본 연구에서는 토복령(S. china) 메탄올 추출물(SCME)의 항비만 활성을 pancreatic lipase 효소 활성 억제능과 세포 실험계를 이용하여 분석하였다. 그 결과 SCME는 농도 의존적으로 lipase 효소 활성을 유의적으로 억제시켰으며, 3T3-L1 preadipocyte에서 MDI로 유도한 지방세포 분화, 세포 내 지방 축적, TG 함량 등을 농도의존적으로 억제하였다. 이러한 토복령의 지방세포 분화 억제능은 핵심 작용 인자인 $C/EBP{\alpha}$, $C/EBP{\beta}$, 그리고 $PPAR{\gamma}$의 유전자 및 단백질 발현조절에서 기인함을 확인하였다. 또한 지방세포 내 중성지방 또한 토복령 추출물의 처리에 의해 유의적으로 분해되는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 토복령이 보유한 pancreatic lipase 활성 저해능, 지방세포 분화 억제능, 지방세포 내 지방 분해능을 통한 항비만 활성을 처음으로 밝혀낸 것이며 추후 계속적인 연구를 통해 활성 물질의 규명이 필요할 것으로 판단된다.
사람 췌장 리파아제는 췌장에서 합성되어 소장으로 분비된 후, 음식물속의 지방을 가수분해하는 소화효소이다. 췌장 리파아제 단백질은 촉매활성도메인과 코리파아제 결합도메인의 2개의 도메인으로 구성되어 있다 본 연구에서는 리파아제 전체단백질과 촉매활성도메인 및 코리파아제 결함도메인 유전자를 PCR 방법으로 증폭하여 발현벡터에 넣은 후, 대장균에서 발현시켜 얻은 3가지 재조합 단백질을 산란계에 3차례 주사하여 면역반응을 유도하였다. 난황단백질을 분리하여 항체가를 측정한 결과, 코리파아제 결합도메인의 항원성이 가장 높은 것으로 밝혀졌다. 또한, 돼지 췌장 리파아제의 활성저해 실험에서도 코리파아제 결합도메인에 의해 만들어진 난황항체가 지방분해활성 저해작용이 가장 큰 것으로 밝혀졌다. 코리파아제 결합도메인 난황항체가 첨가된 지방을 실험동물에게 급여하고 혈중 주요 성분을 분석한 결과, 코리파아제 결합도메인에 의한 난황항체를 섭취한 경우에 혈중 중성지방의 수치가 대조군에 비해서 유의적으로 감소했음을 화인하였다. 결론적으로 코리파아제 결합도메인을 항원단백질로 사용하여 얻은 난황항체가 생체 내에서 췌장 리파아제의 활성을 억제할 수 있으며 비만억제제로의 개발 가능성이 있음을 보여주었다.
마디풀을 80% ethanol로 침지 추출하여 얻어진 추출물에 대해 $CHCl_3$, EtOAc 및 n-BuOH로 순차 용매 분획 하였고, 얻어진 결과물에 대하여 DPPH 및 $ABTS^+$ radical 소거능 및 pancreatic lipase 저해활성을 평가하였다. DPPH 라디칼 소거능은 페놀성 화합물의 함량이 상대적으로 높은 EtOAc층의 $100{\mu}g/mL$의 시험농도에서는 $58.1{\pm}2.3%$의 라디칼 소거능을 확인하였고, 마디풀 추출물에 존재하는 페놀성 화합물이 라디칼 소거능과의 연관성을 시사하였다. 또한 $ABTS^+$ 라디칼 소거능은 EtOAc층이 $IC_{50}=2.8{\pm}0.5{\mu}g/mL$. $CHCl_3$층이 $IC_{50}=9.2{\pm}0.5{\mu}g/mL$의 강한 활성이 확인되었고, 강력한 활성물질의 존재가 시사되었다. 또한, pancreatic lipase 저해활성을 측정한 결과, 강한 $ABTS^+$ 라디칼 소거능을 나타낸 EtOAc층과 $CHCl_3$층의 $IC_{50}=1.9{\pm}0.2$. $5.7{\pm}1.3{\mu}g/mL$의 저해율을 나타내었으며 이는 대조군인 orlistat에 비해 다소 약하나 단일물질로 정제할 경우 더욱 강한 효능의 화합물이 존재할 가능성을 시사하였다. 향후 이들 활성물질 동정을 통한 활성 기작에 대한 연구가 필요하며 본 연구결과는 보다 우수한 라디칼 소거능 및 pancreatic lipase 저해능을 가지는 새로운 선도화합물 발굴을 위한 기초자료로 이용될 수 있을 뿐만 아니라 국내에 자생하는 마디풀의 식물 화학적 성분연구에 대한 기초자료로 활용가능하리라 사료된다.
We examined the effect of extracts of meju prepared with traditional and standardized methods on pancreatic lipase and the absorption of dietary lipid. Aqueous methanolic (80%, v/v) extracts of meju dose-dependently inhibited the activities of porcine pancreatic lipase. The plasma triglyceride levels in Imprinting Control Region mice after a single oral administration of lipid emulsion containing aqueous methanolic extracts from meju made by the standardized methods were lower than that of the group given a lipid emulsion containing the extracts of meju made by traditional methods. The inhibitory activity of the meju extract on dietary lipid digestion appears to be more closely associated with aglycone forms of phenolic compounds such as free isoflavones than with glycosides, since meju samples with higher total phenolic or free isoflavone content showed the stronger inhibition against pancreatic lipase. Furthermore, the data suggest that meju made using the standardized method, which contains higher levels of total isoflavones relative to traditionally prepared meju, could effectively suppress digestion of dietary lipids and therefore have the potential to help ameliorate hyperlipidemia and obesity.
This study was conducted to evaluate the cytotoxicity and ${\alpha}-Amylase$, ${\alpha}-Glucosidase$, pancreatic lipase inhibition in vitro by different solvent fractions from the roots of Codonopsis lanceolata. The values of $IC_{50}$ against Calu-6 cell showed a high effect in n-hexane fraction ($10.13{\mu}g/mL$) whereas DW fraction exhibited the weakest inhibition on cell viability, having an $IC_{50}$ value of over $1,000{\mu}g/mL$. The values of $IC_{50}$ against HCT-116 cell showed the highest activity in n-BuOH fraction ($102.01{\mu}g/mL$), followed by n-hexane fraction ($145.85{\mu}g/mL$), methylene chloride fraction ($332.02{\mu}g/mL$), ethyl acetate fraction ($462.93{\mu}g/mL$) and DW fracion ($>1,000{\mu}g/mL$). ${\alpha}-Amylase$ inhibitory activity in methylene chloride fraction and ethyl acetate fraction was found to have a higher inhibitory effect with 24.5% and 25.6% than the other fractions. The highest ${\alpha}-Glucosidase$ inhibitory activity was observed from the ethyl acetate fraction extract, while the extract of DW fraction showed the lowest level of inhibitory activity at given experiment concentration. The pancreatic lipase inhibitory activity of C. lanceolata was found to have a higher the effect in ethyl acetate fraction. Inhibition of lipase activity of the ethyl acetate fraction and n-hexane fraction showed a relatively high, while the extract of DW fraction showed the lowest level at given experiment concentration. These results suggested that the roots of C. lanceolata may assist in the potential biological activity on carbohydrate, lipid Inhibitory activity and anticancer activity.
Obesity has become a worldwide health problem. Orlistat, an inhibitor of pancreatic lipase, is currently approved as an anti-obesity drug. However, gastrointestinal side effects caused by Orlistat may limit its use. In this study the inhibitory activities of dandelion (Taraxacum officinale) against pancreatic lipase in vitro and in vivo were measured to determine its possible use as a natural anti-obesity agent. The inhibitory activities of the 95% ethanol extract of T. officinale and Orlistat were measured using 4-methylumbelliferyl oleate (4-MU oleate) as a substrate at concentrations of 250, 125, 100, 25, 12.5 and $4\;{\mu}g/ml$. To determine pancreatic lipase inhibitory activity in vivo, mice (n=16) were orally administered with com oil emulsion (5 ml/kg) alone or with the 95% ethanol extract of T. officinale (400 mg/kg) following an overnight fast. Plasma triglyceride levels were measured at 0, 90, 180, and 240 min after treatment and incremental areas under the response curves (AUC) were calculated. The 95% ethanol extract of T. officinale and Orlistat, inhibited, porcine pancreatic lipase activity by 86.3% and 95.7% at a concentration of $250\;{\mu}g/ml$, respectively. T. officinale extract showed dose-dependent inhibition with the $IC_{50}$ of $78.2\;{\mu}g/ml$. A single oral dose of the extract significantly inhibited increases in plasma triglyceride levels at 90 and 180 min and reduced AVC of plasma triglyceride response curve (p<0.05). The results indicate that T. officinale exhibits inhibitory activities against pancreatic lipase in vitro and in vivo. Further studies to elucidate anti-obesity effects of chronic consumption of T. officinale and to identify the active components responsible for inhibitory activity against pancreatic lipase are necessary.
Objectives : This study was conducted to evaluate the antioxidant activity and inhibitory activity of pancreatic lipase in vitro using natural products sangju dungsi, chungdo bansi, kabju baekmok three kind of young persimmon fruit extracts and to develop a high - functional anti - obesity substance with reduced body fat. Methods : The antioxidative effect of the three kind of young persimmon fruit extracts was determined by hot water extraction, 30% EtOH extraction and 70% EtOH extraction. The antioxidant activities were evaluated through radical scavenging assays using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS) radicals. Furthermore, we examined total phenol and flavonoids contents. And the pancreatic lipase inhibition was measured by selecting the sangju dungsi extract with antioxidant effect. Results : The yield of water, 30% and 70% EtOH extract from young persimmon fruit was sangju dungsi (water 8.3%, 30% EtOH 18.1%, 70% EtOH 16.9%), chungdo bansi (water 16.2%, 30% EtOH 16.1%, 70% EtOH 11.6%), kabju baekmok (water 16%, 30% EtOH 16.8%, 70% EtOH 11.5%). The sangju dungsi 30% EtOH extract eminent DPPH ($IC_{50}$, $19.25{\pm}2.94{\mu}g/m{\ell}$) and ABTS ($IC_{50}$, $19.94{\pm}4.07{\mu}g/m{\ell}$) radical scavenging activity, and total phenol $52.37{\pm}0.78mg/g$ and flavonoid $7.97{\pm}0.13mg/g$ contents were also excellent. It also showed excellent pancreatic lipase inhibition efficacy. Conclusion : The extracts from the three kind of young persimmon fruit extracts showed excellent antioxidant activity. sangju dungsi 30% EtOH extract may be a new anti-obesity material by reducing fat absorption through the inhibition of pancreatic lipase.
비만은 에너지의 섭취와 소비의 불균형으로 지방조직이 비정상적으로 분화하면서 생기는 대사질환으로 알려져있다. 본 연구에서는 본 연구는 적양파 추출물 처리에 따른 Pancreatic lipase 억제, 지방세포분화 억제 활성을 확인하고자 하였다. 적양파추출물 처리에 따른 활성은 지방세포 분화 및 관련 유전자에 대한 평가는 3T3-L1 지방전구세포를 이용하고 Real-Time PCR을 통하여 확인하였다. 실험 결과, Pancreatic lipase 활성 억제 실험에서 적양파 추출물은 농도 의존적으로 lipase 활성을 억제하였다. 지방세포분화 실험을 수행한 결과, insulin, dexamethasone, 3-isobutyl-1-methylxanthine(MDI)등으로 분화 유도된 3T3-L1 세포에서 적양파 추출물은 지방전구세포의 분화를 억제하였으며 동시에 지방구 형성을 억제하는 것으로 나타났다. 또한, 지방전구세포의 분화 과정과 관련된 C/EBP-α, C/EBP-β, PPAR-γ의 발현을 억제하였다. 본 실험에서 적양파 추출물은 지방분해효소를 억제하며, 지방전구세포 분화와 관련된 유전자 발현을 억제함으로써 지방세포 분화 및 지방구형성을 억제할 수 있는 항비만 소재로의 개발 가능성이 높다고 판단된다.
솔장다리(S. collina)는 건조한 대지에 널리 분포되어 있는 한해살이 식물로 한방에서는 고혈압의 치료에 사용되어왔으며 선행연구를 통해 솔장다리가 보유한 항산화 및 항암 활성을 밝힌바 있다. 본 연구에서는 솔장다리 에탄올 추출물(SCEE)의 항비만 활성을 췌장 lipase 효소 활성 억제능과 세포실험계를 이용하여 분석하였다. 그 결과 SCEE는 농도 의존적으로 lipase 효소 활성을 유의적으로 억제시켰으며, 3T3-L1 preadipocyte를 이용하여 지방세포 분화 및 지방생성, 생성된 지방의 분해에 미치는 영향을 분석한 결과 지방세포 분화, 세포 내 지방 축적, TG 함량 등을 독성 없이 농도의존적으로 억제하였고, 지방세포 내 중성지방을 유의적으로 분해시키는 것으로 나타났다. 이러한 솔장다리의 지방세포 분화 억제능은 핵심 작용 인자인 $C/EBP{\alpha}$, $C/EBP{\beta}$, 그리고 $PPAR{\gamma}$의 유전자 및 단백질 발현조절에서 기인함을 확인하였다. 이러한 결과는 솔장다리가 보유한 췌장 lipase 활성 저해능, 지방세포 분화 억제능, 지방세포 내 지방 분해능, 지방분화관련 인자 신호전달기전 조절을 통한 항비만 활성을 처음으로 밝혀낸 것이며 추후 계속적인 연구를 통해 활성 물질의 규명이 필요할 것으로 판단된다.
본 연구에서는 백두구(A. cardamomum L.) 메탄올 추출물(ACME)의 항산화 및 항비만 활성을 DPPH radical 소거능과 췌장 lipase 효소 활성 억제능, 그리고 세포실험계를 이용하여 분석하였다. 그 결과 ACME는 DPPH radical을 농도 의존적으로 소거하였으며 DPPH radical 소거능의 50% 저해농도($IC_{50}$)는 $25.15{\mu}g/ml$로 나타났다. 또한 ACME는 농도 의존적으로 lipase 효소 활성을 유의적으로 억제시켰으며, 3T3-L1 preadipocyte를 이용하여 지방세포 분화 및 지방생성, 생성된 지방의 분해에 미치는 영향을 분석한 결과 ACME는 지방세포 분화, 세포 내 지방 축적, TG 함량 등을 독성 없이 농도의존적으로 억제하였으며 지방세포 내 중성지방을 유의적으로 분해시키는 것으로 나타났다. 이러한 백두구의 지방세포 분화 억제능은 핵심 작용 인자인 $C/EBP{\alpha}$, $C/EBP{\beta}$, 그리고 $PPAR{\gamma}$의 유전자 및 단백질 발현조절에서 기인함을 확인하였다. 이러한 결과는 백두구가 보유한 항산화능과 췌장 lipase 활성 저해능, 지방세포 분화 억제능, 지방세포 내 지방 분해능을 통한 항비만 활성을 처음으로 밝혀낸 것이며 추후 계속적인 연구를 통해 활성 물질의 규명이 필요할 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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