The extremely halophilic archaebacterium Haloarcular sp. EH-1 was isolated from solar salts. Haloarcular sp. EH-1 accumulated poly(3-hydroxyalkanoate) (PHA) as intracellular granules. PHA production in batch culture have been studied. The PHA was identified as poly(3-hydroxybutyric acid-co-3-hydroxyvaleric acid) (PHB/HV) of 3-hydroxybutyric acid and 3-hydroxyvaleric acid by the analysis of GC, IR and NMR. The melting temperature of PHB/HV was 152.46$^{\circ}C$, viscosity was 1.25 ㎗/g, and molecular weight was $1.44 X 10^5.$
The effects of growth temperature and nutritional components on the synthesis of poly-3-hydroxybutyric acid, PHB, by filamentation-suppressed recombinant Escherichia coli XL1-Blue (pSYL107) were studied. After culturing XL1-Blue(pSYL107) for 48 hours in complex medium at 30$\circ$C, 7Al g/l of PHB could be obtained with the PHB content and PHB yield of 82% and 0.371 g PHB/g glucose, respectively. Lower concentration of PHB(3.2 g/l) was obtained when cultu- red at 37$\circ$C, which seemed to be due to the instability of this strain having amplified FtsZ activity. The PHB concentration of 3.75 g/l was obtained after culturing 60 hours in R medium supplemen- ted with 20 g/l glucose at 30$\circ$C, which was more than twice higher than that obtained with XL1-Blue(pSYL105). This suggested that the enhancement of PHB synthesis by suppressing filamenta- tion was more significant in a defined medium than complex medium. PHB synthesis could be further enhanced by supplementing a small amount of various complex nitrogen sources. When 5 g/l of beef extract was added to a defined medium, PHB concentration, PHB content, and PHB yield obtained after 60 hours of cultivation at 30$\circ$C were 7.46 g/l, 86%, and 0.375 g PHB/g glucose,respectively.
In order to achieve poly-beta-hydroxybutyric acid (PHB) production using recombinant DNA in various host bacterial cells, the isolation of genes for PHB biosynthesis was attempted. As a result, a 5.2kb DNA fragment containing phbCAB operon of Alcaligenes eutrophus was isolated by colony hybridization using synthetic oligodeoxyribonucleotides as probes. The constructed recmbinant plasmid pSK(+)-phbCAB operon was transferred to Escherichia coli, and the obtained transformant accumulated considerable amount of PHB.
The molecular weight of poly-hydroxybutyric acid (PHB) produced by Alcaligenes sp. K-912 is an important parameter characterizing the physical properties of the polymer. The effects of temperature and the levels of glucose, ammonium, phosphate and amino acids on the molecular weight of PHB were investigated. Molecular weight of PHB by temperature varied in the range of 380,000 to 550,000, 400,000 to 600,000 by glucose, 300,000 to 380,000 by phosphate, 400,000 to 1,000,000 by amino acids, respectively under the experimental conditions.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.31
no.3
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pp.475-481
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2002
Blend films of poly(3-hydroxybutyric acid) (PHB) with chitosan were prepared, and their Physical properties and crystallization were investigated. The degree of crystallinity of PHB/chitosan films by X-ray diffraction decreased with increasing chitosan concentration. In the fourier-transformed infrared spectra, carbonyl peak of PHB became lower with increasing the amount of chitosan. The addition of chitosan to PHB film decreased thermal stability and crystallinity of the blend films. The granular sizes of the films were reduced with the addition of chitosan to the film in the microstructural observation by a scanning electron microscope. Mechanical properties, including tensile strength and percent elongation, of the blend films increased with increasing chitosan ratio in the films. For color of the films, L and b values generally decreased with increasing chitosan ratio, but transparency of the films increased.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.33
no.7
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pp.1224-1229
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2004
The blend films of poly(3-hydroxybutyric acid) (PHB) with chitosan were prepared and water vapor transmission rate, oxygen permeability and lipid permeability of the PHB/chitosan films were measured. Additionally, the biodegradability of the PHB/chitosan films was also evaluated. Water vapor transmission rate and oxygen permeability of the films decreased by the addition of chitosan. The addition of polyethylene glycol (PEG, plasticizer), however, increased the water vapor transmission rate and oxygen permeability of the films. In the evaluation of lipid permeability, all the films except PHB (the film made of only PHB) and PHB-P (the film made of PHB and PEG) did not permeate beef tallow for 24 hours. The consumed oxygen for PHB/chitosan films during incubation was greater than that for the control on the biodegradability determination of the films, which implies that PHB/chitosan films were degraded by the microorganisms. The higher PHB ratio of the films was, the faster biodegradation of the films occurred.
An inducible expression system of poly[(R)-3-hydroxybutyrate] (PHB) depolymerization was established in metabolically engineered Escherichia coli with the PHB biosynthesis genes. The Ralstonia eutropha PHB depolymerase gene was cloned in a vector system containing the PHB biosynthesis genes and expressed under inducible promoter. Recombinant E. coli harboring the PHB biosynthesis genes and depolymerase gene was first cultured for the accumulation of PHB, and then the depolymerase was expressed resulting in the degradation of accumulated PHB into (R)-3-hydroxybutyric acid (R3HB). R3HB could be produced with the concentration of 7.6 g/L in flask culture. Two different PHB biosynthesis genes from Alcaligenes latus and R. eutropha were compared for the production of R3HB. This strategy can be used for the production of enantiomerically pure (R)-hydroxycarboxylic acids with high concentration.
When Escherichia coli W, which is able to utilize sucrose as a carbon source, harboring a high-copy-number plasmid (pSYL105) containing the Alcaligenes eultrophus polyhydroxyalkanoate(PHA) biosynthetic genes was cultured in a defined medium, the final poly(3-hydroxybutyric acid), PHB, concentration obtained was as low as $0.21g/\ell$. Ten different complex nitrogen sources were, therefore, examined for their ability to enhance PHB synthesis when supplemented to a defined medium. Addition of tryptone, casamino acids, casein hydrolysate, or soy bean hydrolysate enhanced PHB synthesis most significantly, resulting in more than 10 times higher PHB concentration compared with that obtained in a defined medium. Furthermore, PHB yield on sucrose was also increased by more than a 10 fold by the addition of these complex nitrogen sources, which suggested that PHB might be efficiently produced by the recombinant E. coli W(pSYL105) using sucrose as a carbon source.
Methanol assimilating bacterium, Pseudomonas sp. ILS-003 was used to investigate the optimum conditions for the production of $poly-{\beta}-hydroxybutyric$ acid from methanol. For PHB production, the optimum initial pH was 6.4 and the optimum temperature was $30^{\circ}C$. Also the optimum methanol concentration was found to be 1.0%(v/v). In the PHB production, $(NH_4)_2SO_4$ was the most effective nitrogen source and the optimum concentration was 0.8 g/l, which was eqivalent to 17.4 in C/N ratio. Also, deficiency of the 2 valence metal ions in the medium had stimulating effect on PHB accumulation. Under the optimum substrate concentration, successive feeding of 0.25%(v/v) methanol was the most effective on PHB production. Under the optimum conditions, 1.94 g/l of PHB and 2.78 g/l of dry biomass were produced in 96 hours, and the yield was 69.8%(w/w).
Poly(3-hydroxybutyric-co-3-hydroxyvaleric) acid(PHB/HV) copolymer synthesis by Pseudomonas sp. HJ from glucose and cosubstrate was investigated. Taxonomic analysis suggested that Pseudomonas sp. HJ was best marched to Pseudomonas picketti having 78.8% similarity. Pseudomonas sp. HJ produced PHB/HV copolymer containing 60.8 mol% HV and 44.9 mol% HV when supplied with hexadecane and propionic acid as a cosubstrate, respectively. The HV composition in PHB/HV copolymer was controlled by varying the concentration of hexadecane and propionic acid. Propionic acid added after 24 hours of incubation was incorporated as the HV monomer in the PHB/HV copolymer up to 49.6 mol%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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