Conditions for lily pollen growth in vitro and transformation were optimized. Active pollen tube development was achieved effectively in a medium containing 7% sucrose with pH adjusted to 5.7 at the temperature of 27$^{\circ}C$ for about 16-24 hours. Pollen growth was little impaired by the presence of kanamycin at concentration up to 100 mg/L. Pollen rains near the beginning of germination stage were more reliable for Agrobacterium-mediated GUS DNA transformation via vacuum infiltration lasted for 20-40 minutes. GUS DNA integration and its expression in fully developed pollen tubes could be confirmed by Southern blot hybridization, RT-PCR and histochemical staining.
Observations were made on Crinum and Catharanthus pollen growth in artificial media by an ultraviolet transmission fluorescence microscope showing synergistic effect on pollen growth with calcium (Ca) and aureomycin. Bright yellow fluorescence of aureomycin enabling to trace out at tissue or cellular level did reveal that the greater accumulation of fluorescence occurred in the pollen tube wall if Ca was supplemented to the media than when aureomycin alone was present. The promotive pollen growth the media of Ca alone was further enhanced by the addtion of aureomycin. It was assumed that the promoted pollen growth with aureomycin in the Ca media was probably brought about by a supporting role of aureomycin in the Ca action.
An important function of pollen aperture is believed to be regulating the water balance of the pollen when subjected to changes in humidity (Shukla, et al. 1998). It has been reported that mature barley pollen rapidly swells upon hydration and pollen tube emerges in a few minutes of germination (Anthony and Harlan, 1920). Although, there could be other factors responsible for rapid hydration of pollen. However, K is widely known for its rapid action as an osmotic regulator (Heslop-Harrison and Heslop-Harrison, 1996). In the present study, changes in K distrbution were traced during different stages of pollen maturation in barley. The existence of K at the aperture area of matured pollen may possibly play other import physiological roles. For example, K is reported to be an essential constituent of pollen germination and even required in higher concentration for pollen tube growth(Fan et al., 2001). These results suggest that there could be a possible relationship between K, located at the aperture area and rapid uptake of water by pollen.
Allergy to Brassica pollen has been reported in some countries. We have cloned a cDNA encoding a Brassica pollen allergen, Bra r 1. Bra r 1 belongs to a new family of $Ca^{2+}$-binding proteins, characterized by the presence of two EF-hand calcium-binding domains. Bra r 1 was detected in the tapetum, microspores, pollen coat and pollen tubes, indicating Bra r 1 is involved in pollen pistil interaction and pollen tube growth. We have engineered the hypoallergenic mutants of Bra r 1 for immunotherapy. Here we describe the review of molecular characterization of Bra r 1.
This study was carried out to clarify the cause of incompatibility in interspecific hybrid plant between Panax ginseng and p. quinquefolium. The floral structure of F,(p.g. x p.q.) hybrid was normal because the redundant anther was 0.2 mm longer than pistil in Fl hybrid and the size and structure of redundant carpel in F, hybrid were similar to P. ginseng and p. quiquefolium Pollens of $F_1$ hybrid did not germinate on stigma of P-quinquefolium but germinated well on stigma of P. ginseng. Pollen tube was able to penetrate styles completely and seed harvest rate was 16.8% in field. However on stigma of $F_1$ hybrid, Pollen did not germinate when P. ginseng was used as male Parent. In addition, the growth of pollen tube was halted on style and seed was not set when P qlfinquefoEi2a was used as male Parent. These suggest that the inhibitor of pollen germination present on stigma caused $F_1$ hybrid sterility. It took 5 hours for pollen grains to germinate, 12 hours to arrive at in trance of ovule, 16 hours to penetrate micropyles in Panax ginseng.
고랭지 파프리카 재배 초기에 기형과 및 단위결과 과실이 많이 발생하는데 야간 저온이 화분 활력 및 생식기관 발달에 미치는 영향을 알아보고자 본 연구를 수행하였다. 주간 $28^{\circ}C$ 동일 조건에서 야간온도를 $13^{\circ}C$ (LNT)와 $20^{\circ}C$ (ONT)로 달리 처리하여 생장상에서 파프리카(Capsicum annuum cv. Plenty)를 재배하였다. ONT와 LNT에서 화분을 채취하여 10, 15, 20, 25, $30^{\circ}C$에서 발아시켰다. 24시간 후 화분의 활력을 살펴 본 결과, 처리에 관계 없이$25^{\circ}C$ 에서 화분 활력이 가장 좋았고 다음이 $30^{\circ}C$였다. $25^{\circ}C$에서 발아율은 ONT화분이 42%, LNT 화분이 21%였다. 화분관 신장길이는 화분발아 온도에 관계 없이 ONT화분이 가장 길었다. 화분관 신장 속도는 $25^{\circ}C$ 에서 발아시킨ONT화분이 가장 빨랐다. 파프리카가 재배된 ONT와 LNT 조건에서 화분 활력의 차이를 알아보기 위해 배지에 화분을 치상 후 ONT와 LNT에서 화분발아 시험을 실시하였다. LNT에서는 야간($13^{\circ}C$) 동안 화분이 발아되지 않았지만 주간($13^{\circ}C$)조건으로 전환되자 화분이 발아되기 시작하였다. 하지만 ONT에서는 야간($20^{\circ}C$) 초기부터 화분이 발아되기 시작하여 주간($28^{\circ}C$)까지 계속 발아가 진행되었다. LNT에서는 과병길이, 자방지름, 수술길이, 화중 및 과중이 증가하였다. 종자수는 처리간 차이가 없었다. LNT처리구에서도 종자가 잘 형성되었던 것은 주간에 수분수정이 이루어졌기 때문인 것으로 보여지지만 기형과나 단위결과 발생 방지를 위해서는 화분발아를 저해하는 저온범위에 대한 정밀한 연구가 수행되어야 할 것으로 보여진다.
Agrobacterium을 이용한 lisianthus화분의 형질전환을 위하여 적정조건을 수립하였다. 화분의 발아 및 화분관의 발달은 화분발아배지(pollen germination medium; PCM)에 sucrose를 $7-15\%$ 첨가 시키고 pH조건을 5.5-7.0으로 조절하여 $20^{\circ}C-27^{\circ}C$에서 배양할 경우 성공적으로 이루어졌다. 형질전환을 위하여 Agrobacterium 현탁액을 lisianthus화분배양액에 첨가하여 진공침윤을 20 min실시하였으며 형질전환화분은 조직화학적 분석 그리고 발현되는 GUS mRNA를 이용한 RT-PCR 및 Southern hybridization에 의한 DNA산물 분석 등에 의하여 GUS발현을 확인하였다. 이러한 결과를 통하여 화분을 이용한 일시발현기술을 제시하게 되었다.
식물화분발아는 수분수정을 통한 식물의 종자형성과 식물개체의 지속적 세대유지를 위한 중요한 요소이다. 따라서, 본 연구에서는 boric acid를 이용하여 형질전환 하지 않은 (NT) 식물과 항암활성 (anti-colorectal cancer mAb CO17-1A, anti-breast cancer mAb BR55) 혹은 항바이러스 활성을 갖는 항체 (anti-rabies virus mAb57)의 유전인자를 발현하는 형질전환식물 간의 in vitro pollen germination과 Pollen tube growth의 차이를 알아보았다. Boric acid의 화분발아에 미치는 영향을 보기 위하여 0, 5, 10, 15, 20, $40{\mu}g/mL$의 농도를 갖는 발아용액 (germination buffer)을 담배식물 화분에 처리하여 pollen germination rate을 본 결과 $20{\mu}g/mL$에서 가장 높게 발아율 (49.5%)을 보였다. Boric acid ($20{\mu}g/mL$)에 대해 형질전환식물과 NT 식물에서 화분발아율을 관찰한 결과, boric acid를 처리하지 않은 화분에 비해 형질전환여부에 관계없이 발아율이 3-10배 증가하였다. 또한, boric acid $20{\mu}g/mL$농도에서 형질전환식물과 NT 식물의 pollen tube length의 성장률이 가장 높게 나타났다. 시간 별로 형질전환 식물들의 Pollen tube length를 확인 한 결과, germination buffer ($20{\mu}g/mL$)를 처리하고 난 후 3시간까지 가장 빠른 성장률을 보였으며, 3시간 후에는 그 성장률이 둔화됨을 확인하였다. Western blot를 이용하여 식물의 화분과 잎에서 황체유전자 단백질 발현을 확인하였다. 화분과 잎에서의 발현을 비교해 본 결과, 잎에서 항체의 안정한 발현을 확인하였다. 본 연구결과를 통해 $20{\mu}g/mL$의 boric acid가 항체발현 형질전환담배식물의 in vitro pollen germination을 보기 위해 가장 적절한 농도라는 것을 제시하였다. 궁극적으로 의료용 항체유전자를 발현하는 형질전환식물의 in vitro pollen germination viability를 확인함으로써 형질전환식물의 화분의 안정적인 수분수정이 이루어질 수 있음을 간접적으로 제시하였다.
Many flowering plants possess genetically controlled self -incompatibility (SI) system that prevents inbreeding and promotes outcrosses. SI is usually controlled by a single, multiallelic S-locus. In gametophytically controlled system, SI results when the S-allele of the pollen is matched by one of the two S-alleles in the style, while in the sporophytic system self-incompatible reaction occurs by the interaction between the pistil genotype and genotype of, not the pollen, but the pollen parent In the former system the self-incompatible phenotype of pollen is determined by the haploid genome of the pollen itself but in the latter the pollen phenotype is governed by the genotype of the pollen parent along with the occurrence of either to-dominant or dominant/recessive allelic interactions. In the sporophytic type the inhibition reaction occurs within minutes following pollen-stigma contact, the incompatible pollen grains usually failing to germinate, whereas in gametophytic system pollen tube inhibition takes place during growth in the transmitting tissue of the style. Recognition and rejection of self pollen are the result of interaction between the S-locus protein in the pistil and the pollen protein. In the gametophytic SI the S-associated glycoprotein which is similar to the fungal ribonuclease in structure and function are localized at the intercellular matrix in the transmitting tissue of the style, with the highest concentration in the collar of the stigma, while in the sporophytic SI deposit of abundant S-locus specific glycoprotein (SLSG).is detected in the cell wall of stigmatic papillae of the open flowers. In the gametophytic system S-gene is expressed mostly at the stigmatic collar the upper third of the style length and in the pollen after meiosis. On the other hand, in the sporophytic SI S-glycoprotein gene is expressed in the papillar cells of the stigma as well as in e sporophytic tape is cells of anther wall. Recognition and rejection of self pollen in the gametophytic type is the reaction between the ribonuclease in the transmitting tissue of the style and the protein in the cytoplasm of pollen tube, whereas in the sporophytic system the inhibition of selfed pollen is caused by the interaction between the Sycoprotein in the wall of stigmatic papillar cell and the tapetum-origin protein deposited on the outer wall of the pollen grain. The claim that the S-allele-associated proteins are involved in recognition and rejection of self pollen has been made merely based on indirect evidence. Recently it has been verified that inhibition of synthesis of S$_3$ protein in Petunia inflata plants of S$_2$S$_3$ genotype by the antisense S$_3$ gene resulted in failure of the transgenic plant to reject S$_3$ pollen and that expression of the transgenic encoding S$_3$ protein in the S$_1$S$_2$ genotype confers on the transgenic plant the ability to reject S$_3$ pollen. These finding Provide direct evidence that S-proteins control the s elf-incompatibility behavior of the pistil.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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