• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제17권7호
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• pp.3437-3445
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• 2016

Background: There is an increasing concern in the role of microRNA (miRNA) in the pathogenesis of bone metastasis (BM) secondary to prostate cancer (CaP). In this exploratory study, we hypothesized that the expression of vinculin (VCL) and chemokine X3C ligand 1 (CX3CL1) might be down-regulated in clinical samples, most likely due to the post-transcriptional modification by microRNAs. Targeted genes would be up-regulated upon transfection of the bone metastatic prostate cancer cell line, PC3, with specific microRNA inhibitors. Materials and Methods: MicroRNA software predicted that miR-21 targets VCL while miR-29a targets CX3CL1. Twenty benign prostatic hyperplasia (BPH) and 16 high grade CaP formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) specimens were analysed. From the bone scan results, high grade CaP samples were further classified into CaP with no BM and CaP with BM. Transient transfection with respective microRNA inhibitors was done in both RWPE-1 (normal) and PC3 cell lines. QPCR was performed in all FFPE samples and transfected cell lines to measure VCL and CX3CL1 levels. Results: QPCR confirmed that VCL messenger RNA (mRNA) was significantly down-regulated while CX3CL1 was up-regulated in all FFPE specimens. Transient transfection with microRNA inhibitors in PC3 cells followed by qPCR of the targeted genes showed that VCL mRNA was significantly upregulated while CX3CL1 mRNA was significantly down-regulated compared to the RWPE-1 case. Conclusions: The down-regulation of VCL in FFPE specimens is most likely regulated by miR-21 based on the in vitro evidence but the exact mechanism of how miR-21 can regulate VCL is unclear. Up-regulated in CaP, CX3CL1 was found not regulated by miR-29a. More microRNA screening is required to understand the regulation of this chemokine in CaP with bone metastasis. Understanding miRNA-mRNA interactions may provide additional knowledge for individualized study of cancers.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제8권2호
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• pp.140-146
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• 2000

Recently, we reported that immunostimulation of primary rat cortical astrocyte caused stimulation of glucose deprivation induced apoptotic cell death. To enhance the understanding of the mechanism of the potentiated cell death of clucose-deprived astrocyte by immunostimulation, we investigated the effect of immunostimulation on the glucose deprivation induced cell death of rat C6 glioma cells. Co-treatment of C6 glioma cells with lipopolysaccharide (LPS, $1\;{\mu}\textrm{g}/ml$) and interferon ${\gamma}(IFN{\gamma},\;100U/ml)$ is serum free condition caused marked elevationo f nitric oxide production ($>50\;{\mu}M$). In this condition, glucose deprivation caused significant release of lactate dehdrogenase (LDH) from C6 glioma cells while control cells did not show LDH release. To investigate whether elevated level of nitric oxide is responsible for the enhanced LDH release in glucose-deprived condition, C6 glioma cells were treated with 3-morphorinosydnonimine (SIN-1) and it was observed that SIN-1 caused increase in LDH release from glucose-deprived C6 glioma cells. Treatment of C6 glioma cells with $25\;{\mu}M$ of pyrrolidinedithiocarbamate (PDTC) which inhibit Nuclear factor kB (NF-kB) activation, caused complete inhibition of nitric oxide production. Treatment of C6 glioma cells with NO synthase inhibitors, $N^{G}$-nitro-L-arginine (NNA) or L-$N{\omega}$-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), caused inhibition of nitric oxide production and also glucose deprivation induced cell death of cytokine-stimulated C6 glioma cells. In addition, diaminohydroxypyrimidine (DAHP, 5 mM) which inhibits the synthesis of tetrahydrobiopterine (BH4), one of essential cofactors for iNOS activity, caused complete inhibition of NO production from immunostimulated C6 glioma cells. The results from the present study suggest that immunostimulation causes potentiation of glucose deprivation induced death of C6 glioma cells which is mediated at least in part by the increased production of nitric oxide. The vulnerability of immunostimulated C6 glioma cells to hypoglycemic insults may implicate that the elevated level of cytokines in various ischemic and neurodegenerative diseases may play a role in their pathogenesis.

• 대한핵의학회지
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• 제26권2호
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• pp.318-326
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• 1992

Ga-67 citrate scan has been requested for detection or follow-up of inflammatory or neoplastic disease. Visualization of Ga-67 citrate in the kidneys at 48 and 72 hr post injection is usually interpreted as evidence of renal pathology. But precise mechanisms of abnormal Ga-67 uptake in kidneys were unknown. We undertook a study to determine the clinical value of Ga-67 citrate imaging of the kidneys in 68 patients with primary or secondary nephropathy confirmed by renal biopsy and 66 control patients without renal disease. Renal uptake in 48 to 72 hr images was graded as follows: Grade 0=back-ground activity:1=faint uptake greater than background;2=definite uptake, but less than lumbar vertebrae; 3=same uptake as lumbar vertebrae, but less than liver; 4=same or higher uptake than liver. The results were as follows. 1) 42 of 65 (62%) patients with noninfectious nephritis showed grade 2 or higher Ga-67 renal uptake but only 10 percent of control patients showed similar uptake. 2) In 14 patients with systemic lupus erythematosus, 8 of 9 (89%) patients with lupus nephritis exhibited marked renal uptake 3) 36 of 41 patients (88%) with combined nephrotic syndrome showed Grade 2 or higher renal uptake. 4) Renal Ga-67 uptake was correlated with clinical severity of nephrotic syndrome determined by serum albumin level, 24 hr urine protein excretion and serum lipid levels. 5) After complete remission of nephrotic syndrome, renal uptake in all 8 patients who were initially Grade 3 or 4, decreased to Grade 1 or 0. In conclusion, we think that the mechanism of renal Ga-67 uptake in nephrotic syndrome might be related to the pathogenesis of nephrotic syndrome. In systemic lupus erythematosus, Ga-67 citrate scan is useful in predicting renal involvement.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권1호
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• pp.39-46
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• 1997

이 연구에서는 살아있는 질편모충의 단백질녈해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 알아보고 질편모충에 의한 조직세포 독성에 있어서 단백질분해효소의 역할을 시험관내에서 관찰하였다 실험에 사용한 질편모충은 질염환자로년터 분리한 KT9 분리주이었으며 세포독성을 알아보기 위한 표적세포로는 HeLa 세포를 사용하였다 질편모충 단백질분해효소가 인체 면역글로불린을 분해하는지 관찰하고자 인체의 분비 IP. 혈청 IgA 및 IgG를 살아있는 원충. 원충의 용출액 및 분비-배설 액과 DTT를 넣어 반응시켰다. 여러 계열의 단백질분해효소 저해제(aminopeptidase, serine, metallo, cystelrle계열)를 살아있는 질편모충과 미리 반응시킨 후 세척하고 면역글로불린의 분해 단백질분해효소 활성 및 조직세포독성에 미치는 영향을 관찰하였다 살아있는 질편모충은 인체의 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였는데 질편모충 수가 증가할수록 반응시간이 길수록 분해가 더 잘 이루어졌다 질푄모충의 용출액과 분비-배설액도 분비 IgA. 혈청 IgA 및 IgG를 분해하였다. Cysteine, serine계 열의 단백질분해효소 저해제 (I-64 antipain, iodoacetic acid, iodoacetamide, TLCK)를 처리한 질편닐충은 분비 IgA의 분해를 저해하였으며. 단백질분해효소저해제로 처리한 경우 질편모충의 단백질븐해효소 활성은 감소하였고 HeLa세포에 대한 독성이 감소하였다. 이상의 성적을 종합하면 질편모충에서 분비되는 단백질분해효소는 시험관내에서 조직세포에 세포독성을 나타내며 또한 인체면역글로불린을 분해하여 숙주의 방어기전에 대한 도피물질로 작용하는 것으로 생각된다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제38권sup2호
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• pp.317-324
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• 2008

Purpose: Aggregatibacter actinomycetemcomitans was associated with localized aggressive periodontitis, endocarditis, meningitis, and osteomyelitis. The cytolethal distending toxin (CDT) of A. actinomycetemcomitans was considered as a key factor of these diseases is composed of five open reading frames (ORFs). Among of them, An enzymatic subunit of the CDT, CdtB has been known to be internalized into the host cell in order to induce its genotoxic effect. However, CdtB can not be localized in host cytoplasm without the help of a heterodimeric complex consisting of CdtA and CdtC. So, some studies suggested that CdtC functions as a ligand to interact with GM3 ganglioside of host cell surface. The precise role of the CdtC protein in the mechanism of action of the holotoxin is unknown at the present time. The aim of this study was to generate recombinant CdtC proteins expression from A. actinomycetemcomitans, through gene cloning and protein used to investigate the function of Cdt C protein in the bacterial pathogenesis. Materials and Methods: The genomic DNA of A. actinomycetemcomitans Y4 (ATCC29522) was isolated using the genomic DNA extraction kit and used as template to yield cdtC genes by PCR. The amplifed cdtC genes were cloned into T-vector and cloned cdt C gene was then subcloned to pET28a expression vector. The pET28a-cdtC plasmid expressed in BL21 (DE3) Escherichia coli system. Diverse conditons were tested to opitimize the expression and purification of functional CdtC protein in E. coli. Results: In this study we reconstructed CdtC subunit of A. actinomycetemcomitans Y4 and comfirmed the recombinant CdtC expression by SDS-PAGE and Western Blotting. The expression level of the recombinant CdtC was about 2% of total bacterial proteins. Conclusion: The lab condition of procedure for the purification of functionally active recombinant CdtC protein is established. The active recombinant CdtC protein will serve to examine the role of CdtC proteins in the host recognition and enzyme activity of CDT and investigate the pathological process of A. actinomycetemcomitans in periodontal disease.

• 대한한방부인과학회지
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• 제19권1호
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• pp.47-68
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• 2006

Purpose : This study was carried out to investigate the effects of Gagamdokhwalgisang-Tang on the morphometric changes of femur, and on the hormones and cytokines associated with bone metabolism in overiectomized rats. Methods : Twenty-four female Sprague-Dawley rats were divided into sham operated group(normal) ovariectomized group(control), and treated with extract of GD group(treated). Each group was evaluated the changes of body weight at 0, 3, 6, 8 weeks after ovariectomy. Morphometric analysis(femur weight, femur/body weight ratio, femur ash weight femur ash/body weight ratio cross sectional area of compact bone and concellous bone of femur) and histopathological examination were performed at 8 weeks after ovariectomy. Estrogen, Alkaline Phosphatase(ALP) and cytokine(Tumor necrosis $factor-{\alpha}$, $Interleukin-l{\beta}$, Inerleukin-6) assay were performed at 8 weeks after ovariectomy. Results : 1. The body weight of control and treated group was significantly increased(p<<0.001) compared with the normal group at 8 weeks. 2. The femur weight and femur/body weight ratio of treated group were significantly increased(p<<0.05, p<<0.01) compared with the control group at 8 weeks. 3. The femur ash weight showed no significantly different changes, but femur ash/body weight ratio of treated group was significantly increased(p<<0.05) compared with the control group at 8 weeks. 4. In the cross sectional area of cancellous bone of femoral body, the treated group was significantly increased(p<<0.001) compared with the control group at 8 weeks. 5. The serum estrogen level of treated group showed no significantly different changes compared with the control group at 8 weeks. 6. The serum ALP activity of treated group was significantly decreased(p<<0.01) compared with the control group at 8 weeks. 7. The serum Tumor necrosis $factor-{\alpha}(TNF-{\alpha})$ level of treated group was significantly decreased(p<<0.05) compared with the control group at 8 weeks. 8. The serum $Interleukin-l{\beta}(IL-1{\beta})$ level of treated group was significantly decreased(n<<0.001) compared with the control group at 8 weeks. 9. The serum Interleukin-6(IL-6) level of treated group was significantly decreased(P<<0.01)compared with the control group at 8 weeks. Conclusion : These results indicate that GD inhibits bone resorption in ovariectomized rats. And the major inhibitory mechanism may be related to the inhibitory effects of GD on the secretion of $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ and IL-6 in the pathogenesis of osteoporosis in estrogen deficient rats.

• 생명과학회지
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• 제17권7호통권87호
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• pp.896-904
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• 2007

비타민 E 유도체인 $RRR-{\alpha}-tocopheryl$ succinate (vitamin E succinate, VES)는 만성골수성 백혈병 세포인 K562세포에서 apoptosis를 유도하였다. VES의 처리에 의해 apoptosis가 유도되는 과정에서 K562 세포 내의 ROS의 생성이 증가되었으며, ROS와 관련된$NF-{\kappa}B$, COX-2 그리고 $p21^{WAF1/CIP1}$등의 유전자가 활성화되었다. 뿐만 아니라, apoptosis의 과정 중 중요한 역할을 하는 Bax의 발현증가 및 손상된 DNA의 회복에 중심적 기능을 하는 PARP의 분열이 야기되었다. VES를 처리한 세포의 세포주기 분석에서는 apoptotic phase인 sub-Gl phase에서 세포사멸이 증가되고, 형태적으로는 염색질의 응축이 일어나는 결과로 미루어볼 때 VES는 K562세포의 apoptosis를 유도한 것을 알 수 있다. C57BL/C의 림프종 이종이식을 통한 VES의 항암활성 실험 결과, C57BL/C의 대조군에 비하여 종양의 성장억제를 확인하였으며 높은 생존율을 확인하였다. 이러한 결과는 백혈병 치료에 대한 분자적 기초를 제공하였으며 동물실험을 통하여 보다 실질적인 백혈병 치료의 가능성을 보여주었다.

• 생명과학회지
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• 제19권8호
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• pp.1177-1182
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• 2009

배추 무름병을 대상으로 식물병원균 감염모델을 확립하기 위하여 무름병변을 가진 배추조직으로부터 80개의 독립된 세균집락을 순수 분리하였다. 이들 균을 감염되지 않은 배추 잎의 주맥부위에 접종하여 24${\sim}$48 시간 만에 무름병변을 나타내는 8개의 균주를 1차 선별하였다. 다양한 미생물학적, 생화학적, 형태학적인 시험을 통하여 분석한 결과 서로 다른 특성을 나타내는 균이라고 여겨지는 3개의 균을 최종 선정하였고 이들은 모두 그람 음성균으로 판명되었고 RB1, RB2 및 RB6로 명명하였다. API 20E시험, VITEK 2 COMPACT 분석, 16S rRNA 염기서열 분석 등을 종합할 때 RBl 및 RB2는 Erwinia carotovorum subsp. odoriferum 아종으로, RB6는 Erwinia carotovorum subsp. carotovorum 아종으로 추정되었다. 이들 균들은 $30^{\circ}C$, 생리적 pH인 중성 pH에서 최적생육을 하였다. 이들은 배추의 상처 유무에 상관없이 초기 접종양과 비례하여 무름병을 유발하였으며, 상처가 없는 경우보다 상처가 있는 경우에 더욱 명확한 병변을 유발하였다. RBl의 경우 $8.0{\times}10^8$ CFU/ml, RB2 균주는 $10^9$ CFU/ml, RB6는$4.7{\times}10^6$ CFU/ml에서 최초로 무름 증상을 나타냈다. 이들 균의 숙주 특이성을 관찰하기 위하여 14종의 야채에 접종한 결과 배추, 가지 파프리카에서만 무름병변을 유발하는 숙주 특이성을 나타내었다. 이 연구에서 사용된 실험재료들 및 감염모델은 향후 식물병원균의 감염기작해석에 크게 기여할 것으로 예상된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제51권6호
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• pp.503-516
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• 2001

연구배경 : 급성 출혈성 쇼크에서 발생하는 급성폐손상의 병인론을 호중구의 산소기 생성과 연관하여 규명하고자 본 연구를 시행하였다. 급성출혈성쇼크에서 폐장내 산소기 생성의 주된 원인이 호중구의 침윤에 의한 것이며 이 때 PLA2의 활성화가호중구의 respiratory burst의 직접적인 원인임올 밝히고지 하였다. 방 법 : 체중 300-350 g 정도의 흰쥐에서 체중/kg 당 20ml정도의 혈액을 5분 동안 뽑아내어 급성 출혈성 쇼크를 유발하고 이 출혈성 쇼크 상태를 1시간 동안 유지하였다. 그 후 급성 폐손상의 지표들을 측정하였다. 동시에 폐장의 미세구조의 변화 및 세포화학적인 검사를 통하여 폐장조직내의 산소기의 형성을 확인하였다. 또한 PLA2 억제제인 mepacrine을 출혈직전에 투여하여 PLA2의 억제에 따른 변화도 검사, 비교하였다. 결 과 : 급성 출혈성 쇼크에 의해 유도된 급성 폐손상에서 호중구의 폐장내 침윤이 확인되었고 이 때 폐부종 및 조직내 산소기 형성의 증가가 관찰되었으며, 폐장내 PLA2의 활성도도 증가하였다. 그러나 mepacrine을 이용하여 PLA2를 억제한 결과, 폐부종의 감소, 산소기 형성의 감소가 확인되었다. 결 론 : 급성 출혈성 쇼크에 의한 급성폐손상은 호중구에 의한 산화성스트레스가 그 원인으로 생각되고 이 때 호중구에 의한 산화성스트레스의 발생에는 PLA2가 주된 역할을 한다고 사료된다.

• 한국지능시스템학회논문지
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• 제25권6호
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• pp.529-535
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• 2015

지금까지 생체 네트워크 분석 연구는 정적(static)인 개념으로만 다루어졌다. 그러나 실제 생명현상이 발생하는 세포 내에서는 세포의 상태 및 외부 환경에 따라 일부 단백질과 그 상호작용만이 선택적으로 활성화된다. 따라서 생체 네트워크의 구조가 시간의 흐름에 따라 변화하는 동적(dynamic)인 개념이 적용되어야 하며, 이런 개념은 질병의 진행 추이를 분석하는데 효율적이다. 본 논문에서는 동적인 네트워크 방법을 알츠하이머 질병에 적용하여 질병이 진행되는 단계에 따라 변화하는 단백질 상호작용 네트워크의 구조적, 기능적 특징에 대하여 분석하고자 한다. 우선, 유전자 발현데이터를 기반으로 각 질병의 진행 상태에 따른 부분 네트워크(정상, 초기, 중기, 말기)를 구축하였다. 이를 기반으로, 네트워크의 구조적 특성 분석을 수행하였다. 또한 기능적 특성 분석을 위해 유전자 군집(module)을 탐색하고, 군집별 유전자 기능(Gene Ontology) 분석을 수행했다. 그 결과, 네트워크의 특성들은 각 질병의 단계와 잘 대응되며, 동적 네트워크 분석법이 중요한 생물학적 이벤트를 설명하는데 이용될 수 있음을 보였다. 결론적으로 제안된 연구 방법을 통하여 그동안 알려지지 않았던 질병유발에 관련된 주요 네트워크 변화를 관측할 수 있고, 질병에 관여하는 복잡한 분자 수준의 발생 기작과 진행 과정을 이해하는데 중요한 정보를 획득할 수 있다.