• 미생물학회지
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• 제23권2호
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• pp.138-146
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• 1985

포도당 이성화효소를 coding는 Bacillus licheniformis ATCC31667의 유전자를 Escherichia coli LE 392-6에 클로닝하였다. Bacillus lieheniformis 염색체 DNA를 분리하고 제한효소인 Pst I.HindIII, Sal 1, EcoR 1, BamH1으로 절단한 후 운반제 plasmid인 pBR332에 연결하고 포도당 이성화효소 negative인 E. coli LE 3926-6에 형질전환하였다. 이중 E채꺄 제한효소를 사용한 것만이 glucose isomerase positive로 전환되어 xylose를 유일 탄소원으로 하여 성장하였다. 이 제조합 plasmid를 제한효소로 처리하여 본 결과 4.1Kb의 Bacillus licheniformisdb전자가 옮겨 졌음을 확인했고 여기에 제한효소 HindII와 Puv II의 절단위치가 확인되어 제한요소 지도를 작정하였다. 이 재조합 plasmid pBGI6는 연속계대 10일 후에도 매우안정하게 유지되었다. 한편 포도당 이정화 효소의 안정을 측정하여 본 바 야생숙주에 비해 약 20배의 증가를 나타냈다.

• 한국습지학회지
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• 제13권3호
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• pp.697-705
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• 2011

본 연구의 목적은 다제 항생제 내성특성을 가진 pB10을 함유한 Escherichia coli DH 5 alpha,(E.coli $DH5{\alpha}$)를 대상 미생물로 하여 염소와 오존의 살균효율을 비교하는 것이다. 또한 다제 내성플라스미드 pB10에 대한 염소와 오존에 의한 제거율을 조사하였다. 주입농도 대비 오존살균이 염소살균에 비해 약 1.2~1.4 배 정도 효율이 높게 나타났다. 또한 다제 내성플라스미드 pB10에 대한 제거 실험에서 오존에 의한 제거율이 염소보다 약 2~4배 높게 나타났다. 오존살균에 의한 높은 pB10 제거효율은 오존 살균시 발생하는 OH 라디칼에 의한 것으로 사료된다. 이러한 연구결과로부터 내성균 및 유전물질을 효과적으로 제어하기 위하여 기존 염소살균법에 오존 또는 광촉매산화와 같은 고급산화법을 연계처리에 대한 필요가 있을 것으로 판단된다.

• 미생물학회지
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• 제36권3호
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• pp.203-208
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• 2000

재조합 플라스미드 pAL850에 함유된 Bacillus circulans KCTC3004 $\alpha$-amylase 유 전자를 pUB110을 이용하여 shuttle 플라스미드 pALS111을 만들어 Bacillus 세포에 이동. 발현시켰다. Bacillus subtilis(고초균)와 Bacillus megaterium(거대균)으로 형질전환된 pALS111로부터 $\alpha$-amylase는 세포증식과 비례하여 생산되었다. 형질전화주가 생산하는 $\alpha$ -amylase의 최대활성을 유전자 공여 균주인 B. circulans와 비교했을 때 고초균은 약 95배, 거대균은 약 34배 정도의 높은 활성을 나타내었다. 그리고 대장균 형질전환주는 분비율이 10% 정도인데 반하여 고초균 형질전화주는 생산된 효소전부를 , 거대균 형질전환주는 약 98%를 세포외로 분비함을 보임으로써 고초균과 거대균은 실용적인 면에서 대장균보다 우월 함을 나타내었다, pALS111의 각 숙주 내에서의 안정성을 살펴본 결과 거대균에서는 92%, 고초균에서는 76%, 대장균에서는 38% 로 나타났다. SDS-PAGE와 zymogram을 통해 추정 된 대장균과 고초균, 거대균에서 발현된 효소의 분자량은 약 55,000으로 확인되었다. 이들 형질전환주가 생산하는 $\alpha$-amylase는 starch 에 작용하여 주된산물로서 maltotriose 이상의 다양한 maltooligosaccharide들을 생산함이 확인 되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권6호
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• pp.637-641
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• 1992

한국 재래식 된장.간장 발효균 Bacillus sp. SSA3 균주의 expression vector를 개발하기 위해 Bacillus sp. SSA3의 chromosomal DNA로부터 유전자의 promoter 부위를 cloning 하였다. Recombinant plasmid를 제작하기 위하여 Bacillus sp. SSA3의 chromosomal DNA을 HindIII로 절단한 단편을 pGR71 plasmid의 CAT gene과 pUC18 plasmid의 $\beta$-galactosidase gene의 전방에 삽입시킨 후, E.coli JM109에 형질전환하였다.E. coli JM109의 chloramphenicol 내성 clones으로부터 6 recombinant plasmid를 선별하였다. 이들 선별된 plasmid는 Bacillus sp. SSA3의 expression vector로 사용시 각 재조합 plasmid 중에 삽입된 promoter의 염에 대한 영향의 정도를확인하기 위해 10% NaCl이 첨가된 LB medium상에서 배양하였을 때, 이들 중 Bacillus sp. SSA3의 4 clones은 융합 CAT gene의 발현이 강하게 감소되었으나 2 clones은 약하게 저해되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권4호
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• pp.403-408
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• 2009

A number of bifidobacterial species of human origin were screened for the presence of cryptic plasmids. One strain, Bifidobacterium longum FI10564, harbored plasmids of approximately 2.2 kb, 3.6 kb, and 4.9 kb in size. The smallest plasmid, pFI2576(2,197 bp), was studied in detail and its complete nucleotide sequence was determined. Computer-assisted analysis of this novel plasmid(G+C content 62%) identified 9 putative open reading frames(orfs), 3 of which were shown to be probable genes. These putative genes are arranged in an operon-like structure, in which the overlapping orfs 1 and 2 encode putative Rep proteins and are highly homologous to the rep genes of the B. longum plasmid pMBI(1,847 bp). The mechanism of replication of pFI2576 was investigated using Southern blot analysis of whole cell lysates, with and without S1 nuclease treatment, and atomic force microscopy(AFM). The results indicate that pFI2576 is likely to use the theta mode of replication.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제27권9호
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• pp.1711-1715
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• 2017

In this study, we characterized the $bla_{NDM-5}$-bearing plasmid in a Klebsiella pneumoniae isolate that had lost the plasmid during serial passage. We determined the complete sequences of the plasmid pCC1410-2, which was extracted from a K. pneumoniae ST709 isolate collected at a Korean hospital from which two NDM-5-producing K. pneumoniae isolates were subsequently isolated. As a result, the pCC1410-2 plasmid had a backbone structure that was similar to those of two plasmids previously reported from the same hospital, but lacked some antibiotic resistance genes ($bla_{TEM-1}$, rmtB, mphR(A), mrx(A), and mph(A)). A 9-bp repeating unit encoding three amino acids (Gln-Gln-Pro) was inserted in TraD in pCC1410-2. Thus, the pCC1410-2 plasmid might be transferred from the previously identified carbapenem-resistant K. pneumoniae, but some delections and inversions might have occurred during the process. We compared the transfer frequency and stability of the plasmids. The relative frequency of conjugative transfer and stability in the host were significantly lower in pCC1410-2 than in previously reported $bla_{NDM-5}$-bearing plasmids in Korea. A low transfer frequency and instability in the host may cause underestimation of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae in the clinical setting and in surveillance studies.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제10권1호
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• pp.29-33
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• 2005

A DNA vaccine methodology using eukaryote expression vectors to produce immunizing proteins in the vaccinated hosts is a novel approach to the development of vaccine and immuno-therapeutics, and it has achieved considerable success over several infectious diseases and various cancers. To further enhance its efficiency, attempts were made to develop novel plasmid vectors containing multiple immunostimulatory CpG motifs, for rapid and strong immune response. First, a 2.9 kb compact plasmid vector (pVAC), containing CMV promoter, polycloning site, BGH poly(A) terminator, ampicillin resistance gene and pBR322 origin was constructed. A pVAC-hEPO was also constructed, which contained a human erythropoietin gene, for evaluating the transfection efficiency of naked plasmid DNA both in vitro and in vivo. To examine the adjuvant effect of multi-CpG motifs on naked plasmid DNA, 22 and 44 enriched and unmethylated CpG motifs were introduced into pVAC to generate pVAC-ISS1 and pVAC-ISS2, respectively. $100{\mu}g$ of pSecTagB, pVAC, pVAC-ISS1 or pVAC-ISS2 were each injected intramuscularly into the tibilias anterior muscle of Balb/c mice. The level of interleukin-6 induced in the mice injected with pVAC-ISS1 and pVAC-ISS2 were significantly elevated after 12 hours, which were almost 2 and 2.5 times higher than that in the mice injected with pSecTagB, respectively. These results suggest that DNA vaccine plasmids with enriched CpG motifs can induce rapid secretion of interleukin-6 by lymphocytes. In conclusion, these vectors can contribute to the development of adjuvant-free DNA vaccinations against infectious diseases and various cancers.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권5호
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• pp.544-549
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• 1995

The alkaline elastase is an extracellular serine protease of the alkalophilic Bacillus strain Ya-B. To increase the gene copy number and the production level of the alkaline elastase Ya-B, we designed, on the B. subtilis chromosome, a gene amplification of the 10.6 kb repeating unit containing amyE, aleE (alkaline elastase Ya-B gene) and tmrB. The aleE was inserted between amyE and tmrB, and B. subtilis APT119 strain was transformed with this amyE-aleE-tmrB-junction region fragment. As a result, we succeeded in obtaining tunicamycin-resistant (Tm$^{r}$) transformants (Tf-1, Tf-2) in which the designed gene amplification of 10.6 kb occurred in chromosome. The transformants showed high productivity of $\alpha $-amylase and alkaline elastase Ya-B. The copy number of the repeating unit (amyE-aleE-tmrB) was estimated to be 25, but plasmid vector (pUC19) was not integrated. The amplified aleE of chromosome was more stable than that of plasmid in absence of antibiotics.

• 생명과학회지
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• 제15권5호
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• pp.734-738
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• 2005

Xylanase를 생산하는 알칼리 내성 Bacillus alcalophilus AX2000의 chromosomal DNA로부터 xylanase 유전자를 cloning하여 그 염기배열 순서를 결정한 다음 이로부터 유전자 발현에 관련된 구조를 분석하였다. Xylanase 유전자의 cloning을 위해 제한효소 PstI으로 절단한 B. alcalophilus AX2000의 chromosomal DNA와 pUC19을 ligation 시켜 E. coli $DH5\alpha$에 형질전환시킨 후 형질전환체 중에서 xylanase 활성을 나타내는 재조합 plasmid pXTY99를 분리하였다. 재조합 plasmid pXTY99은 pUC19의 PstI 부위 내에 7kb의 외래 DNA가 삽입 되 었다. Cloning된 xylanase 유전자(xynT)의 염기배열을 분석한 결과 유전자의 크기는 1,020 bp이었고 이는 340개의 아미노산으로 구성된 분자량 40 kDa의 poly-peptide를 coding하고 있었다. 이 염기배열은 AUG 개시 codon으로부터 각각 259와 282 base상류에 TACAAT의 -10 box와 GTTCACA인 -35 box로 추정되는 염기배열이 존재하였으며 ribosome 결합부위가 존재하였다. B. alcalophilus AX2000의 xylanase와 아미노산배열의 유사성이 가장 높은 xylanase는 Bacillus sp. N137과 B. stearothemophilus 21 유래의 xylanase로 각각 $61\%$와 $59\%$의 유사성을 나타내었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권1호
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• pp.37-44
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• 1991

A shuttle promoter-probe vector, pEB203, was derived from pBR322, pPL703 and pUB110. Using the vector, a useful DNA fragment, 319 bp EcoRI fragment, having strong promoter activity has been cloned from Bacillus subtills chromosomal DNA. Selection was based on chloramphenicol resistance which is dependent upon the introduction of DNA fragments allowing expression of a chloramphenicol acetyl transferase gene. The nucleotide sequence of the 319 bp fragment has been determined and the putative -35 and -10 region, ribosome binding site, and ATG initiation codon were observed. This promoter was named EB promoter and the resultant plasmid which can be used as an expression vector was named pEBP313. The crystal protein gene from B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 was cloned downstream from the EB promoter without its own promoter. When the resultant plasmid, pBT313, was introduced into Escherichia coli and B. subtilis, efficient synthesis of crystal protein was observed in both cells, and the cp gene expression in B. subtilis begins early in the vegetative phase. The cell extracts from both clones were toxic to Hyphantria cunea larvae.