Oxomemazine이 muscarinic receptor subtypes에 대하여 선택성을 가지는지에 관한 지견을 얻고자, 대뇌, 심실 및 회장 muscarinic receptor에 대한 oxomemazine의 결합성질을 조사, 비교하였다. $[^3H]QNB$ 포화결합실험 결과 세 조직의 muscarinic receptor는 $[^3H]QNB$에 대해서는 affinity가 약 60pM인 단일 receptor인 것으로 추정되었다. 대뇌에서 pirenzepine과 oxomemazine의 $[^3H]QNB$ 결합억제에 대한 Hill coefficient는 각각 0.67 및 0.8로서 대뇌에는 이들 약물에 대하여 affinity가 서로 다른 두 종류의 muscarinic receptor subtypes가 존재하는 것으로 나타났으며, pirenzepine에 대한 high $affinity(M_1)$와 $low affinity(M_2)$ receptor 및 oxomemazine에 대한 high $affinity(O_H)$와 $low\;affinity (O_L)$ receptor의 분포비는 약 60:40 및 40:60이었고, $M_1$과 $M_2$ receptor에 대한 pirenzepine의 $K_i$치는 16nM 및 431 nM, $O_H$와 $O_L$, receptor에 대한 oxomemazine 의 $K_i$치는 80nM 및 1350nM이었다. 그러나 심실과 회장에서 이들 약물의 $[^3H]QNB$ 결합억제에 대한 Hill coefficient는 1에 가까웠다. 심실과 회장 muscarinic receptor에 대한 pirenzepine의 $K_i$치는 850nM 및 250nM, oxomemazine의 $K_i$치는 1460nM 및 670nM로서 대피에서 이들 약물의 low affinity receptor에 대한 $K_i$치에 가까웠다. 즉, muscarinic receptor에 대한 affinity면에서 oxomemazine은 pirenzepine과 같이 대뇌에서 가장 높았으며, 회장에 대해서는 중등도였고, 심실에서 가장 낮았다. 이로 보아 oxomemazine은 $M_1\;receptor$에 선택성이 있는 것으로 추정된다.
Dibenamine inhibited [$^{3}$H]quinuclidinyl benzilate ([$^{3}$H]QNB) binding in both concentration and incubation time-dependent manners. The $IC_{50}$/ value of dibenamine for the inhibition of the specific binding of 100 pM [$^{3}$'H]QNB following incubation of cerebral microsomes with dibenamine at 37.deg. C for 15 min was 20.mu.M. Dibenamine irreversibly decreased the binding site concentration for [$^{3}$H]QNB binding without affecting the affinity of [$^{3}$H]QNB for the muscarinic receptor. Analysis of the pirenzepine inhibition curve of [$^{3}$H]QNB binding to cerebral microsomes indicated the presence of two receptor subtypes with high(M$_{1}$ receptor, Ki=5nM) and low (M$_{2}$ receptor, Ki=160nM) affinity for pirenzepine. However, dibenamine(20.mu.M) treatment under the condition employed in these experiments caused steepening of the pirenzepine competition curve. The Ki value for pirenzepine in dibenamine treated-microsomes was approximately 120nM. suggesting a selective decrease in the number of M$_{1}$ receptor. Although dibenamine also inhibited [$^{3}$H]QNB binding to ventricular microsomes with $IC_{50}$/ value of 120.mu.M, the sensitivity for dibenamine in the ventricle was much lower than that in the cerebrum. These results indicate that dibenamine at low concentrations welectively inactivates the muscarinic M$_{1}$ receptor.
교감신경절 전달에 무스카린성 수용체 아형과 니코틴성 수용체가 기능적으로 어떻게 작용하는지를 알아 보기 위하여 척수가토에서 척수를 통한 교감신경절전섬유의 자극에 의한 승압반응과 신경절 $M_1$수용체 및 니코틴성 수용체 흥분제인 McN-A-343과 DMPP의 승압반응에 대한 $M_1$수용체 길항제인 pirenzepine, $M_2$수용체 길항제인 AF-DX116 및 니코틴성 수용체 길항제인 mecamylamine의 영향을 조사하였다. 먼저 $M_1$ 및 $M_2$수용체의 작용을 선택적으로 차단하는 pirenzepine과 AF-DX116의 용량을 구하기 위해 chlorisondamine-처리가토에서의 $M_1$수용체를 통한 작용인 McN-A-343의 혈압상승작용과 $M_2$수용체를 통한 작용인 bethanechol (BCh)에 의한 심박수감소작용을 50% 억제하는 양$(LD_{50})$을 각각 구한 결과 pirenzepine의 혈압상승작용에 대한 $ID_{50}$가 $30\;{\mu}g/kg$였으며 AF-DX116의 심박수감소작용에 대한 $ID_{50}$가 $27\;{\mu}g/kg$였다. 제 8흉추부위에 삽입한 전극을 통한 교감신경절전섬유 전기자극에 의해 혈압상승작용 $(24{\pm}1.8\;mmHg)$을 나타냈으며 이 혈압상승작용은 pirenzepine 3, 10, 30 및 $100\;{\mu}g/kg$에 의해 $20{\sim}25%$정도 용량에 관계없이 비슷한 정도로 억제되었으나 AF-DX116 $100\;{\mu}g/kg$에 의해서는 영향받지 않았다. Mecamylamine은 용량의존적으로 이 승압작용을 억제하였으며 mecamylamine의 이 억제작용은 pirenzepine $30\;{\mu}g/kg$에 의해서는 유의하게 강화되었으나 AF-DX116 $100\;{\mu}g/kg$에 의해서는 영향받지 않았다. 척수이단가토에서 McN-A-343 $(100\;{\mu}g/kg)$ 및 DMPP $(100\;{\mu}g/kg)$는 혈압상승작용을 나타냈으며 pirenzepine과 AF-DX116은 McN-A-343의 승압작용은 용량의존적으로 억제하였으나 DMPP의 승압작용에는 영향을 미치지 못하였고 mecamylamine은 양약물의 승압작용을 모두 용량 의존적으로 억제하였다. 이상의 실험성적은 척수가토에서 절전교감신경절 자극에 의한 혈압상승에는 $M_1$수용체의 흥분이 일부 관여하나 $M_2$수용체의 흥분은 관여하지 않으며 교감신경절전달에서 $M_1$수용체의 흥분이 니코틴성 전달을 부분적으로 용이하게 하나 $M_2$수용체는 작용하지 않음을 시사하고 있다.
The binding characteristic of oxomemazine to muscarinic receptor in the cerebrum, heart, and ileum were compared to those of pirenzepine to investigate whether oxomemazine could classify the muscarinic receptor subtypes. 〔$^3$H〕Quinucl idinyl benzilate(QNB) identified a single class of muscarinic receptors with apparent K$\sub$D/ value of about 60 pM in three tissues. Analysis of the pirenzepine inhibition curve of 〔$^3$H〕QNB binding to cerebral microsome indicated the presence of two receptor subtypes with high (Ki=16 nM, M$_1$-receptor) and low (Ki=400 nM, M$_2$-receptor) affinity for pirenzepine. Oxomemazine also identified two receptor subtypes with high (Ki=84 nM, On-receptor) and low (Ki=1 4 ${\mu}$M, O$\sub$L/-receptor) affinity in rat cerebral microsome, The percentage population of the M$_1$-and M$_2$-receptors to the total receptors were 61 : 39, and those of the O$\^$H/- and O$\sub$L/-receptors 39 : 61, respectively, However, the Hill coefficients of these two drugs for the inhibition of 〔$^3$H〕QNB binding to the heart and ileum were close to unity which indicated that these drugs bound to a uniform population of receptors in these two tissues. The Ki values for the low affinity sites of pirenzepine and oxomemazine in the cerebrum were similar to those of these drugs in the heart ileum. Both pirenzepine and oxomemazine increased K$\sub$D/ value for 〔$^3$H〕QNB without affecting the binding sites concentration and Hill coefficient for the 〔$^3$H〕QNB binding. Oxomemazine had a 10-fold lower affinity at Ma-receptors than at M$_1$-receptors, and pirenzepine a 8-fold lower affinity at O$\sub$L/-receptors than OH-receptors. Analysis of the shal low competition curves of oxomemazine for the H$_1$ receptors and pirenzepine for the O$\sub$L/-receptors yielded that 69% of the M$_1$-receptors were of the O$\sub$H/-receptors and the remaining 31% of the O$\sub$L/-receptors, and that 29% of the O$\sub$L/-receptors were of the M$_1$-receptors and 71% of the M$_2$-receptors. However, M$_2$ for oxomemazine and O$\sub$H/ for pirenzepine were composed of a uniform population. These results suggest that oxomemazine could discriminatethe muscarnic receptor subtypes and may subclassify the M$_1$-receptors into two subtypes.
흰쥐, 개, 고양이의 뇌내의 머스커린수용체에 작용함이 알려져 있는 physostigmine(PS)의 동맥혈압에 미치는 효과를 urethane마취토끼에서 조사하였다. 정맥내 (iv) PS $25{\sim}250{\mu}g/kg$은 혈압변동을 일으키지 않았다. 그러나 토끼를 chlorisondamine(CS), hexamethonium, 뇌실내 (icv) clonidine, icv xylazine, icv reserpine으로 처리후 또는 척수이단후에는 승압반응을 일으켰다. CS처리토끼의 iv PS승압반응은 prazosin또는 pirenzepine처리후에는 현저히 약화되었다. Iv PS는 CS처리나 척수이단토끼에서 일어나는 McN-A-343의 승압효과를 억제하였고 또 McN-A-343주입시에는 iv PS는 승압을 일으키지 않았다. DMPP의 승압효과는 iv PS의 영향을 받지 않았다. Icv PS $12{\sim}100{\mu}g/kg$은 승압반응을 일으켰고 이는 CS처리로 강화되었다. 이 승압효과는 완전치는 않으나 prazosin 또는 pirenzepine으로 억제되었다. Angiotensin II 길항약인 $(Sar^{1},\;Ala^{8})-angiotensin$ II와 prazosin또는 pirenzepine으로 토끼를 처리할때는 icv PS승압효과는 거의 볼 수 없었다. 그러나 이 angiotensin II 길항약은 prazosin, pirenzepine의 iv PS승압반응에 대한 억제효과는 항진시키지 않았다. Icv pirenzepine은 icv PS승압반응은 차단하였으나, iv PS승압효과에는 영향을 미치지 않았다. 본실험성적은 CS처리 및 척수이단토끼에서 볼 수 있는 iv PS승압은 교감신경절의 머스커린수용체의 흥분으로 일어나고, icv PS승압은 뇌내의 머스커린수용체의 흥분으로 교감신경계 및 angiotensin계의 활성도가 높아져서 일어남을 가리키고 있다. 또한 토끼에서는 교감신경절니코틴수용체차단, 교감신경절에 미치는 중추 교감신경의 지배력의 감소 또는 척수이단등으로 교감신경절 머스커린수응체의 감수성이 바꾸어지지 않은한 iv PS는 승압반응을 일으키지 못함을 시사하고 있다.
The nature of the muscarinic receptors in bovine adrenal medulla was investigated in this study. [$^3$H]Quinuclidinyl benzilate(QNB) specifically bound to a single class of muscarinic receptor with a $K_{D}$ value of about 70 pM in bovine adrenal medullary, cardiac ventricular and ileal homogenates. Pirenzepine inhibition curves of [$^3$H]QNB binding to cardiac ventricular and ileal homogenates were steep, indicating the presence of a single class of binding site for pirenzepine with a Ki value of 990 nM and 508 nM, respectively. However, pirenzepine/[$^3$H]QNB competition binding curves in adrenal medulla suggested the presence of two binding sites (Hill coefficient=0.59) with a high( $M_1$) and a low( $M_2$) affinity. Respective Ki values for pirenfepine were 16 nM and 633 nM, with 44% of total sites having a high affinity( $M_1$). Gallamine, which is selective to cardiac $M_2$-receptor, inhibited [$^3$H]QNB binding to adrenal medullary, cardiac ventricular and ileal homogenates with Ki values of 12 $\mu$M, 6 $\mu$M and 13 $\mu$M, respectively. Thus, the binding affinities of pirenzepine and gallamine for $M_2$-receptor in adrenal medulla were similar to those in ileum, which contains the $M_3$-receptor. These results indicate that the $M_1$- and $M_3$- muscarinic receptor subtypes coexist in the bovine adrenal medulla.a.
The binding characteristics of pirenzepine and oxomemazine to muscarinic receptor were studied to evaluate the selectivity of oxomemazine for the muscarinic receptor subtypes in rat cerebral microsomes. Equililbrium dissociation constant $(K_D){\;}of{\;}(-)[^3H]$quinuclidinyl benzilate$([^3H)QNB)$ determined from saturation isotherms was 64-pM. Analysis of the pirenzepine inghibition curve of [$^3H$]QNB binding to cerebral microsome indicatd the presence of two receptor subtypes with high $(K_1 = 16 nM, M_1 receptor)$two receptor subypes with about 20-fold difference in the affinity for high $(k_1 = 84nM, {\;} O_H receptor){\;} and {\;}low{\;} (K_1{\;} ={\;} 1.65\muM, {\;} O_L receptor$) affinity sites. The percentage populations of $M_1{\;} and M_3$, /TEX> receptors to the total receptors were 61 : 39, and those of $O_H{\;} and{\;} O_L$ receptors 39 : 61, resepectively. Both pirenzepine and oxomemazine increaed the $K_D$ value for $[^3H]QNB$ without affecting the binding site concentrations and Hii coefficient for the $[^3H]QNB$ without affecting the binding site concentractions and Hill coefficient for the [$^{3}$H]QNB binding. Oxomemazine had a 10-fold higher affinity at $M_1$ receptors than at $M_3$ receptors, and pirenzepine a 8-fold higher affinity at $O_H$ receptors were of $O_H$ receptors and 71% of $M_3$ receptors. However, $M_3$for oxomemazine and $O_H$for pirenzepine were composed of a uniform population. These results suggest that oxomemazine could be classified as a selective drug for $M_1$ receptors and also demonstrate that rat cerebral microsomes contain three different subtypes of $M_1{\;} M_3$ and the other site which is different from $M_1, {\;} M_2$, /TEX> receptors.
Stimulation of muscarinic receptors by carbachol (CCh) in the circular smooth muscle of the guinea pig gastric antrum causes muscle contraction. In the present study, muscarinic receptor subtype controlling the muscle contraction in response to CCh was studied using putative muscarinic receptor antagonists. Isometric force of the isolated circular muscle strips was measured in an organ bath. CCh contracted the muscle in a dose-dependent way, and each of the three muscarinic receptor antagonists, 4-diphenylacetoxy- N-methylpeperdine methiodide (4-DAMP), methoctramine and pirenzepine shifted the concentration- response curves to the right without significantly reducing the maximum force. The affinities of the muscarinic antagonists $(pA_2\;values)$ obtained from Schild plot analysis were 10.15, 7.05 and 6.84 for 4-DAMP, methoctramine and pirenzepine, respectively. These results suggest that the $M_3-subtype$ mainly mediate the muscle contraction in response to CCh in guinea pig gastric antrum.
The muscarinic acetylcholine receptors of the dog unpregant uterus were characterized using $[^3H]quinuclidinyl$ benzilate(QNB) as a radioligand and the binding of muscarinic receptor agonists and antagonists in the uterus was compared to that in the urinary bladder which contains almost exclusively the M2 receptors in order to determine the receptor subtypes in the uterus. $[^3H]QNB$ binding to uterus and bladder was rapid, saturable and reversible. Scatchard analysis of the saturation data gave linear plots and the Hill coefficients were close to unit, which indicated that each preparation contained a single population of specific binding sites for $[^3H]QNB$. The KD values(120 pM) for QNB were almost identical in both organs, whereas the $B_{max}$ value of 256 fmol/mg protein in the uterus was significantly different from that of 563 fmol/mg protein in the bladder. Muscarinic agonists and antagonists inhibited in a competitive manner the $[^3H]QNB$ binding to the same extent in both organs. The competition binding studies using antagonists(atropine and pirenzepine) exhibited a single binding site and this site had a low affinity for pirenzepine with the Ki value of about 330 nM. However, high and low affinity binding sites were observed with carbachol, methacholine and oxotremorine. These binding studies with agonists and antagonists did not show any differences in drug affinities between uterus and bladder. These results indicate that the muscarinic receptors in the uterus are M2 receptors which have a low affinity for pirenzepine.
흰쥐 적출 부신에서 DMPP와 McN-A-343의 카테콜아민(CA) 분비작용의 차이와 특성에 대해서 연구한 결과 다음과 같다. DMPP(100 uM)와 McN-A-343(100 uM)은 부신정맥내로 투여시 유의한 카테콜아민 분비작용을 나타내었다. Mol농도로 비교시 McN-A-343의 CA분비작용은 DMPP의 약 1/5정도였다. DMPP나 McN-A-343의 반복투여시 반응 급강현상은 관찰할 수 없었다. DMPP의 CA분비작용은 chlorisondamine이나 desipramine또는 $Ca^{2+}-free$ Krebs + EGTA 관류등의 전처치로 의의있게 억제되었으나, pirenzepine, ouabain 및 physostigmine등 전처치에 의해서는 영향을 받지 않았다. 그러나 atropine 전처치시 DMPP의 분비작용은 오히려 증강되었다. McN-A-343의 CA분비작용은 atropine, pirenzepine, chloriondamine, physostigmine 및 $Ca^{2+}-free$ medium plus EGTA 관류등의 전처치에 의해서현처히 차단되었으나 desipramine등에 의해서는 영향을 받지 않았다. 그러나 ouabain의 전치치시 McN-A-343의 분비효과는 크게 증강되었다. 이상의 실험결과로 보아 DMPP와 McN-A-343은 횐쥐 적출관류 부신에서 현저한 CA분비작용을 일으키며, 이는 $Ca^{2+}$ 의존성 임을 보였으며, DMPP의 분비작용은 부신의 nicotine 수용체의 흥분을 통해서 나타내며, 또한 McN-A-343의 분비작용은 $M_{1}-muscarine$ 수용체의 흥분에 의하여 유발되는 것을 생각된다. DMPP의 분비활성이 McN-A-343보다 훨씬 강력한 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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