본 연구는 제 4기, 제 5기 국민건강영양조사 자료를 이용하여 18세 이상 성인 23577 명을 남성 전체와 여성 전체, 65세 이상 남성과 65세 미만 남성, 폐경 전 여성과 폐경 후 여성으로 나누어 비타민 D의 수준에 따라 헤모글로빈과 페리틴 농도의 변화가 어떤 차이를 보이는지 알아보고자 하였다. 각 조사 대상 군을 비타민 D의 수준에 따라 5분 위수로 나누어 각 군 별 헤모글로빈과 페리틴 농도의 변화를 복합표본설계방법에 따라 일반선형모형을 사용하여 분석하였고 분석 결과 여성 전체 군(p<0.001)과 폐경 전 여성 군(p<0.001)에서 비타민 D 수준에 따라 헤모글로빈 농도의 차이가 통계적으로 유의하였고 폐경 후 여성 군과 남성 전체 및 65세 이상 남성, 65세 미만 남성 군에서는 통계적으로 유의하지 않았다. 페리틴 농도는 여성 전체 군(p<0.001)과 폐경 전 여성 군(p<0.001)과 남성 전체 군(p<0.05), 65세 미만 남성 군(p<0.05))에서 통계적으로 유의한 차이를 나타냈으나 남성에서 비타민 D가 높은 그룹이 페리틴이 낮았던 반면 여성에서는 비타민 D가 높은 그룹이 페리틴 농도가 더 높았고, 폐경 후 여성 군과 65세 이상 군에서 통계적으로 유의하지 않았다. 따라서 비타민 D는 폐경 전 여성에서 헤모글로빈 농도에 영향을 줄 가능성이 있고 폐경 전 여성과 65세 미만 남성의 체내 철 조절에 관여할 가능성이 있다.
연구배경 : 폐상피세포가 능동적으로 IL-8을 분비한다는 것은 주지의 사실이다. NF-${\kappa}B$는 IL-8 발현 조절에 있어서 가장 중요한 역할을 담당하는 전사인자이다. Triptolide는 최근 밝혀진 NF-${\kappa}B$ 억제제로서 중국한약제인 뇌공등 (Tripterygium Wilfordii)에서 추출된약제이다. 연자들은 새로운 NF-${\kappa}B$ 억제제인 triptolide가 폐상피세포에서 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자의triptolide가 염증성 폐질환에서 새로운 치료제로서의 가능성을 확인하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방법 : 폐상피세포로서 A549 사용하였고 triptolide는 미국의 Pharamagenesis(Palo Alto, CA)사로부터 제공받았다. NF-${\kappa}B$ 활성유도물질로는 IL-$1{\beta}$(R&D)와 PMA(Sigma)를 이용하였다. IL-8 유전자의 발현은 RT-PCR과 ELISA를 이용하여 측정 하였다. NF-${\kappa}B$의존성 IL-8 유전자의 전사활성을 평가하기 위하여는 IL-8 NF-${\kappa}B$ luciferase construct를 안정적으로 유전자주입한 A549 IL-8 NF-${\kappa}B$ luciferase 세포주를 제조해 사용하였고 NF-${\kappa}B$ DNA 결합은 electromobility shift assay(EMSA)를 이용하였다. p65 전사활성을 assay하기 위해서는 Gal4-p65 fusion protein expression system을 유전자주입과 luciferase assay를 통하여 시행하였다. Transcriptional coactivator의 역할을 규명 하가 위하여서는 CBP(CREB-binding protein)와 SRC-1(steroid receptor coactivator-1) 발현 벡터를 유전자 주입하고 luciferase assay를 이용하여 확인하였다. 결과 : Luciferase assay로 triptolide가 PMA와 IL-$1{\beta}$자극에 의한 IL-8 NF-${\kappa}B$ 활성을 의미있게 감소시킴을 확인하였다. IL-8 ELISA와 RT-PCR로 triptolide가 PMA와 IL-$1{\beta}$ 자극에 의해 유도되는 IL-8 발현을 각각 단백질과 mRNA 수준에서 억제함을 관찰하였다. Triptolide가 PMA와 IL-$1{\beta}$에 의한 IL-8 NF-${\kappa}B$의 전사활성을 억제시킨 반면 EMSA와 $I{\kappa}B{\alpha}$ Western blot을 이용한 실험에서는 triptolide가 NF-${\kappa}B$ DNA 결합과 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해에 전혀 영향을 미치지 못함을 확인하였다. 이러한 전사활성 억제와 DNA 결합 간의 불일치의 원인으로서는 DNA 결합 이후에 발생하는 핵내 에서의 transactivation에 triptolide가 영향을 미치리라고 생각되어 p65 transactivation study를 Gal4-p65T A(p65의 transactivation domain) fusion protein 발현 시스템과 luciferase assay를 이용하여 시행한 결과 triptolide가 p65 transactivation을 억제함으로써 NF-${\kappa}B$를 억제함을 확인하였다. 그러나 CBP나 SRC-1과 같은 coactivator의 역할을 규명하기 위한 유전자주입 실험에서 triptolide에 의한 p65 transactivation 억제에 대해 CBP나 SRC-1의 과발현이 별다른 영향을 미치지 못하였다. 결론 : Triptolide는 폐상피세포에서 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자의 전사활성을 억제하고 그 기전은 $I{\kappa}B{\alpha}$ 경로가 아닌 핵내에서의 p65 transactivation 억제에 의해 발생하며 이에는 CBP나 SRC-1과 같은 coactivator가 관여하지 않음을 확인하였다.
El-Shemy, Hany A.;Khalafalla, Mutasim M.;Fujita, Kounosuke;Ishimoto, Masao
BMB Reports
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제39권1호
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pp.61-67
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2006
Molecular co-suppression phenomena are important to consider in transgene experiments. Embryogenic cells were obtained from immature cotyledons and engineered with two different gene constructs (pHV and pHVS) through particle bombardment. Both constructs contain a gene conferring resistance to hygromycin (hpt) as a selective marker and a modified glycinin (11S globulin) gene (V3-1) as a target. sGFP(S65T) as a reporter gene was, however, inserted into the flanking region of the V3-1 gene (pHVS). Fluorescence microscopic screening after the selection of hygromycin, identified clearly the expression of sGFP(S65T) in the transformed soybean embryos bombarded with the pHVS construct. Stable integration of the transgenes was confirmed by polymerase chain reaction (PCR) and Southern blot analysis. Seeds of transgenic plants obtained from the pHV construct frequently lacked an accumulation of endogenous glycinin, which is encoded by homologous genes to the target gene V3-1. Most of the transgenic plants expressing sGFP(S65T) showed highly accumulation of glycinin. The expression of sGFP(S65T) and V3-1 inherits into the next generations. sGFP(S65T) as a reporter gene may be useful to increase the transformation efficiency of transgenic soybean with avoiding gene co-suppression.
The effect of helminthiasis on zinc metabolism was monitored using endogenous $^{65}Zn$ after intraperitoneal injection of 1 g of $^{65}Zn$ as zinc chloride. In the first experiment zinc turnover was investigated in 18 male weanling rats, which were randomly divided into 3 groups. One group was infected with 73 third stage larvae of Nippostrongylus brasiliensis per gram body weight ; the other groups were the pair-fed and ad lib-fed controls. The route of loss of zinc was investigated in the second experiment with the same design using 18 animals with a lower dose of infection (33 larvae per gram body weight). The biological half life of endogenous $^{65}Zn$ was lower (p<0.05) in the infected group as compared to the controls. In the later phase of infection (9th to 16th day) there was reduced retention of $^{65}Zn$ and increased loss (p<0.05) of $^{65}Zn$ from the body though urine and faeces. It was concluded that infection of N. brasiliensis was accompanied by increased loss of endogenous Zn through faeces and urine.
Introduction: The nuclear factor ${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) is a super family of transcription factors which plays important roles in development and progression of cancer. The present investigation concerns NF-${\kappa}B$ /p65 activity in human breast cancers with overexpression of ER, PR, HER-2/neu, as well as the significance of p65 expression with regard to menopausal status, stage, grade, tumor size, nodal status, and NPI of invasive ductal carcinomas in Eastern India. Materials and Methods: In this hospital based study 57 breast cancer patients attending a Breast Clinic of a reputed institute of Eastern India were assessed for p65 protein expression in breast tumor tissue samples by Western blotting. ER, PR and HER-2/neu expression was determined by immunohistochemistry. Results: NF-${\kappa}B$/p65 was significantly associated with advanced stage, large tumor size (${\geq}5$ cm), high grade, negative ER, negative PR, and positive HER-2/neu. High NF-${\kappa}B$/p65 expression was more frequent in patients with a high NPI ($NPI{\geq}5.4$, 84.6%) compared with low NPI (<5.4, 44.4%) and this association was statistically significant (p = 0.002). Conclusion: NF-${\kappa}B$/p65 overexpression was associated with advanced stage, large tumor size, high grade, and high NPI which are poor prognostic factors linked to enhanced aggressiveness of the disease. NF-${\kappa}B$/p65 expression implies aggressive biological behavior of breast cancer and this study validates significant association of NF-${\kappa}B$ /p65 overexpression with negative estrogen and progesterone receptor status and overexpression of HER-2/neu oncoprotein. In our good clinical practice, patients with NF-${\kappa}B$ positive tumors need to be treated aggressively.
The extracts of Oenanthe javanica were evaluated for their effects on the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2), which is mediated by the translocation of the p65 subunit into the nucleus. Fractions of ethyl acetate and chloroform from 80% ethanol extracts of O. javanica exhibited inhibitory effects on the secretion of tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) from lipopolysaccharide (LPS)-stimulated peritoneal macrophages; however, the aqueous- and hexane-fractions showed no significant effect. The ethyl acetate- and chloroform-fractions also reduced the COX-2 enzyme levels after 24-hr treatment. RT-PCR showed that the mRNA levels of COX-2 decreased following treatment with these fractions, suggesting that COX-2 expression is transcriptionally regulated by these extracts. We examined the effects of the chloroform- and ethyl acetate-fractions on the cytosolic activation of nuclear factor-${\kappa}B$ ($NF-{\kappa}B$, p65 subunit) and on the degradation of inhibitor-${\kappa}B{\alpha}$ ($I-{\kappa}B{\alpha}$) in order to determine the mechanism of COX-2 regulation. The LPS-stimulated activation of the p65 subunit was significantly blocked upon the addition of $50\;{\mu}g/mL$ of these fractions, and the cytosolic $I-{\kappa}B{\alpha}$ degradation process was simultaneously inhibited. These findings suggest that the inhibition of COX-2 expression by the ethyl acetate-and chloroform-fractions may result from the inhibition of p65 translocation by blocking the degradation of $I-{\kappa}B{\alpha}$; this may be the mechanistic basis for the anti-inflammatory effects of O. javanica.
목적 : 만 65 세 이상 고령운전자와 50 ~ 65 세 이전의 예비고령 운전자의 시각적 기능을 검사하고, 일반인과 직업 운전자를 구분하여 그 차이점을 연구하고자 한다. 방법 : 본 연구에 참여한 대상자는 만 65 세 이상 고령운전자(40 명), 만 65 세 이하 운전자(67 명)이었다. 모든 대상자들은 안과적 질환이 없고, 운전 경력은 5년 이상이었다. 기본적인 데이터(성별, 직업, 연령, 건강상태)와 함께 시각기능 데이터 (대비감도, 정적 및 동적 입체시, 시력회복시간, 눈부심 지수)등을 측정하였다. 결과 : 명소시 조건에서의 대비감도는 전반적으로 버스군에서 가장 좋은 감도를 보였으며, 12 cpd와 18 cpd의 주파수에서 일반 1.57, 버스 1.70으로 그 차이 값이 통계적으로 유의하게 나타났다(p<0.05). 암소시 조건에서는 65 세 이상 고령층에서는 주파수가 높아질수록 일반군과 택시군에서 유의한 차이를 보여주었다(p<0.05). 눈부심 후 시력회복시간은 통계적으로 유의한 차이를 보이지는 않았다. 다만 연령대가 증가할수록 시간이 길어지는 경향은 보였다. 눈부심 지수에 관한 결과는 65 세 이상의 일반군에서 운전에 방해가 되는 눈부심에 해당하는 지수 3에 가까운 결과를 보였고, 택시 및 화물 운전군에서는 양호한 눈부심에 해당하는 지수 5에 가까운 결과 값을 보여주었다(p<0.05). 결론 : 고령자들의 시기능을 분석한 결과, 나이가 들수록 대부분의 시기능이 저하되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 65 세 이상의 고령 운전자의 안전운전을 위해서는 현재 시행되어지고 있는 시력, 색각 검사 외에도 운전 환경과 연관되어 있는 시기능인 대비감도, 눈부심, 입체시력 등의 시각기능 검사가 추가적으로 고려되어야 할 것으로 보인다.
Kim, Kang-Sung;Kim, Myung-Hee;Kim Se-Ran;Kwon, Dae-Young
한국환경보건학회지
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제30권4호
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pp.314-319
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2004
Glycinin of more than $97\%$ purity was modified using maleic anhydride. Glycinin samples of $0\%,\;65\%,\;and\;95\%$ lysine residue modifications were used to determine the changes in turbidimetric characteristics of the protein due to maleylation. The solubility behavior of the protein as a function of pH was changed with maleylation. The isoelectric point of $65\%\;and\;95\%$ modified glycinin shifted to pH 4.0 and pH 3.5-4.0, respectively, as compared to pH 4.6 for native glycinin. Maleylated glycinins exhibited increased solubility at pH above 4.6. Turbidity of native glycinin decreased substantially by the addition of NaCl, but the stabilizing effect of NaCl decreased when the protein was chemically modified. The effect of NaCl on $65\%$ modified glycinin was intermediate between native glycinin and $95\%$ modified sample. Thermal aggregation of native glycinin was completed within 5 min of heating at $80^{\circ}C$. Maleylation contributed significantly to the thermostability of the protein at pH of 7.0 and 9.0, exhibiting little turbidity. Addition of NaCl suppressed thermal aggregation of native glycinin, but turbidity actually increased for the samples of $65\%\;and\;95\%$ modification.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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