• 대한미생물학회지
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• 제35권2호
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• pp.97-108
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• 2000

Two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) is an essential tool of proteomics to analyse the entire set of proteins of an organism and its variation between organisms. Helicobacter pylori was tried to identify differences between strains. As the first step, whole H. pylori was lysed using high concentration urea contained lysis buffer [9.5 M Urea, 4% CHAPS, 35 mM Tris, 65 mM DTT, 0.01% SDS and 0.5% Ampholite (Bio-Rad, pH 3-10)]. The extract ($10\;{\mu}g$) was rehydrated to commercially available immobilised pH gradient (IPG) strips, then the proteins were separated according to their charges as the first dimensional separation. The IPG strips were placed on Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) to separate according to molecular mass of the proteins as the second dimension. The separated protein spots were visualised by silver staining in order to compare different expression of proteins between strains. Approximately 120 spots were identified in each mini-protein electrophoresised gel, furthermore about 65 to 75 spots were regarded as identical proteins in terms of pI value and molecular weight between strains used. In addition, distinct differences were found between strains, such as 219-1, Y7 and Y14, CH150. Two representative strains were examined using strips which had pH range from 4 to 7. This strips showed a number of isoforms which were considered large spots on pH range 3-10. Furthermore, the rest of spots on pH 4-7 IPG strips appeared very distinctive compared to broad range IPG strips. 2-DE seems to be an excellent tool for analysing and identifying variations between H. pylori strains.

• 한국축산식품학회지
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• 제26권1호
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• pp.43-48
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• 2006

도압 후 오리 가슴육의 발골시간과 취급방법이 육질에 미치는 영향을 알아본 결과, 처리구 간의 pH는 유의적인 차이가 없었으나 냉동해동 처리구가 냉도체 발골구에 비해 높은 명도($L^*$)와 황색도($b^*$)를 나타내었을 뿐만 아니라 짧은 근절길이와 높은 가열감량을 보였고, 그 결과 높은 전단가를 나타내었다. 이 같은 결과는 냉동해동 처리구의 근원섬유 단백질 용해성이 낮은 것과 관련이 있었으며, 낮은 용해성은 nebulin과 같은 고분자 단백질이 사후초기에 냉동에 의해 분해되지 않은 결과로 사료된다. 따라서 오리고기는 도압 후곧바로 발골하여 냉동 또는 냉장 유통하는 것보다 냉도체 발골하여 냉장 유통하는 것이 육질향상을 위해 바람직할 것으로 사료된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제35권4호
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• pp.237-241
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• 1992

Halomonas sp. ES 10이 생산하는 protease를 methanol 침전, Sephadex G-150, G-200 및 DEAE-Sephadex A-50으로 여과하여 비활성이 1,014 units/mg protein, 수율이 7%로 정제하였다. 이 효소의 작용 최적온도 및 pH는 $35^{\circ}C$ 와 pH 11.0 이었고, $50^{\circ}C$ 에서 40분에 70%의 잔존활성을 보였으며 $pH\;7.5{\sim}11.0$ 범위에서 안정하였다. 정제효소의 우유 casein에 대한 Km값은 7.4 mg/ml 이었다. $Li^+$, $Ca^{2+}$, SDS, Tween 80 등은 효소 활성을 다소 증가시키고 $Hg^{2+}$과 EDTA는 심히 저해하였다. DFP와 PMSF에 의해서는 각각 63%, 107%의 상대활성을 보여 이 효소는 serine protease가 아님을 시사하였다. 0.5 M과 1 M의 NaCl 농도에서 각각 95%와 65%의 상대활성을 보여 일반 미생물의 protease 보다 각각 20%, 15%씩 상대활성이 높았다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제27권1호
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• pp.1-8
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• 1989

폐흡충증의 진단은 객담검사법이 가장 확실한 진단 방법이기는 하지만 폐흡충이 폐에 기 생한 경우에도 충란 검출이 어려울 때가 있으므로 혈청학적 진단법이 이용되고 있다. 혈청학적 진단법에 사용되는 항원인 기생충 추출물, 즉 조항원은 분류학적으로 유사한 기생충과 서로 공유하고 있는 공통 항원 때문에 교차 반응을 일으키는 경우가 있다. 이 연구는 발육단계 별 폐흡충에서 만든 조항원을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)로 전기영동한 다음 EITB(enzyme-linked immunoelectrotransfer blot)를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 시기별로 채취한 고양이 혈청에 대한 특이 반응대를 관찰해 보고자 시행하였다. 실험에 사용한 항원은 실험적으로 고양이에 감염시켜 3, 5, 8및 12주 만에 얻은 폐흡충의 식염수 추출액 (SEPn; n=감염된 시기)이며 3∼20% linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver stain결과 폐흡충 조항원은 최소한 30개 이상의 band들로 구성되어 있었는데 각 발육단계 에 공통된 항원대로 203, 63, 35, 21, 19, 13 kDa band들이 관찰되었고, 단계별로 차이점도 관찰 되었다. SEPl2에서는 새로운 229 kDa band가 관찰되었다. 주요 항원대에 대하여 EITB를 한 결과 각 항원과 감염 후 5주 이상 된 혈청과 공통적으로 반응한 항원대는 203, 115, 91, 85, 67, 63, 48, 39, 35 및 25 kDa band들이었고, 8주 이상 된 혈청과의 반응에서는 19, 13및 10 kDa 항원대와 공통적으로 일관성 있게 반응하였다. SEP12는 12주 된 혈청과 229 kDa에서 특이하게 반응하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제27권1호
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• pp.9-14
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• 1989

폐흡충중의 진단은 일반적으로 객담에서 충란을 검출하는 것이 가장 확실한 진단법으로 간주되고 있지만 이소기생의 경우는 물론, 본 기생충의 감염자 및 감염 강도의 감소로 인해 실제 폐에 기생한 경우에 있어서도 객담 검사의 민감도가 매우 낮아져 혈청학적 검사의 필요성이 점차 대두되고 있다. 따라서 식염수 추출액을 항원으로 하여 효소면역 측정법을 실시하는 방법으로 면역 진단을 실시하고 있으나 조항원의 단백 구성이 복잡하여 간흡충을 비롯한 몇몇 흡충류 감염자 혈청에서 교차 반응이 야기되고 있다. 그동안 정제 항원을 만들고자 하는 시도가 많았음에도 불구하고 특이 항원의 분리는 실제로 불가능하였다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 폐흡충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 다음 EITB를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 폐흡충 조항원의 폐흡충증 혈청에 대한 특이 반응대를 확인해 보고자 하였다. 실험에 사용된 항원은 실험적으로 개에 감염시켜 24주만에 얻은 폐흡충 성충의 식염수 추출액이며 3∼20%의 linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver 염색한 결과 229 kDa∼10kDa 사이에서 26개의 항원대를 구성하고 있었으며 주요 항원대에 대하여 EITB를 실시한 결과 폐흡충 감염자 혈청은 229, 91, 60, 50, 35∼31, 27, 25, 21, 17, 11 및 10kDa의 분자량을 갖는 항원대와 반응하였다. 간흡충 감염자 혈청은 35∼31, 19, 11및 17 kDa의 항원대와 반응하였고 낭미충 감염자 혈청은 229, 31∼31, 27, 25 및 17kDa의 항원대와 반응하였다. 광절열두조충 1예도 17 kDa의 항원대와 반응하였다. 따라서 91, 60, 21 및 10kDa의 항원대 중 일부가 폐흡충 조항원에 있어서 체홉충에 대한 종특이 항원대로 생각되었으며 향후 immunoblot을 이용한 폐흡충중의 면역진단에 이용될 수 있는 항원대로 간주할 수 있었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제27권1호
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• pp.15-22
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• 1989

혈청내 특이 항체가를 측정하여 폐흡충증을 진단하는 방법은 폐홉충중 환자가 치료받거나 자연 치유된 후 일정기간 지나연 특이 항체가가 음전(陰轉 : negative conversion)된다는 것이 그 전제 조건이다. 이 연구는 폐홉충 중 환자를 프라지콴텔(praziquantel)로 치료한 후 특이 항체가가 변화하는 양상과 음전되는 기간을 면역효소측정법(ELISA)으로 관찰하고, 또 치료 후 회복기 혈청에서 항원 구성 단백칠 중 반응하지 않던 단백질에 대한 새로운 항체가 형성되는지를 관찰하기 위하여 실시하였다. 1982년 5월부터 1988년 9월까지 혈청학척으로 진단한 폐홉충중 환자 210명 중 13명이 프라지관탤 치료($75mg/kg/일{\times}2일$) 후 4개월 이후에 한번 이상 추척검사를 받았다. 이들의 혈청 46개에서 다시 면역효소측정법으로 특이 항체가를 측정하고 또 SDS-폴리아크렬아마이드젤 전기 영동후 연역얼룩법(immunoblot)을 실시하였다. 추적검사를 받은 13명 중 1명은 20개월후 중상이 다시 나타났고 또 특이 항체가가 양성이어서 치료실패자로 하였다. 그 이외의 환자 12영은 치료 후 1주일 이내에 중상이 사라지고 추적 기간은 다르나 항체가가 음전 또는 현저한 저하 경향을 보여 치유된 환자로 판정하였다. 항체가의 변동은 치료후 3개월 이내에는 두가지 양상이었는 바 항체가가 높아지거나 변동이 없는 경우(3개월 이내에 추척검사를 하였던 환자 9영중 6명)와 그대로 저하하기 시작하는 경우(9명중 3명)로 나눌 수 있었다. 치료 후 항체가가 즉각 저하하는 경우에는 계속 저하하여 4~12개월이연 음전하였다. 일시척으로 항체가가 상승하였던 환자에서는 4개월 이후 서서히 저하하며 9~18개월에 음 전하였다. 폐흉충종의 첫 중상 발현후 치료할 때까지의 기간이 짧을수록 음천 기간은 짧은 경향을 보였고 치료 후 3개월간의 일시적인 항체가 상승 현상은 없었다. SDS-폴리아크릴마이드젤 전기영동 후 면역얼룩법을 실시한 바 치료 후 환자 혈청은 치료 전의 반응 양상을 그대로 유지하면서 서서히 반응이 약해지는 방향으로 변화하였으며 치료 전에 반응하지 않던 항원에 새롭게 반응하는 항체가 나타나는 경우는 드물었다.

• 한국축산식품학회지
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• 제28권2호
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• pp.154-159
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• 2008

근육단백질과 카제인염 단백질간의 상호작용의 촉매제로서 TGase의 배양시간과 온도에 따른 물성효과를 측정하기 위하여 본 연구를 실시하였다. 돈육 등심부위의 근원섬유단백질을 추출하였고 배양온도는 $4^{\circ}C$, $37^{\circ}C$로, 배양시간은 0, 0.5, 2, 4시간으로 단백질의 열량분석, 점도, 겔 강도, 전기영동상 패턴의 변화를 측정하였다. 단백질열량변화는 각 단백질 별로 열량변화 패턴이 상이하게 나타났으며 근원섬유와 카제인염의 혼합액은 각각의 단백질 피크와 유사하게 나타났고 배양시간과 온도에 따라 차이를 보여 $4^{\circ}C$에 비하여 $37^{\circ}C$에서 열량변화의 차이가 크게 나타났다. 점도의 경우 배양하지 않은 것과 비교했을 때 $37^{\circ}C$에서 2시간 배양했을 때부터 유의적인 차이를 보이며 증가하였다. 근원섬유단백질을 4.5%의 농도로 가열에 의한 겔의 강도를 측정한 결과, 배양시간이나 온도에 따른 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 전기영동의 경우에도 $4^{\circ}C$ 와 $37^{\circ}C$의 배양의 경우 myosin heavy chain과 카제인 염 단백질 분획이 배양시간이 경과함에 따라 점차 감소하였고, 특히 $37^{\circ}C$에서 30분까지는 큰 변화를 나타내지 않았으나 2시간부터 32-34 kDa 분자량을 갖는 카제인 염단백질의 저분자의 밴드가 사라지고 고분자의 biopolymer를 형성하였다. 이상의 결과를 종합하면 $4^{\circ}C$보다 $37^{\circ}C$에서 단백질 분자간의 상호작용에 의한 TGase의 효과가 뚜렷하였으며 $37^{\circ}C$에서 2시간 이상 배양시 TGase에 의한 현저한 물성의 차이를 보인 것으로 평가된다.

• 미생물학회지
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• 제12권4호
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• pp.159-179
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• 1974

In order to investigate morphological and cultural characteristics of strains in species, Flammulina velutipes, the author collected isolates of Flammultina velutipes at 49 locations in Korea and cultivated these isolates on the various kinds of solid media. After investigating the cultural characteristics, appeared on the various media, he obtained the following results : 1. The variation of colors in the fruit bodies is connected with the variation of climatic environments(composite effects between mean temperature in January and number of rain days of 1mm and over precipitation). The author, therfore, can find out the trend that brown type is distributed in the midland climatic region and yellow type in the southern climatic regoin. 2. Two types can be classified into several strains respectively : the strain of abundant or insufficient productivity, and strain of selectivity or non-selectivity of media. 3. According to the results of mutual comparison of soluble mycelial proteins by disc electrophoresis using polyacrylamide gels, each type has special common protein fractions(brown type : band located at 26..5mm position from surface of gel, yellow type : band located at 24.5mm position from surface of gel), and each strain has special protein fractions too. Therefore this phenomenon seems to support the results obtained by the above-stated morphological and cultural studies. 4. In the adaptability of strains to the temperature, every strain has the nature of growing in lower temperature(the optimum temperature of 20.deg.C to 25.deg.C) except that YI-1 strain has the optimum temperatue of $25^{\circ}C$-26^{\circ}C. And mycelial growth of every strain is discontinued at $35^{\circ}C.$ 5. In the adaptability of strains to the H-ion concentration, every strain has wide adaptable range of H-ion concentration, and has optimum range of pH 5.5 to 6.6 in mycelial growth excepting YA01, BI-2 and YI-1. 6. In the utility of carbon sources, the mycelial growth of every strain is very poor on the media containing xylose(average diameter of mycelial growth : 18mm), and most strains utilize favorably sucrose(39mm), maltose(37mm) and dextrose(35mm) in mycelial growth. In the utility of nitrogen sources, every strain utilizes favorably organic nitrogens(36 mm)more than inorganic nitrogens (25 mm), and utilizes fully peptone nad asparagine in organic nitrogens. Especially BA-1, BIK-2 and YA-1 strains grow vigorously on each media containing various carbon and nitrogen sources. 7. The characteristic tests of the number of days required for mycelial growth, the number of days requried for sprout of young bodies, the length of stipe and the number of fruit bodies formation seem to be useful methods in the early selection of the strain of the abundant productivity.

• 미생물학회지
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• 제37권1호
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• pp.72-79
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• 2001

폐수 처리장의 방류수에 페놀을 첨가한 후 terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP) 방법을 이용하여 세균군집의 구조와 변화를 조사하였다. 시료로부터 얻은 16S rRNA gene은 eubacterial primer로 증폭하였으며, 한 primer는 5'말단에 biotin을 부착하였다. 증폭된 product는 HaeIII와 AluI으로 각각 절단하였고, 절단된 단편 중에서 terminal restriction fragment (T-RF)를 streptavidin paramagnetic particle을 이용하여 분리하였다. 분리된 T-RF는 전기영동과 silver staining을 통하여 확인하였다. 본 실험의 유용성을 검증하기 위하여 표준 균주 10 균주를 대상으로 실험하였고, 균주마다 특징적인 T-RF를 가지는 것과 그 크기가 Ribosomal database project (RDP) 자료로부터 계산된 결과와 일치하는 것을 확인할 수 있었다. 한편, 대조군으로 사용된 페놀을 첨가하지 않은 방류수 시료에서는 Acinetobacter, Bacillus, Pseudomonas 속 등이 우점종을 차지하고 있었고, 페놀 (최종농도 250mg.$l^{-1}$)을 첨가한 방류수 시료에서는 Acinetobacter, Comamonas, Cytophaga, Pseudomonas 속 등이 우점종을 차지함을 알 수 있었다. Gel에서 분리한 Acinetobacter와 Cytophaga에 해당되는 T-RF는 재증폭 및 염기 서열 분석이 가능하였는데, database의 염기서열과 비교한 결과 Acinetobacter junii와 유연관계가 가깝다는 것을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제35권1호
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• pp.7-12
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• 1999

Pseudomons sp. PY002의 exotoxin A 의 발현 양상을 관찰하기 위하여 P.aeruginosa PAO1의 anti-exotoxin A와 immunoblot hybridization을 실시한 결과 배지내에 유용 가능한 철이 고갈됨에 따라 exotoxin A의 발현양은 점차적으로 증가하는 양상을 보였으며, CAS 배지에 점적한 배양 상층액에서 siderophore의 발현양도 증가함을 보였다. P.sp.PY002 의 genomix library를 제조하여, exotoxin A를 분비하는 2개의 클론을 선별하려 pETA23과 pETA42 로 명명한 후, 반응성이 강한 Peta42를 선발하였다. pETA 42는 약 1.7kb 크기의 insert를 가지며, 양쪽 말단에 cloning site 인 pstI site 가 존재하며 2개의 NcoI, 1개의 PvuII, 1개의 SstI , 3개의 SmaI, 1개의 KpnI, 3개의 HaeII, 1개의 EcoRI site가 존재하였다.