Pectinestrase(PE) 중에 열에 안정한 thermostable pectineterase(TSPE)를 열에 불안정한 thermolabile pectinesterase(TLPE)로부터 구분하기 위하여 $70^{\circ}C$에서 $5{\sim}10$분간 가열 처리하였다. TSPE의 추출 수율을 증가시키기 위하여 추출시간, pH, 온도, NaCl의 농도 그리고 세포벽을 분해하는 가수분해 효소의 사용 등 여러가지 변화를 주어 개발한 최적 조건은 오렌지 착즙액의 pH 4.14와 같은 1 M NaCl의 acetate buffer에 분말시료의 0.2% $Cytolase^{TM}$ 104(cellulase hemicellulase와 pectinase의 혼합물) 첨가하여 가수분해하여 추출하는 것이었다. 증류수로 추출하거나 황산암모늄 $0{\sim}0.3$ 포화도의 분획은 목적으로 하는 PE 이외의 단백질을 제거하는 수단으로 이용할 수 있었다. 또한 5.0% Triton TX-114의 두가지 액상을 이용한 분배의 방법은 추출한 조효소로부터 TLPE와 TSPE를 분리하는 수단으로 이용할 수 있었다.
Valencia 오렌지로부터 추출한 펙틴에스테라제(pectinesterase, PE) 중에서 가열처리하지 않은 PE 조효소를 CM-Sephadex C-50, Phenyl Sepharose CL-4B와 CM-Biogel A의 chromatography를 차례로 수행하여 내열성이 약한 TLPE(thermolabile pectinesterase)와 내열성이 강한 TSPE(thermostable pectinesterase)를 분리 정제하였다. PE 중에서 가열처리한 PE 조효소에서는 위와 같은 정제과정으로 TSPE 만을 분리하였다. TLPE는 비활성 1,005 units/mg이고 35배로 정제된 것을 13.6% 회수할 수 있었으며, 반면에 가열하지 않고 분리한 TSPE는 비활성 3,115 units/mg이고 100.5배로 정제된 것을 1.5% 얻을 수 있었으나 가열하여 분리한 TSPE는 비활성 1,803 units/mg이고 가열처리한 조효소가 140배로 정제된 것을 15.4% 얻을 수 있었다.
Pectinesterase was isolated from the culture medium of Aspergillus japonicus and partially purified by DEAE-Sephadex batchwise, Sephadex G-75 gel filtration and ion exchange chromatography. The purified enzyme solution was completely free from polygalacturonase which depolymerizes pectin molecule. The ability of the pectinesterase to demethylate high methoxyl pectin was investigated. On 20 minute of incubation methoxyl content of low methoxyl pectin decreased from 88% to 6.93%. In general gel prepared with the pectin containing lower methoxyl content showed the lower value of percent sag, and showed the hieher Bel strength. Textural characteristics of pectin gel determined by Rheometer showed that as the methoxyl content was lowered, hardness and resilience of the gel were increased and cohesiveness was decreased. Apple juice containing HMP and organic acids can be converted into low methoxyl pectin apple jelly by the action of pectinesterase and addition of calcium ion. The strength of low methoxyl pectin apple jelly increased when it stored at room temperature.
CNBr-sepharose 4B에 orange pectinesterase(PE)에 결합시킨 affinity chromatography용 수지에 PEI를 선택적으로 결합시킨 후, 높은 이온강도를 갖는 pH 9.5의 용액으로 PEI의 활성 peak를 용출 분리하였다. 분리된 kiwi PEI의 분자량은 12.5% SDS-PAGE 전기영동상에서 약 16.6 KDa 정도인 것으로 나타났다. 분리된 PEI 활성은 $-25^{\circ}C$와 $5^{\circ}C$에서 30일 동안 저장하였을 때 2주간 저장 시 25% 저해활성이 감소하였고 그 이후에는 큰 변화 없이 유지되었으나 실온에서는 급격한 저해활성 감소를 나타내고 30일 저장시 거의 저해활성을 상실하였다. PEI 최적활성 pH는 7.5이고 최적반응 온도는 $10{\sim}60^{\circ}C$ 측정범위에서 낮은 온도이었다. 또한 기질용액 중 NaCl의 0.2M일 때 최적활성을 나타내었으며, kiwi PEI의 PE에 대한 저해작용 방법은 noncompetitive inhibition인 것으로 나타났다. 오렌지 주스 저장시 주스를 열처리하지 않고 PEI 조추출액을 첨가하면 저장기간동안 열처리한 주스와 같이 혼탁도 유지에 효과적이었다. 사과 주스 저장 시 PEI 조추출액 첨가는 비타민 C 함량을 감소시켰으며 오히려 열처리한 주스가 비타민 C함량이 높게 유지되었으며 갈변현상도 적게 일어났다.
본 연구에서는 김치의 대표적인 품질저하현상인 조직감 연화와 관련된 효소의 활성을 조사하여 이를 기초로 향후 김치생산시 기초자료로 사용하고자 몇가지 김치 재료중 존재하는 펙틴가수분해효소활성을 측정하였다. 펙틴가수분해효소중 polygalacturonase의 비활성은 멸치젓, 무의 경우가 높았고, 시료 1g당 효소활성은 150.443 units/g sample인 멸치젓이 가장 높게 나타났으며 고춧가루의 활성도 높게 나타났다. 조직감의 유지에 관여하는 것으로 알려져 있는 pectinesterase의 비활성은 무가 가장 높았으며 멸치젓에서도 높게 나타났다. 시료 1g당 효소활성은 멸치젓이 3.310 units/g sample로 가장 높았으며 무, 마늘의 활성이 각각 0.901, 0.613 units/g sample로 높게 나타났다. 김치 원료의 배합비를 고려할 때 주원료인 무, 배추뿐만 아니라 부원료로 첨가되는 멸치젓 자체에 존재하는 펙틴분해효소가 김치의 숙성 및 유통중 품질변화에 많은 영향을 줄 것으로 예상된다.
배추조직의 연화방지를 위해 0.05 M $CaCI_2$ 용액중에서 배추의 예비열처리와 pectinesterase 주입전처리 및 효소의 침투를 용이하게 하기 위한 감압처리의 효과를 조사하였다. $CaCI_2$ 용액중 예비열처리에 의해 줄기는 약 50% 이상 경도가 증가하였고, 잎사귀의 경우는 약 4-5배 증가하였으며, PE 효소를 첨가한 경우 줄기 및 잎사귀 모두에서 경도가 더욱 증가하여 상승효과를 나타내었다. 배추를 감압처리한 후 효소를 주입 처리한 경우. 잎사귀 부분에서는 별다른 변화가 없었으나 줄기 부분의 경우 감압처리후 효소주입처리한 시료들은 모두 경도가 증가하였으며, 저장시험에 따르면 김치제조 4일째까시 경도유지 효과가 있었으나 그 후 점차 감하였다.
The purpose of this study was to prevent excessive softening of seasoned spinach by heating and freezing through the pre-heating treatment in calcium chloride solution. The pre-heating temperature was set at 60℃, which supports the highest activity of pectinesterase around 60℃. Pre-heating spinach in calcium solution does not affect the chromaticity characteristics of spinach leaves and significantly improves its texture compared to conventional blanching only and pre-heating in water. The improvement of the firmness is related to the formation of strongly cross-linkages between carboxyl groups and Ca2+ by the action of the pectinesterase in spinach. For reheated spinach, the firmness of calcium chloride treated stems were 37.80~44.44 kg, and the control was 28.73 kg. The firmness of calcium chloride treated leaves was 19.73~40.79 kg, and the control was 9.63 kg. Additionally, the total aerobic bacteria in the fresh samples were 3.25~3.99 log CFU/g and 1.97~2.72 log CFU/g in the reheated samples. And the total coliform was not detected in the reheated samples. Considering the color, texture, microbial characteristics and taste quality, the optimum pre-treatment conditions to prevent excessive softening of spinach were 3% calcium chloride solution and 15minutes of treatment.
This study was carried out 19 investigate the characteristics of pectinesterase (PE), polygalacturonase (PG), lipoxygenase(LOX) and peroxidase (POD) in hot pepper to know the effect of hot pepper on food quality during food processing and storage. The results were as follows : 1. The optimum pH of PE was pH 7.5 and the activity of PE below pH 5.5 was revealed scarcely, The concentration of NaCl and $CaCl_2$ that showed the highest activity of PE were 0.2M and 0.05M, respectively. 2. The optimum pH of PG was pH 6.0 and the activity of PG in acidity was higher than that in alkalinity. The activity of PG was maximum at 0.3M NaCl and 0.2mM $CaCl_2$. Above the concentration of 0.5M NaCl and 0.5M $CaCl_2$, the activity of PG was lower than that of PG not adding these salts 3. The optimum pH of LOX was pH 7.0 and pH 8.5. 4. The optimum pH of POD was pH 6.0 and the activity of POD was higher in weak acidity and neutrality than in alkalinity. POD activity was slightly decreased by the increase of NaCl and $CaCl_2$ concentration.
오렌지쥬스 내 pectinesterase를 불활성화하기 위하여 열처리 ($90^{\circ}C$, 60 sec), 초고압처리 $(200{\sim}600\;MPa,\;5{\sim}15\;min)$, 그리고 carbonation $(138{\sim}207\;kPa-CO_2)$과 초고압을 병합처리 하였다. $207\;kPa-CO_2$ 조건으로 carbonation 한 후 600 MPa에서 10 min 동안 초고압처리한 오렌지쥬스는 pectinesterase가 완전히 불활성화되었고, 완전 멸균되었으며, 4% 미만의 비타민 C 파괴를 보였다. 설정된 최적 살균조건($207\;kPa-CO_2$로 carbonation 한 후 $20^{\circ}C$에서 600 MPa 압력으로 10 min 동안 초고압처리)으로 처리한 오렌지쥬스를 $4^{\circ}C$에서 저장하면서 pectinesterase 불활성화, 열처리, 그리고 초고압처리한 오렌지쥬스와 품질을 비교하였다. Carbonation과 초고압의 병합처리 된 오렌지 쥬스는 저장기간 동안 PE의 재활성화를 보이지 않았으며, 열처리에 상당하는 살균효과를 유지하였다. 비타민 C 함량은 $4^{\circ}C$ 저장의 경우 모든 처리방법에서 안정한 결과를 보였으나, $30^{\circ}C$ 저장의 경우 열처리한 시료에서 급격한 감소를 나타내었다. Carbonation과 초고압의 병합 처리는 오렌지 쥬스의 L값을 상승시켰으며 높은 b값을 유지하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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