장기간 시험관내에서 무균적으로 배양하여 병원성이 약화된 자유생활아메바 naegleria fowleri를 마우스에 연속적으로 감염시켜 그 병원성의 증감여부를 관찰하고자 하였다. 체증 18∼22gm의 백색 마우스를 secobarbital로 마취시키고 오른쪽 비강에 Naegleria fowleri를 떨어뜨려 감염시켰다. 시험관내에서 7년이상 CGVS배지에서 계대배양된 0주와 마우스에 감염시켜 뇌조직을 2번 통과시킨 2-1주의 병원성을 비교하였다. 행동둔화, 자극에 민감, 회전운동, 사지마비등 여ㅓ 증상이 나타났고, 뇌의 오른쪽 앞쪽 부위에 심한 염증 및 괴사를 발견하였다. 이러한 증상과 병소는 0주 감염군보다 2-1감염군에서 보다 빨리, 보다 심하게 발생되었음을 관찰하였다. 감염 7일 후부터 감염된 마우스가 사망하기 시작하였으며 2-1주 감염군에서 0주 감염군 보다 생존기간이 짧았으며 감염 13일 후부터 사망한 예에 있어서는 육안적으로 뇌에서 병소가 없었고 폐장에서 염증이 심하였음을 관찰하였다. 마우스에 비강을 Naegleria fowleri를 감염시켜 전형적인 원발성 아메바성 뇌수막염을 발생시킬 수 있었다. 장기간 시험관에서 무균적으로 계대배양된 Naegleria fowleri는 병원성이 약화되어 있었고 이 아메바를 마우스에 연속적으로 감염시켜 뇌조직을 통과시킴으로 다시 병원성이 증강됨을 관찰하였다.
The methods that make Hantavirus grow consist of inoculation into the experimental animals and cultured cells. The cultured cells, such as Vero-E6 and A549 cells, have been usually used for isolation of the virus and the animals, such as mice and rats, are used for large scale preparation of the virus so far. Furthermore, the cell can be used to maintain the virus and assay the infectivity and the animals can be used for the experiment of viral pathogenicity and challenge for assessment of vaccine. Apodemus mice, the own natural host of the virus, has been used for challenge test of Hantaan virus. However it has been pointed out to difficult handling and breeding the animal in laboratory. Therefore, we attempted to establish a new animal model for challenge test at the time of isolation of Maaji virus which is a new hantavirus similar but distinct to Hantaan virus. In suckling hamster, the titer of Maaji virus and the lethality to mice of the virus were increased gradually in the titer and lethality through passage by intracerebral (IC) inoculation. We tried to re-adapt this brain virus to lung of weanling hamster. The brain passaged virus was inoculated into weanling hamster intramuscularly. Again, the titer of the virus in lung was also increased by continuous passage of this virus. This facts could regarded as adaptation to new environment in which the virus proliferates. To identity the virus passaged in hamster with Maaji virus, both of the virus passaged in hamster brain and lung were compared with Maaji virus (MAA-I) and Hantaan virus (HTN 76-118) by means of restriction fragment length polymorphism (RFLP) and slingle strand conformation polymophism (SSCP). As a result, we conclude that Maaji virus could be adapted successfully to weanling hamster through this passage strategy. Utilizing this adapted Maaji virus strain, hamster model is able to be used for challenge test in hantaviral vaccinology and further experiments utilizing hamster system as a rather available and convenient lab animal are expected.
Japanese encephalitis has been prevalent for long time in the Far East and many patients have been reported in both South East and Mid-West Asia recently. Recently, vaccine was used in prevention of this viral disease of man which was derived from formalin inactivated virus inoculated into mouse brain, but live attenuated active vaccine for human is not developed yet. Author inoculated Japanese encephalitis virus into several cell culture strains for development of live attenuated encephalitis virus strain and the results were as follows: 1. Japanese encephalitis virus was inactivated rapidly in cell free medium at $36^{\circ}C$ and totally inactivated by 72 hours. 2. In growth curve of Japanese encephalitis virus in HeLa cell cultures, maximal multiplication of the virus was occured at 4th day and virus multiplication was continued for at least 12 days. 3. After succeeding passage of the virus in HeLa cell cultures and human esophagus epithelial cell cultures, infectivity of virus for mice was disappeared from 2nd passage in HeLa cell cultures and 3rd passage in esophagus epithelial cell cultures. 4. In inoculation to monkey kidney epithelial cells and chick embryo cell cultures, infectivity of the virus for mice was continued after 10th passages.
This study was performed to measure the antioxidant effects of red ginseng extracts which antioxidation had been promoted through enzyme hydrolysis. In order to observe their tumor-suppressing effects, an anti-cancer medicine and Saponin-SOD, which was a highly antioxidant beverage made from red ginseng saponin adding SOD-like rice (with embryo buds) extracts, were administered to nude mice with large intestine cancer induced. There was a significant increase in the content of phenolic compounds as the enzyme was added. The red ginseng extracts showed a high electron-donating ability with the passage of time. The electron-donating ability was particularly high in the enzyme-treated red ginseng extract, and also observed as high in Saponin-SOD. The lipid-peroxide generation was inhibited depending on the concentration of Saponin-SOD added; the addition of 0.625% Saponin-SOD served to decrease the inhibition level up to 65% compared with the case of no addition (100%). As a result, it could be assumed that Saponin-SOD would strongly inhibit the oxidation of ghost membrane. After the cancer was induced in nude mice through the injection of SNUC-4 cell, there was a significant inhibition in the growth of tumors in nude mice into which Saponin-SOD were injected; the growth of tumors was gradually decreasing with the passage of time after the cancer induction. In particular, when Saponin-SOD was administered together with an anti-cancer medicine, the synergic effect was observed. In conclusion, Saponin-SOD, when used with an anti-cancer medicine, is expected to reduce the amount of free radical and lipid peroxide, which are known to cause harmful effects occurring from the internal application of medicine.
Background: We sought to evaluate the role of tumor associated macrophages (TAMs) on the promotion of coal tar pitch extract (CTPE)-induced tumorigenesis of human bronchial epithelial cells (BEAS-2B) and tumor metastasis in nude mice, and related mechanisms. Materials and Methods: BEAS-2B cells were first treated with 2.4 mg/mL CTPE for 72 hours. After removal of CTPE, the cells were continuously cultured and passaged using trypsin-EDTA. THP-1 cells were used as macrophage-like cells. BEAS-2B cells under different conditions (n=6/group) were injected into the back necks of nude mice, and alterations of tumor xenograft growth, indicative of tumorigenicity, and tumor metastasis were determined. Pathological changes (tumor nests and microvascular lesions) of HE-stained tumor tissues were also evaluated. The expression of AP-1(c-Jun) in xenografts and metastatic tumors was determined using immunohistochemistry. Results: Tumor size and weight in nude mice transplanted with the mixture of CTPE-induced passage 30 BEAS-2B and THP-1 cells (2:1) were increased compared to those from the CTPE-treated BEAS-2B cells at passage 30 alone at different observation time points. Tumor metastasis to lymph nodes and liver was only detected after transplantation of a mixture the two kinds of cells. The numbers of tumor nests and microvascular lesions, and the expression levels of AP-1 (c-Jun) in tumors from the mixture of two kinds of cells were increased apparently in contrast to those in tumor from the CTPE-treated BEAS-2B cells of passage 30 alone. In addition, there was positive correlation between AP-1 (c-Jun) expression level and the number of microvascular lesions, or between AP-1 (c-Jun) expression level and tumor metastasis in these two groups. Conclusions: TAMs not only facilitate tumorigenesis transformation of CTPE-induced BEAS-2B cells, but also promote tumor growth, angiogenesis and metastasis in nude mice in vivo, which may be mediated by AP-1.
Human granulocytic anaplasmosis (HGA) is caused by the obligate intracellular bacterium Anaplasma (A.) phagocytophilum. Natural killer T (NKT) cells are key players in host defense against various microbial infections. We investigated the role of NKT cells in immune response to A. phagocytophilum infection using NKT-knockout ($J\alpha$18-/-) mice. $J\alpha$18-/- and wild-type (WT) mice were infected with low-passage A. phagocytophilum and assayed for hepatic histopathology and cytokine production during 7 days post-infection. Compared to WT controls, the infected $J\alpha$18 -/- mice had much less histopathologic lesions and less apoptosis through day 7, and lower concentrations of ${IFN\gamma}$ and IL- 12, but not of IL-10. This result suggests that NKT cells are major components in the pathogenesis of HGA.
A preservation test of Toxoplasma gondii tachyzoites for considerable time was tried to obtain simple and economical methods using various suspending media at $4^{\circ}C$ rather than serial passage of the parasite in mice. The preservation period was a term that the tachyzoites were detected from the peritoneal fluid of mice after inoculation of 2$\times$$10^5$ organisms preserved according to the lapse of time. The numbers of tachyzoite per 1\textrm{mm}^3$ of the peritoneal fluid with 2$m\ell$ of the saline solution taken in 4days after inoculation were presented as percentage in proportion to the control. The numbers. of tachyzoite per 1\textrm{mm}^3$ of the peritoneal fluid of the control were consisted of the average number of the tachyzoites of 10 mice inoculated with 2$\times$$10^5$ organisms by serial mouse passage. The tachyzoites could be preserved for 26 days in the suspending medium of saline solution at $4^{\circ}C$ Ringer's solution for 18 days, Hank's solution for 28 days, and egg-glycerine solution for 50 days.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제28권1호
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pp.42-45
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2002
Cultures of primary human alveolar bone-derived cells were established from alveolar bone chips obtained from normal individuals undergoing tooth extraction. These cells were expanded in vitro until passage 3 and used for the in vivo assays. Cells were loaded into transplantation vehicles, and transplanted subcutaneously into immunodeficient mice to study the capacities of human alveolar bone-derived cells to form bone in vivo. Transplants were harvested 12 weeks after transplantation and evaluated histologically. Of 10 human alveolar bone-derived cell transplants, two formed a bone-like tissue that featured osteocytes and mineral. Eight of the ten formed no osseous tissue. These results show that cells from normal human alveolar bone are capable of forming bone-like tissue when transplanted into immunodeficient mice.
increase the viability of oral typhoid vaccine during the passage through the castro-intes-tidal tract, numerous attempts have been made including the vaccine coating. However problems such as high death rate during the coating process and its instability in the gastric juice still remain to be solved. In this study, the oral vaccine was made as the micro-enteric beads by adding Salmomella typhi Ty21a cells to sodium alginate solution and spraying onto calcium chloride solution (ionotropic relation method). The vaccine showed more than 90% of its original viability after treating it for 1 hour in the artificial gastric juice (37$^{\circ}C$, 300 rpm). The clearance rate of the Ty21a in the liver and spleen of the mice orally administrated with coated Ty21a was similar to that of the mice intraperitoneally administrated with uncoated Ty21a. The peripheral blood lymphocytes (PBL) isolated from the mice orally administered with this vaccine produced 15.5 fold higher specific IgA antibody titer than that from the control mice administerd with saline solution. furthermore, the mice treated with the coated Ty21a had higher survival rates (50~87%) than the control mice treated with saline solution (0~10%) in the intraperitoneal challenge test with wild type S. typhi Ty21a cells. These results suggest that the alginate-based coating technique is effective to protect live Ty21a from acidic environments, and produces better intestinal immune responses thereby providing a potentially excellent oral typhoid vaccine.
The goal of this study was to evaluate the antidiarrheal efficacy of $Lacteol^{TM}$-loperamide combination against the mouse model of secretory diarrhea. Secretory dirrhea was induced in mice by p.o. administration of castor oil (0.3 ml). Antidirrheal effects of $Lacteol^{TM}$-loperamide combination were compared with each individual component. $Lacteol^{TM}$-loperamide combination was the most potent among these agents, eliminating diarrhea in 100% of mice at a dose 1360/4 mg/kg (Lacteol/loperamide, respectively). In this study, we also measured changes of bodyweight as another indicator of the dirrhea, based on the assumption that lower bodyweight loss represented reduced fecal passage. The bodyweight loss of $Lacteol^{TM}$-loperamide combination administered group was 4 times lower than that of vehicle control. These findings indicate that $Lacteol^{TM}$-loperamide combination may be more potent than individual component in its antidiarrheal action, so we are going to challenge this combination for further study and clinical evaluation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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