygalacturonic acid를 특이적으로 분해하였다. 이 효소는 약산성의 pH에서 안정성을 보였으며, 온도에 의한 안정성은 4$0^{\circ}C$였으며, 5$0^{\circ}C$이상에서는 급격한 효소단백질의 불활성화가 진행되었다. 금속이온중 $Na^{+}$ 이온에 의해 활성이 유지되며 C $u^{2+}$, P $b^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$이온 등은 효소활성을 저해하였다. 효소저해제 중 maleic anhydride와 iodine등에 의해 효소활성이 저해되어 효소분자중의 histidine의 imidazole기 와 cystein의 SH기가 효소활성에 관여함이 입증되었다. 이 효소의 기질분해양상을 여지 크로마토그라피로 확인한 결과 반응초기에는 monomer, dimer, oligomer 등이 생성되었고, 시간이 경과할수록 oligomer는 사라지고 monomer, dimer만이 생성되는 것으로 보아 endo 형인 것으로 판단되었으며, 효소의 과즙청징도 측정에서는 약 18.2$\times$$10^3$unit에서 거의 청징화 되었다.

• 생명과학회지
• /
• 제16권4호
• /
• pp.653-658
• /
• 2006

사과 겹무늬썩음병균이(Botryosphaeria dothidea) 생성하는 세포벽 분해효소인 endopolygalaturonase를 억제하는 polygalacturonase-inhibiting protein (PGIP)를 사과 과실로부터 분리하였다. 분리되어진 사과 PGIP는 사과 겹무늬썩음병균이 생성하는 PG에 대하여 혼합형의 저해를 나타내었다. PGIP의 반응 최적온도는 $40^{\circ}C$이며 최적 pH는 5.0이었다. 이 효소는 $60^{\circ}C$까지는 비교적 안정하였으나 $70^{\circ}C$에서는 효소의 활성이 완전히 억제되었으며 pH 4.0에서 8.0까지는 안정하였다. PGIP는 $K^+$, $Cu^{2+}$, $Mg^{2+}$, $Ca^{2+}$ 과 $Zn^{2+}$ 등의 금속이온과 SDS 그리고 CDTA에 의해 효소의 활성이 저해되었다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제36권12호
• /
• pp.1633-1636
• /
• 2007

본 연구에서는 효소의 활성을 증진시킬 수 있는 새로운 방법의 개발을 위하여 미생물로부터 분리, 정제된 polygalacturonase(PGase)에 xanthan gum, guar gum, locust bean gum 등과 같은 교질물질을 첨가함으로써 효소의 안정성 외에 활성을 특이적으로 향상시킬 수 있는 새로운 방법 조사하였다. 정제된 PGase를 0.2%의 상술한 교질물질을 함유하는 동일한 완충용액에 잘 혼합시켜 $30^{\circ}C$에서 배양하여 효소의 불활성화에 대한 일차반응 속도상수 k값을 구한 결과, 대조군의 k값이 $0.0082min^{-1}$인데 반해 xanthan gum 첨가 시는 $0.0003min^{-1}$, guar gum 첨가 시는 $0.0001min^{-1}$이하, locust bean gum 첨가 시는 $0.0001min^{-1}$로서 교질물질 첨가에 의해 효소의 안정성이 현저히 증가하였다. 또한 대조군에 비해 xanthan gum 첨가 시는 PGase의 상대활성이 89%가 증가되었으며, guar gum 첨가 시는 97%, locust bean gum 첨가 시는 90%가 증가되어 상술한 교질물질들이 효소의 활성 촉진제로서의 기능이 있음을 확인할 수 있었다. Guar gum 처리에 의해 약 2배의 활성이 증진된 상태로 당근 단세포 생성 반응을 수행한 결과 모든 반응시간에서 guar gum을 가했을 때가 PGase만을 가하여 단세포화 반응을 수행한 경우보다 높은 수율을 보였으며, 단세포화 반응 2시간 경과 후에 대조군 대비 13%의 가장 높은 수율 향상을 보였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제21권1호
• /
• pp.13-17
• /
• 1993

만다린 오렌지 과피를 기질로 하여 Asp. niger의 구연산 발효를 행하여 관련된 일련의 효소적 활성을 합성배지와 비교한 결과 만다린 오렌지 과피배지에서는 괴피에 함유된 Pectin이나 조섬유 등의 자화로 인하여 Polygalacturonase와 Pectin의 활성 뿐만 아니라 CMCase, xylannase 및 amylase의 활성이 높게 나타났다.

• Journal of Microbiology
• /
• 제35권2호
• /
• pp.134-140
• /
• 1997

Botrytis cinerea T91-1 has been shown to produce at least four different polygalacturonases into a liquid medium containing citrus pectin, a carbon sousrce. One of the enzymes, which had an apparent molecular weight of 66 kDa estimated by denatured polyacrylamide gel electrophoresis, was purified to electrophoretic homogeneity by a series of procedures including a cetone precipitation, ion exchange, heparin affinity, and reverse phase column chromatographies. The molecular weight of native enzyme was determined to be 64 kDa by gel permeation chromatography indicating the enzyme to be a single polypeptide chain. By viscometric analysis, the enzyme was revealed as exo-polygalacturonase. The enzyme activity was inhibited by divalent cations such as $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, and Cu$^{2+}$. Km and Vmax for polygalacturonic acid hydrolysis were 0.33 mg/ml and 28.6 nM/min, respectively. The optimum temperature for enzymatic activity was 5$0^{\circ}C$. And the enzyme showed optimal pH values between 4.0 and 5.0. The enzyme was stable upto 12 hours in the range of pH 3 to 8 and at temperature below 3$0^{\circ}C$.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제25권2호
• /
• pp.131-134
• /
• 1998

Antisense PG 유전자 형질전판 토마토로부터 자식시켜 얻은 종자를 kanamycin 내성을 이용하여 5세대까지 분리, 육성하여 antisense PG 유전자가 안정적으로 고정된 식물체를 얻었다. 이들 식물체에는 genomic DNA gel blot 분석으로 antisense PG 유전자가 안정적으로 유전되며 northern blot 분석을 통하여 antisense RNA가 발현됨을 확인하였고, 또한 antisense RNA에 의한 endogenous PG 유전자의 발현 저해를 분석하였다. Antisense PG 유전자 형질전환 성숙 토마토내 PG 효소 활성이 비형질전환 성숙 토마토에 비하여 37-65% 수준으로 저하되었다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제17권6호
• /
• pp.421-425
• /
• 1985

세품종의 고구마 천미, 신미, 원기의 조직 특성을 알아보기 위해 $175{\sim}180^{\circ}C$에서 30분간 가열하여 가열 전후의 고구마의 수분함량, 알콜 불용성 고형분 함량, 전분함량, 경도 및 수용성펙틴, 메타인산 가용성 펙틴, 염산 가용성 펙틴을 측정하였고 polygalacturonase 활성도 비교하였다. 가열중에 고구마의 펙틴질의 조성은 염산 가용성 펙틴이 수용성펙틴과 메타인산 가용성 펙틴으로 변하였다. 분질 고구마인 원기는 수분함량이 가장 낮았으며 알콜 불용성 고형분 함량과 경도가 높았다. 또한 원기의 polygalacturonase 활성이 가장 높았으며 가열 후에 염산 가용성 펙틴 함량의 잔존율도 높았다.

• 한국균학회지
• /
• 제25권4호통권83호
• /
• pp.330-339
• /
• 1997

식물 병원진균 Botrytis cinerea가 분비하는 polygalacturonase의 동위효소 중에서 endo-type의 polygalacturonase를 Phenyl-Toyopearl column chromatography와 DEAE-, Mono Q-, heparin-high performance liquid chromatography법으로 약 68배 정제하였고 sodium dodecylsulfate(SDS)를 포함하는 polyacrylamide gel electrophoresis로 분석하여 단일 띠를 확인하였다. 정제한 효소의 분자량은 SDS-polyacrylamide gel에서 37 kDa로 측정되었으며 약산성인 조건과 $30^{\circ}C$ 이하에서 안정하였으며 최고 활성은 pH 4.5와 $55^{\circ}C$의 온도에서 관찰되었다. 정제한 효소는 polygalacturonic acid를 endo-type으로 가수분해하였고, polygalacturonic acid에 대한 $K_m$값과 $V_{max}$값은 각각 1.1 mg/ml과 250 nmol/min이었다. N-말단의 아미노산 서열을 결정하여 본 결과, 식물이나 다른 진균류에서 보고된 아미노산 서열과 유사성이 없었다.