Xanthomonas axonopodis pv. glycines에 의해 발병되는 콩 불마름병은 콩에 가장 많이 발생하는 중요한 세균성 병해 중 하나이다. 게다가 병원균은 강한 병원성을 가지고 한국 전역에 분포하고 있지만, 한국에서는 불마름병방제를 위한 약제나 저항성 품종이 개발되어 있지 못한 실정이다. 따라서 본 연구의 목적은 불마름병을 화학적 방법으로 방제할 수 있는 방법을 개발하기 위해 수행되었다. 콩 불마름병 병원균의 효과적인 생육억제 약제를 선발하기 위해 여러 가지 살세균제들(8개의 항생제, 2개의 구리화합물, 1개의 quinoline, 18개의 농약)을 이용하여 효과를 확인하였다. 실내 생장억제 효과조사 결과, tetracycline, streptomycin sulfate 처리에서 병원균의 생육이 크게 억제되었으며, 또한 oxolinic acid도 병원균의 생육억제 효과가 우수하였다. 하지만 vancomycin, polymyxin B sulfate and copper compounds 등은 불마름병 병원균의 생육억제효과가 확인되지 않았다. 18종의 농용약제 중에는 streptomycin sulfate + oxytetracycline(18.8 + 1.5%)WP, oxytetracycline(17%)WP, oxolinic acid(20%) 등이 실내에서 병원균의 생육억제 효과가 높은 것으로 조사되었다. 선발된 5종의 농용약제에 대하여 포장에서 방제효과 시험을 실시한 결과, streptomycin sulfate + oxytetracycline (18.8 + 1.5%) WP와 oxytetracycline(17%) WP가 자연 감염된 태광콩 포장에서 70% 이상의 높은 방제효과를 나타내었다. 그러므로 콩불마름병균에 대한 강한 억제효과를 가지는 이 약제들은 콩 불마름병의 화학적 방제에 실용성이 있을 것으로 생각된다.
2018년 경북 김천 지역 포도 하우스 재배 농가에서 포도송이가 무르고 마른 포도 과실이 낙과되는 피해가 발생하였다. 병반 표면에는 검갈색의 곰팡이 포자가 형성된 것을 확인할 수 있었으며, 이병과실에서 병원균을 분리하여 균학적 특징 및 염기서열 분석결과 병원균은 Aspergillus tubingensis로 동정하였다. 이 증상의 원인균을 증명하기 위해 이병과실에서 병원균을 분리하여 병원성 검정을 수행한 결과, 고온으로 갈수록 급격히 병이 진전되고 하우스에서 발생한 병징과 일치하였다. 또한, 포도송이 썩음 병원균에 대하여 화학농약 약제의 선발을 통해 병원균의 확산을 막고 예방을 하고자 단제 7종 균사생장 억제 효과 검정을 실시하였다. Dipenoconazole, tebuconazole, metconazole, iminoctadine, captan 5가지의 약제에서 균사생장 억제 효과가 확인되었다. A. tubingensis에 의한 포도송이썩음병(가칭)은 2018년도부터 국내 샤인머스켓 포도에 처음 발생되고 있음을 보고하고, 효과적으로 포도송이썩음병의 발생을 예방할 수 있는 5종의 약제를 보고한다.
2015년과 2017년 6-7월에 전라북도 전주와 임실에서 매실, 복숭아, 살구, 자두, 체리 등 핵과류에 잿빛무늬병이 2-5% 정도 발생하였다. 잿빛무늬병은 일부 꽃과 잎에서도 발생하였지만, 주로 과실에 발생하였다. 초기병징은 과실의 표면에 작은 원형의 갈색 반점이 생기고, 병이 진전됨에 따라서 점차 수침상으로 확대되었으며, 후기에는 갈변된 원형의 병반 위에 백색 내지 회백색의 포자 덩어리가 밀생하여 눈꽃처럼 피고, 과실 전체로 확대되었다. 핵과류에서 분리된 분생포자는 분지된 염주상으로 사슬모양(monilioid chains)을 나타냈으며, 단생, 투명하고, 난형-레몬형이었다. 분리된 균주들의 온도별 균사생장 적온은 $20-25^{\circ}C$이며, 균사생장에 적합한 배지는 OA와 PDA이었다. 핵과류 잿빛무늬병을 일으키는 병원균의 형태적 특징, 병원성 검정, ribosomal DNA (rDNA)의 ITS 영역의 염기서열 분석을 기초로 Monilinia fructicola로 동정하였다. 대표 균주에 대한 병원성은 인공접종으로 확인하였다. 본 연구는 한국의 핵과류에서 발생하는 M. fructicola에 의한 잿빛무늬병에 대한 최초 보완자료이다.
Acanthamoeba spp. are free-living protozoa that are opportunistic pathogens for humans. Cysteine proteases of Acanthamoeba have been partially characterized, but their biochemical and functional properties are not clearly understood yet. In this study, we isolated a gene encoding cysteine protease of A. castellanii (AcCP) and its biochemical and functional properties were analyzed. Sequence analysis of AcCP suggests that this enzyme is a typical cathepsin L family cysteine protease, which shares similar structural characteristics with other cathepsin L-like enzymes. The recombinant AcCP showed enzymatic activity in acidic conditions with an optimum at pH 4.0. The recombinant enzyme effectively hydrolyzed human proteins including hemoglobin, albumin, immunoglobuins A and G, and fibronectin at acidic pH. AcCP mainly localized in lysosomal compartment and its expression was observed in both trophozoites and cysts. AcCP was also identified in cultured medium of A. castellanii. Considering to lysosomal localization, secretion or release by trophozoites and continuous expression in trophozoites and cysts, the enzyme could be a multifunctional enzyme that plays important biological functions for nutrition, development and pathogenicity of A. castellanii. These results also imply that AcCP can be a promising target for development of chemotherapeutic drug for Acanthamoeba infections.
The pathogenicity of Br abortus RB51 strains, producted by commercial vaccine companies in Republic of Korea and USA, were evaluated in mouse and guinea pig. BALB/c and ICR mice were intraperitoneally inoculated with RB51 vaccines or virulent field strain and the existence of RB51 including its ratio of spleen to weights and persistence in spleens were examined. Groups of guinea pigs on day 55-58 of received subcutaneously with various RB51 vaccines, RB51 field isolates (Daehungjin) or virulent field isolates(Sangju) to compare the histopathogenicity in uterus. All the mice received RB51 vaccines or RB51 field isolates survived for 10 days, but the groups of mice received virulent field isolates died 5 from 11 (45.5%) in case of BALB/c mice and 12 from 12 (100%) in ICR mice, respectively. The number of RB51 in the groups of mice given with vaccine strains and RB51 field isolates were declined rapidly were in spleens between 12 and 20 days after inoculation. In contrast the mice given with the virulent field isolates rose in number of bacteria up to 20 days after inoculation. In the groups of mice infected with virulent field isolates, the ratio of spleen weights to body weight were significantly higher than those in control or in the groups inoculated with RB51 strain, including RB51 field isolates, at 12 and 20 days after inoculation. At ten days after inoculation, placentas of both the pregnant and non-pregnant guinea pigs were conducted for histopathological examination. Although any abnormal lesions were not observed in non-pregnant guinea pigs, all the strains caused the inflammation of the placenta, implying pathogenecity of RB51 in pregnant guinea pigs.
Biochemical and genetic analysis were carried out to investigate the potential recovery of pathogenecity or related mutations of Brucella abortus RB51 vaccine strains. RB51 strains were recovered from commercial vaccines, including related seed stocks from private companies in Republic of Korea, strain from USA, a reference strain from C university and a field isolate (Daehungjin) from aborted dairy cow after RB51 vaccination were compared with two identified virulent wild strains (S2308 and a field strain isolated from dairy cow in Korea) at the same conditions. All the strains examined, except identified pathogenic strains, revealed the identical characteristics to the original RB51 in biochemical properties, antigen and bacteriophage typing. Outer membrane protein (OMP) profiles from strains of RB51 showed the same patterns with standard RB51 in SDS-PAGE. In addition, Western blotting with the brucella specific monoclonal antibody also indicated that all the vaccine strains were completely deficient in their LPS compared to the pathogenic Br abortus strains. The differences in DNA structures among strains were also possible to detect after PCR. All vaccine strains, except S19, S1119-3, S1075, S544 and Br suis, were amplified a 178bp DNA fragment of eri-gene, and 364bp of IS711 elements. In contrast, 498bp DNA product was only found with Br abortus. Overall evidences in the present study confirmed that the RB51 strains for vaccine production in Korea did not originated from the phenomena of possible recovery of pathogenicity or related to any potential mutation event at all.
2015년 9월 경상남도농업기술원 시험연구포장에 재배중인 녹두에서 흰비단병 증상이 발생하였다. 병징은 녹두의 줄기 지제 부위가 수침상으로 물러지고 부패되어 서서히 시들면서 포기 전체가 말라 죽었다. 줄기의 병반부와 토양 표면에 흰색의 곰팡이가 발생하며 갈색의 작은 둥근 균핵을 많이 형성하였다. 감자한천배지에서 균총은 흰색이고 잘 자라며 배양기간이 경과됨에 따라 갈색의 작은 둥근 균핵을 많이 형성하였다. 균핵의 크기는 1~3 mm이며 균사의 폭은 $4{\sim}9{\mu}m$였다. 균사 생육과 균핵 형성 적온은 $30^{\circ}C$이었다. 균사 특유의 clamp connection이 관찰되었다. 녹두에서 발생한 병징과 병원균의 균학적 특징, internal transcribed spacer rDNA 염기서열 비교분석 결과를 토대로 이 병을 Sclerotium rolfsii Saccardo에 의한 녹두 흰비단병으로 명명하고자 제안한다.
1. 1991년(年) 8월(月)부터 10일(日)까지 제주도내(濟州道內) 넙치양식장 4개소(個所)의 병어에서 연쇄구균을 분리하였다. 2. 분리균(分離菌)은 $10^{\circ}C$, $45^{\circ}C$, 6.5% Nacl, pH 9.6 및 0.1% methylene blue milk 에서는 발육(發育)되지 않았고 또한 Indole 및 $H_2S$도 생성하지 못하였으며 $\beta$ 용혈성(溶血性)을 나타내었다. 3. 이상(以上)의 성상(性狀)에서 분리균(分離菌)은 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology 및 Bergey's Manual os Systematic Bacteriology I 및 II에 근거(根據)를 두어 검색(檢索)한 결과(結果) Streptococcus pyogenes 및 Streptococcus epuisimilis와 유사하지만 약간의 차이(差異)가 있으므로 Streptococcus sp.로 하였다. 4. 분리균(分離菌)의 약제(藥劑) 감수성(感受性) 시험결과(試驗結果) Spiramycin 및 Erythromycin에 높은 감수성(感受性)을 나타냈으나 Penicillin에는 내성(耐性)을 나타냈다. 5. 분리균(分離菌)의 병원성(病原性) 시험결과(試驗結果) $1.1{\times}10^3cells$/100g 어체중 이상(以上) 접종(接種)하였을 때는 폐사(斃死) 미수(尾數)가 발생(發生)하였으나 그 이하(以下)의 접종(接種) 농도(濃度)에서는 폐사(斃死)가 발생(發生)하지 않았다.
On the development of hirame(Paratichtys olivaceus) culture, outbreak of scuticociliata infection was reported to cause severe damage in Japan. To establish effective measures for isolation and cultivation of this ciliate, we tried to culture this pathogenic ciliate using medium for bacteria and fish cell lines in vitro. Scuticociliata from the brain tissues of infected fish was aseptically inoculated to CHSE-214 cells cultured in MEM-10 without antibiotic. Scuticociliata grew well and the number of ciliate reached $10^6\;cells/ml$ at temperatures of $15^{\circ}C$ to $20^{\circ}C$ for 10d. The number of ciliate cultured in the cell lines is 10 times higher than the numbers cultured in the liquid medium alone. This ciliata could be cloned by dilution method. Scuticociliata isolated could grow well on 42 different cell lines that were established from marine fish, warm freshwater fish, and salmonids. This ciliate could be preserved in liquid nitrogen for more than 6 months. Subsequently, we observed the optimal temperature and salinity for growth, and tested the sensitivities of this organism to formaldehyde, flagyl(Metronidazole), Ekuteshin(Combination compound of sulfamonometoxin and ormethoprim), and ozonixation. Optimal temperature for growth was $25^{\circ}C$ and salinity was 1.0 to 1.5%. Washed scuticociliata was killed by formaldehyde at the concentration of 50ppm for 10min, but was not completely killed even at a high concentration of 400ppm for 20min in MEM-5. Flagyl and Ekuteshin can inhibit the growth of scuticociliata at the concentration of 1,000 and $100{\mu}g/ml$ in MEM-10, respectively. More than 99% of this scuticociliata could be killed by ozonization at a dose equivalent to $1.0mg/\ell$ oxidant for 30sec in sea water. Isolated scuticociliata showed the pathogenicity to the cultured hirame by artificial infection(I. P. injection, $10^5\;cells$/fish). The number of scuticociliata in the water could be counted by most probable number(MPN) method using tissue culture, and the minimum detectable number was $1.8\;cells/\ell$. The number in the reservoir tank for water supply to the culture tank was 110 cells/l. After cleaning by elimination of the sediments from of the reservoir tank and disinfected with formaldehyde, number of scuticociliata decreased and was counted less than $1.8\;cells/\ell$ and infection rate of cultured hirame was decreased.
팽이버섯 톱밥 병재배시 자실체에 발생하는 Cladobotryum varium 병원균을 재배농가에서 수집하여 관찰하였다. Cladobotryum varium 병원균은 주로 팽이버섯 재배사내에서 어린 버섯 발생 후에 버섯을 기주로 감염되는 병원균으로 초기에는 칠 균사가 부분적으로 발생되면서 자실체 전체를 피복시키고 또한 분생포자에 의해 계속 감염되는 현상으로 어린 버섯 발생시에 63%의 높은 발병율을 보였다. 이들 병정으로부터 균을 분리하여 배양적 특성을 조사한 결과 균사생육은 $25^{\circ}C$에서 17.8 mm/일로 빨랐으며, 균사의 색택은 흰색이었다. 그리고 대치 배양시 팽이버섯 균은 생육이 정지되면서 병원균이 전체적으로 피복되었다. 병원균에 대한 형태적 특징은 균사의 폭이 $3.0{\sim}4.0\;{\mu}m$로 $2{\sim}4$개의 분생자경을 형성하며 크기는 $8.5{\sim}10.0{\times}16.1{\sim}17.0\;{\mu}m$로 직립형이다. 분생포자는 사슬처럼 연쇄상으로 형성되고 1개의 격벽이 있으며 크기는 $32.8{\sim}50.4\;{\mu}m$로 타원형 또는 난형이었다. 후벽포자는 $1{\sim}4$개의 격벽이 있으며 크기는 $12.7{\sim}18.0{\times}17.7{\sim}48.1\;{\mu}m$로 팽이버섯에 발생하는 흰곰팡이병의 불완전세대를 Cladobotryum varium으로 동정하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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