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양배추 유래의 글루타티온 전달효소의 기질 특이성 및 저해 효과 분석 (Analysis on the substrate specificity and inhibition effect of Brassica oleracea glutathione S-Transferase)

  • 박희중;이희진;공광훈
    • 분석과학
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    • 제22권3호
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    • pp.228-234
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    • 2009
  • 본 연구에서는 식물의 제초제 해독 기구를 알아보기 위해, 양배추 (Brassica oleracea)로 부터 글루타티온 전달효소를 정제하고 외래성 이물질에 대한 기질 특이성과 저해 효과를 분석하였다. 양배추로부터 DEAE-Sephacel 컬럼과 GSH-Sepharose 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 약 10%의 수율로 글루타티온 전달효소를 정제하였다. 정제된 효소에 대해 분자량을 측정한 결과, SDS-polyacrylamide 겔 전기영동으로 측정한 분자량은 23,000Da을 나타내었으며, 겔 크로마토그래피로 측정한 분자량은 48,000Da을 나타내었다. 따라서 정제된 양배추 글루타티온 전달효소는 소단위체의 분자량이 약 23,000Da의 동종이량체라는 사실을 알 수 있었다. 이 효소의 저해제에 대한 효과를 조사한 결과, S-hexyl-GSH와 S-(2,4-dinitrophenyl)GSH에 의해 활성이 저해되었다. 양배추 글루타티온 전달효소의 기질특이성은 CDNB와 ETA에서 높은 활성을 보였으며, cumene hydroperoxide에 대한 GSH peroxidase 활성도 나타내었다.

非姙娠 및 姙娠한 女子의 血淸蛋白質 패턴의 比較 (The Comparison of Protein Patterns of Sera in Non-Pregnant and Pregnant Women)

  • Ha, Man-Joon;Park, Won-Chul
    • 한국동물학회지
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    • 제29권2호
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    • pp.86-106
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    • 1986
  • 사람의 혈액중 혈청으로써 임신의 진행에 따른 단백질의 변화 양상을 조사함에 있어서 정상인 남자, 비임신 여자, 임신한 여자 및 분만 직후 여자의 혈청을 SDS/polyacrylamide gel 전기영동과 2차원 전기영동 및 아미노산분석을 시도하였다. 각 실험 방법에 의해 분석된 결과는 다음과 같다. 1. SDS/polyacrylamide gel 전기영동에 의해 분자량 약 10,000에서 110,000 dalton 사이의 정상인 남자와 비임신 여자를 비교하였을 때의 숫적 양상은 서로 동일하였으나 bands 3 (22,000 dalton)과 6(39,000)등은 남자에 있어서 여자보다 적은 양으로 나타났다. 비임신 여자와 2주 간격으로 혈액을 채취한 임신한 여자의 혈청단백질 패턴을 비교하면 여러 band들의 양적인 증감이 관찰되었다. 임심한 여자의 단백질은 비임신에 비해 band 3(22,000)이 16주까지는 비임신의 경우와 거의 비슷한 양상을 보였으나 18주부터 임신 말기까지는 단백질의 양이 계속하여 감소되었다. 반면 bands 4(24,000), 9(69,000), 10(70,000), 12(80,000), 13(83,000), 14(86,000), 15(91,000) 및 16(94,000)은 임신이 진행됨에 따라 일반적으로 증가되나 그 이후에는 약간씩 감소하였다. 분만 직후의 혈청단백질의 패턴을 임신 말기와 비교하였을 때 bands 12(80,000), 15(91,000) 및 16(94,000)들의 양이 비교적 증가하였고 여아를 분만한 경우 남아를 분만한 경우보다 bands 4(24,000), 7(51,000) 및 10(70,000)들의 단백질 양이 많음이 관찰되었다. 2. 2차원 전기영동으로 남자와 비임신 여자의 혈청단백질 패턴을 비교하면 spot a(22,000)의 3개의 spot가 남자에 있어서는 나타나지 않았고, spotc(39,000)의 군은 남자에 있어 여자보다 농도가 매우 낮았다. 임신한 여자에 있어 albumin이 임신 10주와 12주에 매우 감소하였고 그 이후에 다시 회복되었다. 그리고 spot f(70,000)는 임신 10주에 매우 감소 되었다가 그 이후에 증가되었다. 3. 각 군들의 아미노산을 분석한 결과 임신한 여자에 있어서 전반적으로 glutamic acid, lysine, aspartic acid, leucine 및 valine이 대체로 많은 양으로 나타났고, methionine, isoleucine 및 glycine이 대체로 적은 양을 가지는 것으로 나타났다. 전체 아미노산의 양은 임신중기에 현저히 증가하였다가 말기에는 중기에 비해 감소되었다. 이상의 결과를 볼 때 임신기간 중에는 모체의 혈청을 구성하는 단백질이 특정한기에 따라 증가하므로 임신한 여자의 혈청단백질을 조사함으로써 임신의 각기에 나타나는 독특한 단백질 양상 변화를 밝혀내는 동시에, 앞으로 좀더 연구함으로써 태아의 성을 단백질 패턴으로 명확히 구별해 낼 수 있을 것으로 생각된다.

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Fermentation and Purification of LacZ-Fused Single Chain Insulin Precursor for($B^{30}$-Homoserine) Human Insulin

  • SeungYup Lee;Jeo
    • Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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    • 제1권1호
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    • pp.9-12
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    • 1996
  • In order to produce the single chain precursor of a novel human insulin analogue, (B30-Homoserine) insulin, the fermentative behaviors of Escherichia coli JM103 were studied, which harbors pKBA plasmid carrying a hybrid gene in which the gene for a single chain precursor was fused with lacZ gene under tac promoter. The maximal induction of gene expression was achieved when more than 0.05 mM of isopropyl-$\beta$-D-thiogalactopyranoside(IPTG) was supplemented to fermentation medium after 4 h cultivation of E. coli, and followed by longer than 2-h fermentation. The hybrid protein of the single chain insulin precursor was isolated from cytoplasmic inclusion bodies by dissolving in 8M urea solution, and purified through DEAE-Sephacel and Sephadex G-200 column chromatographies with a recovery of 35%. The finally purified hybrid protein showed a single band on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel.

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Optimization of Catechol Production Using Immobilized Resting Cells of Pseudomonas putida in Aqueous/organic Two-phase System

  • Chae, Hee-Jeong;Yoo, Young-Je
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제7권5호
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    • pp.345-351
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    • 1997
  • An aqueous/organic two-phase reaction system was applied to the production of catechol using immobilized resting cells of Pseudomonas putida CY 400. Water/ethyl ether system was used because of high partition coefficient of catechol and thus to reduce the product inhibition and degradation. Among the tested immobilization carriers, polyacrylamide gel gave the highest catechol productivity. The immobilization seemed to protect the cells against solvent toxicity. From the simulation of reaction conditions based on two-phase models, it was found that there was an optimum acetate concentration at fixed benzoate and cell concentrations for the catechol productivity. A lower phase volume ratio (lower fraction of organic phase) gave a higher productivity. However, the substrate conversion was low at low phase volume ratio.

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낙구식 점도계와 모세관 점도계를 이용한 점탄성유체의 점성과 특성시간의 측정 (Measurements of Viscosity and Characteristic Times of Viscoelastic Fluids with the Falling ball Viscometer and Capillary Tube Viscometer)

  • 전찬열;황태성;유상신
    • 유변학
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    • 제2권2호
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    • pp.19-27
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    • 1990
  • 레이저와 타이머장치를 설치한 낙구식 점도계에서 구와 니들이 주어진 구간을 통과 하는 시간을 측정하여 종말속도를 정확히 결정하였고 점성이 작은유체와 낮은 전단률 점성 과 영전단률 점성은 속이 빈 알루미늄 구와 니들이 이용하여 측정하였다. 알루미늄 구와 니 들의 속에 철분을 삽입하여 밀도를 다양하게 변화시켰다. 낙구식 점도계에서 측정한 낮은 전단률 점성과 영 전단률 점성 그리고 모세관점도계에서 측정한 높은전단률 점성과 무한 전 단률 점성을 이용하여 점탄성 유체의 특성이완시간을 결정하였다. 실린더 속의 시험용 유체 를 교란시키지 않고 밑면에 떨어진 구를 회수하는 장치를 설치하였다. 이 장치는 하나의 구 로써 점탄성유체의 특성확산시간을 측정하는데 대단히 효과적이었다. Polyacrylamide Separan AP-273 용액(농도 500-200 wppm)의 특성이안시간과 특성화산시간을 낙구식 점도 계와 모세관 점도계의 실험결과를 이용하여 결정하고 폴리며 용액의 퇴화 현상을 실험적으 로 분석하였다.

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유기린계 살충제가 흰쥐의 Cholinesterase활성에 미치는 영향 (Effects of Organophosphorous Insecticides on Mice Cholinesterase Activity)

  • 윤수홍;김신희;박병윤
    • Environmental Analysis Health and Toxicology
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    • 제2권1_2호
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    • pp.17-24
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    • 1987
  • Changes in cholinesterase (ChE) activity, electrophoretic pattern of ChE and histopathologic state on the mice serum, brain and liver by administration of organophos-phorous insecticides were studied. The mice ChE activities on serum, brain and liver decreased by increasing of concentration and time both administration of malathion and DDVP, whereas on serum and brain the activities of the 7 days after administration decreased, and then presented the gradually slight recovery in course of time. The ChE on serum and liver showed many isozyme bands by polyacrylamide gel electrophoresis but several on brain. And isozyme bands disappeared and diffused by administration of organophosphorous insecticides and development of time. The mice liver with administration group of malathion on histopathologic test showed midzonal necrosis between central vein and portal area, and with administration group of DDVP mainly presented portal necrosis on location of potal area.

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Occurrence and Detection of Rice black-streaked dwarf virus in Korea

  • Lee, Bong-Choon;Hong, Yeon-Kyu;Hong, Sung-Jun;Park, Sung-Tae;Lee, Key-Woon
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제21권2호
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    • pp.172-173
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    • 2005
  • Until now, occurrence of Rice black-streaked dwarf virus (RBSDV) is observed in Gyeongsang provinces, southeastern part of Korea. However, recently, the occurrence of RBSDV is increasing and spreading in Jeonra provinces including Gochang-gun, southwestern part of Korea. RBSDV infected plants showed typical symptoms including stunted, deformed leaves with white waxy or black-streaked swelling along the veins. We extracted viral genomic dsRNA from infected leaves and analyzed dsRNA pattern by polyacrylamide gel electrophoresis. Ten genomic segments with similar sized dsRNAs were observed. We also detected RBSDV by reverse transcription (RT)-PCR using specific primers for S10 from genomic dsRNA and observed amplified DNA fragment specific for RBSDV S10.

Synthesis of 3β [L-Lysinamide-carbamoyl] Cholesterol Derivatives by Solid-Phase Method and Characteristics of Complexes with Antisense Oligodeoxynucleotides

  • Lee, Eun-Jung;Lee, Min-hyung;Park, Jong-Sang;Choi, Joon-Sig
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제27권7호
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    • pp.1020-1024
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    • 2006
  • In this report, we describe the synthesis of mono- and di-valent cationic $3\beta$ [L-Lysinamide-carbamoyl] cholesterol (K-Chol) derivatives by solid-phase peptide synthesis method and the characteristics of K-Chol/antisense oligodeoxynucleotide (ODN) complexes. K-Chol was able to interact with antisense ODNs electrostatically and constructed nanometer-sized complexes of 50-100 nm in diameter. The formation of K-Chol/antisense ODN complexes was demonstrated by non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis assay and atomic force microscopy. The cell-associated radioactivity was measured to monitor the cellular uptake of the complexes containing radioactive antisense ODNs using HL 60 cells.

Propagating Spiral Waves Obtained in a Catalyst-Immobilized Gel Membrane by the Belousov-Zhabotinsky Reaction System

  • Kim, Bong-Seong;Jo, Eun-Ae;Basavaraja, C.;Huh, Do-Sung
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제31권7호
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    • pp.1956-1962
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    • 2010
  • The formation of diverse spiral waves was studied in a polyacrylamide gel membrane with ruthenium(4-vinyl-4'-methyl-2,2'-bipyridine)bis(2,2'-bipyridine)bis(hexafluorophosphate) by a gas-free Belousov-Zhabotinisky (BZ) reaction system containing 1,4-cyclohexanedione (1,4-CHD). The gel membrane was found to be receptive for observing propagating waves since a clearer wave-train is obtained during a long reaction time without any disturbance from the immobilized metal catalyst which can be dissolved into the highly acidic solution of the BZ system. The distinctive waves in the system basically depend on both $BrO_3$ and 1,4-CHD in the initial phase, and are influenced by the intensity of illumination of visible light.

체외성숙 우난포란의 체외수정과 발달에 관한 연구 IV. 난구세포의 생화학적 특성 검토 (Studies on In Vitro Fertilization and Development of Bovine Follicular Oocytes Matured in Vitro)

  • 박세필;정형민;이훈택;정길생
    • 한국가축번식학회지
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    • 제16권1호
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    • pp.1-6
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    • 1992
  • These experiments were undertaken as a basic study to understand the role of cumulus cell on in vitro maturation and fertilization process with identifying the cumulus cell-secreted proteins. By sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) and fast protein liquid chromatography(FPLC), the proteins of cumulus cells were identified. The results obtained in these experiments were summarized as follows ; 1. When the proteins secreted from cultured cell for 30 hours were separated by SDS-PAGE, there were a major band (>94,000) and other minor 2 bands with molecular weight ranging 30,000∼67,000 dalton. 2. In addition, the fractionations of these proteins by FPLC were idirectly shown that three bands were hyaluronic acid, chondroitin sulfate, and heparin.

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