Pyrophosphate:fructose-6-phosphate 1-phosphotransferase (PFP) catalyzes the reversible interconversion of fructose-6-phosphate and fructose-1,6-bisphosphate, a key step in the regulation of the metabolic flux toward glycolysis or gluconeogenesis. To examine the role of PFP in plant growth, we have generated transgenic Arabidopsis plants that either overexpress or repress Arabidopsis PFP subunit genes. The overexpressing lines displayed increased PFP activity and slightly faster growth relative to wild type plants, although their photosynthetic activities and the levels of metabolites appeared not to have significantly changed. In contrast, the RNAi lines showed significantly retarded growth in parallel with the reduced PFP activity. Analysis of photosynthetic activity revealed that the growth retardation phenotype of the RNAi lines was accompanied by the reduced rates of $CO_2$ assimilation. Microarray analysis of our transgenic plants further revealed that the altered expression of $AtPFP{\beta}$ affects the expression of several genes involved in diverse physiological processes. Our current data thus suggest that PFP is important in carbohydrate metabolism and other cellular processes.
[ $^{31}PNMR$ ] spectroscopy revealed the adenylate kinase-like activity and the phosphotransferase activity from $F_1-ATPase$ of Escherichia coli. Incubation of $F_1-ATPase$ with ADP in the presence of $Mg^{2+}$ shows the appearance of $^{31}P$ resonances from AMP and Pi, suggesting the generation of AMP and ATP by adenylate kinase-like activity and the subsequent hydrolysis to Pi. Incubation of $F_1-ATPase$ with ADP in the presence of methanol shows additional peak from methyl phosphate, suggesting phosphotransferase activity of $F_1-ATPase$. Both adenylate kinase-like activity and the phosphotransferase activity has not been reported from $F_1-ATPase$ from Escherichia coli. $^{31}P$ NMR proved that it could be a valuable tool for the investigation of phosphorous related enzyme.
A Brevibacterium ammoniagenes gene coding for glucose/mannose-specific enzyme II ($EII^{Glc}$) of the phosphoenolpyruvate-dependent phosphotransferase system (PTS) was cloned by complementing an Escherichia coli mutation affecting a ptsG gene, and the complete DNA nucleotide sequence was determined. The cloned gene was identified to be a ptsG, which enables the E. coli transportment to use glucose more efficiently than mannose as the sole carbon source in an M9 minimal medium. The ptsG gene of B. ammoniagenes consists of an open reading frame of 1,983 nucleotides putatively encoding a polypeptide of 661 amino acid residues and a TAA stop codon. The deduced amino acid sequence of the B. ammoniagenes $EII^{Glc}$ shows, at $46\%$, the highest degree of sequence similarity with the Corynebacterium glutamicum EII specific for both glucose and mannose. In addition, the $EII^{Glc}$ shares approximately $30\%$ sequence similarities with sucrose-specific and ${\beta}$-glucoside-specific EIIs of the several bacteria belonging to the glucose-PTS class. The 161-amino-acid C-terminal sequence of $EII^{Glc}$ is also similar to that of E. coli enzyme $IIA^{Glc}$, specific for glucose ($EIIA^{Glc}$). The B. ammoniagenes $EII^{Glc}$ consists of three domains; a hydrophobic region (EIIC) and two hydrophilic regions (EIIA, EIIB). The arrangement of structural domains, IIBCA, of the $EII^{Glc}$ is identical to those of EIIs specific for sucrose or ${\beta}$-glucoside. While the domain IIA was removed from the B. ammoniagenes $EII^{Glc}$ the remaining domains IIBC were found to restore the glucose and mannose-utilizing capacity of E. coli mutant lacking $EII^{Glc}$ activity with $EIIA^{Glc}$ of the E. coli mutant. $EII^{Glc}$ contains a histidine residue and a cysteine residue which are putative phosphorylation sites for the protein.
Journal of mucopolysaccharidosis and rare diseases
/
v.2
no.1
/
pp.19-22
/
2016
Purpose: Mucolipidosis type II (ML II), also known as I-cell disease is an autosomal recessive inherited disorder of lysosomal enzyme transport caused by a deficiency of the uridine diphosphate (UDP)-N-acetylglucosamine:lysosomal enzyme N-acetylglucosamine-1-phosphotransferase (GlcNAc-phosphotransferase). Clinical manifestations are skeletal abnormalities, mental retardation, cardiac disease, and respiratory complications. A severely and rapidity progressive clinical course leads to death before 10 years of age. Methods/Results: In this study we diagnosed three cases of prenatal ML II in two different at-risk families. We compared two procedures -biochemical analysis and molecular analysis - for the prenatal diagnosis of ML II. Both methods require an invasive procedure to obtain specimens for the diagnosis. Biochemical analysis requires obtaining cell cultures from amniotic fluid for more than two weeks, and would result in a late diagnosis at 19 to 22 weeks of gestation. Molecular genetic testing by direct sequence analysis is usually possible when mutations are confirmed in the proband. Molecular analysis has an advantage in that it can be performed during the first-trimester. Conclusion: Molecular diagnosis is a preferable method when a prompt decision is necessary.
A Brevibacterium flavum gene coding for glucose permease of the phosphoenolpyruvate-dependent phosphotransferase system (PTS) was cloned by complementing the Escherichia coli ZSCl13 mutations affecting a ptsG gene with the B. flavum genomic library. From the E. coli clone grown as red colony on a MacConkey plate supplemented with glucose as an additional carbon source, a recombinant plasmid was isolated and named pBFT93. The plasmid pBFT93 was identified as carrying a 3.6-kb fragment of B. flavum chromosomal DNA which enables the E. coli transformant to use glucose or man nose as a sole carbon source in an M9 minimal medium. The non-metabolizable sugar analogues, 2-deoxy-D-glucose (2-DG) and methyl-$\alpha$-D-glucopyranoside (MeGlc) affected the growth of ZSCl13 cells carrying the plasmid pBFT93 on minimal medium supplemented with non-PTS carbohydrate, glycerol, as a sole cabon source, while the analogues did not repress the growth of ZSCl13 cells without pBFT93. It was also found that both $2-deoxy-D-[U-^{14}C]glucose{\;}and{\;}methyl-{\alpha}-D-[U-^{14}C]glucopyranoside$ could be effectively transported into ZSCl13 cells transformed with plasmid pBFT93. Several in vivo complementation studies suggested that the B. flavum DNA in pBFT93 encodes a glucose permease specific for glucose and mannose.
A Brevibacterium lactofermentum gene coding for a glucose-specific permease of the phosphoenolpyruvate-dependent phosphotransferase system (PTS) was cloned, by complementing an Escherichia coli mutation affecting a ptsG gene with the B. lactofermentum genomic library, and completely sequenced. The gene was identified as a ptsG, which enables an E. coli transformant to transport non-metabolizable glucose analogue 2-deoxyglucose (2DG). The ptsG gene of B. lactofermentum consists of an open reading frame of 2,025 nucleotides encoding a polypeptide of 674 amino acid residues and a TAA stop codon. The 3' flanking region contains two stem-loop structures which may be involved in transcriptional termination. The deduced amino acid sequence of the B. lactofermentum enzyme $II^{GIe}$ specific to glucose ($EII^{GIe}$) has a high homology with the Corynebacterium glutamicum enzyme $II^{Man}$ specific to glucose and mannose ($EII^{Man}$), and the Brevibacterium ammoniagenes enzyme $II^{GIc}$ specific to glucose ($EII^{GIc}$). The 171-amino-acid C-terminal sequence of the $EII^{Glc}$ is also similar to the Escherichia coli enzyme $IIA^{GIc}$ specific to glucose ($IIA^{GIc}$). It is interesting that the arrangement of the structural domains, IIBCA, of the B. lactofermentum $EII^{GIc}$ protein is identical to that of EIIs specific to sucrose or $\beta$-glucoside. Several in vivo complementation studies indicated that the B. lactofermentum $EII^{Glc}$ protein could replace both $EII^{ Glc}$ and $EIIA^{Glc}$ in an E. coli ptsG mutant or crr mutant, respectively.
Song, Seng Mi;Chang, Soo Hee;Paik, Kyung Hoon;Jin, Dong-Kyu
Journal of The Korean Society of Inherited Metabolic disease
/
v.5
no.1
/
pp.65-75
/
2005
Purpose: To understand genetic differences and similarities between mucolipidosis and control. Methods: Using the fibroblast of the mucolipidosis II and control, forward and reverse subtracted libraries were constructed. Among these clones, we investigated mutations in the GNPTA (MGC4170) gene, which codes for the ${\alpha}/{\beta}$ subunits of phosphotransferase, and in the GNPTAG gene, which codes for the ${\gamma}$ subunits in 5 Korean patients with mucolipidosis type II or IIIA. Result: Several differentially expressed cDNAs were cloned and their sequences were determined. Mutation analysis of the interested gene, GNPTA was performed and we identified 7 mutations in the GNPTA gene, but none in the GNPTAG gene. The mutations in type II patients included p.Q104X(c.310C>T), p.R1189X(c.3565C>T), p.S1058X(c.3173C>G), p.W894X(c.2681G>A) and p.H1158fsX15(c.3474_3475delTA), all of which are non-sense or frame shift mutations. However, a splicing site mutation, IVS13+1G>A (c.2715+1G>A) was detected along with a non-sense or a frame shift mutation (p.R1189X or p.E858fsX3(c.2574_2575delGA)) in two mucolipidosis type IIIA patients. Conclusion: This report shows that mutations in the GNPTA gene coding for the ${\alpha}{\beta}$subunits of phosphotransferase, and not mutations in the GNPTAG gene, account for most of mutations found in Korean patients with mucolipidosis type II or IIIA.
A new 4.87 kb Escherichia-Pseudomonas shuttle vector has been constructed by inserting a 1.27 kb DNA fragment with a replication origin of a Pseudomonas plasmid pRO1614 into the 3.6 kb E. coli plasmid pBGS18. This vector, designated pJH1, contains an aminogly-coside phosphotransferase gene (aph) from Tn903, a lacZ' gene for $\alpha$-complementation and a versatile multiple cloning site possessing unique restriction sites for EcoRI, SacI, KpnI, SmaI, BamHI, XbaI, SalI, BspMI, PstI, SphI, and HindIII. When pJH1 was transformed into E. coli DHS${\alpha}$ and into P. putida HK-6, it was episomally and stably maintained in both strains. In addition, the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene which was transcriptionally cloned into pJH1 rendered E. coli cells fluorescence when its transformants were illuminated at 488 nm.
3',5'-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) is an important molecule, which mediates diverse cellular processes. For example, it is involved in regulation of sugar uptake/catabolism, DNA replication, cell division, and motility in various acterial species. In addition, cAMP is one of the critical regulators for syntheses of virulence factors in many pathogenic bacteria. It is believed that cAMP acts as a signal for environmental changes as well as a regulatory factor for gene expressions. Therefore, intracellular concentration of cAMP is finely modulated by according to its rates of synthesis (by adenylate cyclase), excretion, and degradation (by cAMP phosphodiesterase). In the present review, we discuss the bacterial physiological characteristics governed by CAMP and the molecular mechanisms for gene regulation by cAMP. Furthermore, the effect of cAMP on phosphotransferase system is addressed.
Kim, Sook-Kyung;Oh, Tae-Gwon;Baek, Moon-Chang;Hong, Jong-Soo;Kim, Byong-Kak;Choi, Eung-Chil
YAKHAK HOEJI
/
v.41
no.3
/
pp.359-364
/
1997
Resistance gene mphK was cloned from Escherichia coli 209K strain which is highly resistant to erythromycin (EM). By using the cloned plasmid pGE64, E. coli NM522 was transformed. The comparison of macrolide-phosphotransferase K [MPH(K)] activity between E. coli 209K and E. coli NM522(pGE64) showed that the total enzyme activity of MN522(pGE64) was fifty-fole higher than that of 209K. To identify characteristics of MPH(K) more precisely. MPH(K) was isolated and purified from the NM522 (pGE64). The final purification f MPH(K) through several stages of purification process was 89 fole and the overall recovery was 11%. This enzyme was monomer with the molecular weight of 34 kDa and its isoelectric point (pI) was 5.0. The optimal pH and temperature for activity were 8.0 and $40^{\circ}C$, respectively.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.