올리고당중에서 ${\alpha}$-1, 6-결합을 가진 isomaltose, isomaltotriose, panose 등을 주성분으로 하는 이소말토올리고당의 생산을 위해 A. niger 유래의 transglucosidase (TG)의 효소학적 특성을 살펴보았다. TG는 maltose를 포도당으로 가수분해하여 panose와 포도당을 생성하였다. panose가 초기기질일 때 TG는 panose를 maltose와 포도당으로 가수분해하였다. ${\alpha}$-1, 6-결합을 가진 isomaltose나 isomaltotriose, isomaltotetraose를 기질로 하였을 때 반응산물의 생성은 ${\alpha}$-1,4-결합을 가진 maltose가 기질일 경우와는 다른 양상을 보였다. 반면 maltotriose를 기질로 한 경우에는 maltose와 유사한 양상을 보였다. TG는 maltotetraose(G4)에서 maltodecaose (G10)가 주성분인 말토올리고당을 기질로 한 경우에도 이소말토올리고당을 생성하였다. 기질인 maltose로부터 TG에 의해 panose가 생성되는 반응은 Michaelos-Menten 식으로 표현되었으며 최대속도, $V_{max}$와 Michaelis 상수, $K_m$은 각각 400 ${\mu}M/min$과 21.4${\mu}M$이었다.
Han, Nam-Soo;Jung, Yoon-Seung;Eom, Hyun-Ju;Koh, Young-Ho;Robyt, John F.;Seo, Jin-Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권1호
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pp.46-52
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2002
As a functional additive for intestinal microflora, panose ($6^2-{\alpha}$-D-glucopyranosylmaltose) was synthesized during kimchi fermentation using the glucose transferring reaction of glucansucrase from Leuconostoc mesenteroides. For the glucose transferring reaction, sucrose and maltose were added ($2\%$ each, w/v) to dongchimi-kimchi as the glucosyl donor and acceptor molecule, respectively. After five days of incubation at $10^{\circ}C$, referring to the initial phase for the production of lactic acid in kimchi, over $60\%$ (w/v) of the total sugars were converted into panose and other branched oligosaccharides. Thereafter, the kimchi was stored at $4^{\circ}C$ and the amount of panose remained at a constant level for three weeks, thereby indicating the stability of panose to microbial degradation during the period of kimchi consumption. The use of maltose as the acceptor molecule in the kimchi also facilitated a lower viscosity in the kimchi-juice by preventing the synthesis of a dextran-like polymer which caused an unfavorable taste. Accordingly, the application of this new method of simultaneous biocatalytic synthesis of oligosaccharides during lactate fermentation should facilitate the extensive development of new function-added lactate foods.
A Aureobasidium pullulans 균체를 이용하여 malt-ose로부터 isomalto-oligosaccharides를 생산하였다. 저농도의 maltose를 기질로 이용할 경우에는 가수분해활성이 transglucosylation활성보다 매우 강하여 isomalto-oligosaccharides 합성수율이 매우 낮았으나 400g/ P 이상의 고농도기질에서는 isomalto-oligosaccharides 합성이 유리하였다. isomaltomalto-oligosaccharides 생산의 반응 최적조건은 pH 4.5, 온도 $65^{\circ}C$, 균체농도는 기질 그램당 10unit이었다. 이때 생산된 isomaltooligosa-ccharides의 수율은 최고 48.35%였다. 반응초기에 maltose로부터 panose가 선택적으로 생산되었고, maltose가 더 이상 기질로 이용되지 못하는 반응시점에서 panose를 기질로 이용하여 isomaltotriose가 생산되었다.
Dextransucrase의 수용체반응(acceptor reaction)을 이용하여 판노스(panose)를 포함한 다양한 당전이화합물을 발효식품에서 생성하기 위하여 고활성 dextransucrase를 저온에서 생성하는 Leuconostoc속 균주를 동치미김치로부터 분리 및 선발하였다. 동치미를 제조하여 $8^{\circ}C$에서 발효시키면서 분리한 Leuconostoc속 균주중에서 균체의 증식유도기간(lag phase), 최대균체량(g/L), 균체의 비성장속도$(\mu)$ 및 dextransucrase 활성을 종합적으로 비교하여 우수균주를 선발하였고, 최종적으로 MIDI를 이용하여 Leuc. mesenteroides로 동정하였다. 본 균주는 김치를 포함한 저온성 발효식품에서 당전이화합물을 생성하여 기능성을 부여하는 스타터로 사용될 수 있을 것으로 판단된다.
Among 116 bacterial strains isolated from Korean fermented foods, one strain (SS-76) was selected for producing new oligosaccharides in a basal medium containing maltose as the sole source of carbon. Upon morphological characterization using scanning electron microscopy, the cells of strain SS-76 appeared rod-shaped; subsequent 16S rRNA gene sequence analysis revealed that strain SS-76 was phylogenetically close to Bacillus subtilis. The main oligosaccharide fraction B extracted from the culture supernatant of B. subtilis SS-76 was purified by high performance liquid chromatography. Subsequent structural analysis revealed that this oligosaccharide consisted only of glucose, and methylation analysis indicated similar proportions of glucopyranosides in the 6-linkage, 4-linkage, and non-reducing terminal positions. Matrix-assisted laser-induced/ionization time-of-flight/mass spectrometry and electrospray ionization-based liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry analyses suggested that this oligosaccharide consisted of a trisaccharide unit with 1,6- and 1,4-glycosidic linkages. The anomeric signals in the $^1H$-nuclear magnetic resonance spectrum corresponded to ${\alpha}$-anomeric configurations, and the trisaccharide was finally identified as panose (${\alpha}$-D-glucopyranosyl-1,6-${\alpha}$-D-glucopyranosyl-1,4-D-glucose). These results suggest that B. subtilis SS-76 converts maltose into panose; strain SS-76 may thus find industrial application in the production of panose.
Fermentation of wort was investigated with an ultimate goal to develop a fermented beverage rich in prebiotics and functional ingredients as well as desirable in flavors. Wort was fermented with Leuconostoc citreum HJ-P4 originated from kimchi and subjected to sensory descriptive analysis. L. citreum HJ-P4 produced various organic acids (e.g., lactic acid, acetic acid) as well as functional sugars (e.g., mannitol, panose) during wort fermentation. The concentration and ratio of lactic acid and acetic acid were significantly influenced by roasting conditions of malts used for wort preparation and aeration conditions during fermentation. The concentration of mannitol and panose varied depending on the sucrose content of wort and aeration conditions. Sensory characteristics of the fermented worts were clearly differentiated according to the roasting conditions of malts used for wort preparation and aeration conditions during fermentation. These results indicate that metabolite concentration of fermented wort and its sensory properties can be manipulated with roasting conditions of malts and fermentation conditions.
D. geothermalis의 dgeo_0475 유전자로부터 만들어지는 효소를 정제하여 그 특성을 확인하였다. DGMA는 분자량이 약 68 kDa 크기의 효소로서 ${\beta}$-CD, soluble starch 및 pullulan을 가수분해하는 CD 분해 효소임을 확인하였다. 효소의 최적 온도는 $40^{\circ}C$ 최적 pH 는 6.0이며 대부분의 기질들을 glucose와 maltose로 가수분해 하였고 pullulan 및 soluble starch로부터 미량의 panose를 생성하였다. ${\beta}$-CD를 가장 잘 가수분해하나 기질간 상대적 활성차이는 다른 CD 분해효소에 비하여 크지 않았다.
막걸리 발효 양조에 사용되는 누룩의 종류는 발효 온도와 기간에 따라 다르며, 전분분해효소의 활성 차이로 막걸리 발효 중 생성되는 구성당의 조성 및 함량이 다르기 때문에 본 연구에서는 TG에 따라 이소말토올리고당이 어떻게 생성되며, 발효기간에 따라 생성되는 이소말토올리고당의 변화와 최대 함량 시기를 확인하고 막걸리의 이소말토올리고당 생성에 누룩 미생물이 미치는 영향에 대해 연구하였다. 소율누룩 막걸리(SH), 산성누룩 막걸리(SS), 진주누룩 막걸리(JJ) 모두 발효 0일차 이후 유기산의 생성으로 총산은 증가하고, pH는 감소하였다. 알코올은 모든 처리구에서 발효 2-5일차까지 급격하게 증가하였으며, 이후 15일차까지 완만하게 증가하는 경향을 확인할 수 있었다. 알코올 생성에 영향을 미치는 glucose는 1일차 SS에서 14.3%로 SH와 JJ보다 높은 값이 측정되었는데, SH의 1.5%보다 9배 이상 높게 확인되었다. SH, SS, JJ는 발효 중 maltose와 maltotriose가 기질로 사용되어 panose가 증가하는 사실을 확인할 수 있었으며, panose의 생성과 동시에 isomaltose의 생성도 확인되었다. SH의 panose 함량은 6일차에 24.7 mM로 가장 높은 함량을 나타내었으며, SS은 2일차에 18.2 mM, JJ는 3일차에 10.8 mM로 각각 최고 함량을 나타냈다. 누룩별 막걸리의 올리고당 함량을 보면 SH에서만 maltopentose가 검출되었으며, 발효 종료 15일차에는 말토올리고당과 이소말토올리고당이 확인되었지만 JJ에서는 isomaltotriose만 검출되었으며, SS에서는 올리고당이 나타나지 않았다. β-Amylase 활성을 분석한 결과 JJ의 효소활성이 1일차에 1.5 unit/g으로 다른 두 개의 누룩 막걸리보다 높게 나타났으며 다음으로는 0.9 unit/g으로 SH, 0.7 unit/g SS의 순서로 나타났다. 이는 maltose의 1일차 함량과 같은 경향으로 측정되었다. 세 종류의 막걸리 발효 0일차 TG를 분석한 결과 SH에서 TG의 활성은 0.2 unit/mL로 다른 누룩 막걸리보다 훨씬 높은 효소활성 값을 나타내고 있으며, SS는 0.1 unit/mL로 0.03 unit/mL의 JJ와 활성 차이를 보이며, 0일차 이후 SS이 감소하면서 JJ와 비슷한 수치를 유지하며 발효가 진행되었다. 발효 중 미생물의 생육유무에 따른 이소말토올리고당의 생성을 분석한 결과 미생물이 생성하는 TG 전이효소에 의해서 긴 사슬의 이소말토올리고당이 생성된다는 사실을 알 수 있었다. 따라서 이소말토올리고당의 생성은 누룩 자체의 효소보다 막걸리 발효 중 생육하는 미생물의 영향이 더 큰 것으로 판단된다.
Seo, Dong-Mi;Kim, So-Young;Eom, Hyun-Ju;Han, Nam-Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권11호
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pp.1758-1764
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2007
Synthesis of oligosaccharides during milk fermentation was attempted by inoculating Leuconostoc citreum with Lactobacillus casei, Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus, and Streptococcus thermophilus as starters. Dextransucrase of Ln. citreum worked as a catalyst for the transglycosylation reaction of sugars; sucrose was added as the glucose donor, and lactose or maltose acted as the acceptor compound for the reaction. When 4% sucrose was added in milk, glucosyl-lactose was synthesized (about 1%, w/v) after 1-2 days of fermentation at 15 or $25^{\circ}C$. Alternatively, when sucrose and maltose (2% each, w/v) were added, panose (about 1 %, w/v) and other isomaltooligosaccharides were made in a day at $15-35^{\circ}C$. Growth patterns of lactobacilli and streptococci starters were not affected by the coculture of leuconostoc starter, but the rate of acid synthesis was slightly slowed at every temperature. Addition of sugars in milk did not give any adverse effect on the lactate fermentation. Accordingly, the use of leuconostoc starter and addition of sugars in milk allowed the production of oligosaccharides-containing fermented milk, and application of this method will facilitate the extensive development of synbiotic lactate foods.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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