Objective: p66Shc, a 66 kDa protein isoform encoded by the proto-oncogene SHC, is an essential intracellular redox homeostasis regulatory enzyme that is involved in the regulation of cellular oxidative stress, apoptosis induction and the occurrence of multiple age-related diseases. This study investigated the expression profile and functional characteristics of p66Shc during preimplantation embryo development in sheep. Methods: The expression pattern of p66Shc during preimplantation embryo development in sheep at the mRNA and protein levels were studied by quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-qPCR) and immunofluorescence staining. The effect of p66Shc knockdown on the developmental potential were evaluated by cleavage rate, morula rate and blastocyst rate. The effect of p66Shc deficiency on reactive oxygen species (ROS) production, DNA oxidative damage and the expression of antioxidant enzymes (e.g., catalase and manganese superoxide dismutase [MnSOD]) were also investigated by immunofluorescence staining. Results: Our results showed that p66Shc mRNA and protein were expressed in all stages of sheep early embryos and that p66Shc mRNA was significantly downregulated in the 4-to 8-cell stage (p<0.05) and significantly upregulated in the morula and blastocyst stages after embryonic genome activation (EGA) (p<0.05). Immunofluorescence staining showed that the p66Shc protein was mainly located in the peripheral region of the blastomere cytoplasm at different stages of preimplantation embryonic development. Notably, serine (Ser36)-phosphorylated p66Shc localized only in the cytoplasm during the 2- to 8-cell stage prior to EGA, while phosphorylated (Ser36) p66Shc localized not only in the cytoplasm but also predominantly in the nucleus after EGA. RNAi-mediated silencing of p66Shc via microinjection of p66Shc siRNA into sheep zygotes resulted in significant decreases in p66Shc mRNA and protein levels (p<0.05). Knockdown of p66Shc resulted in significant declines in the levels of intracellular ROS (p<0.05) and the DNA damage marker 8-hydroxy2'-deoxyguanosine (p<0.05), markedly increased MnSOD levels (p<0.05) and resulted in a tendency to develop to the morula stage. Conclusion: These results indicate that p66Shc is involved in the metabolic regulation of ROS production and DNA oxidative damage during sheep early embryonic development.
Ha, Woo Tae;Lee, Won Young;Lee, Ran;Kim, Jae Hwan;Kim, Nam Hyung;Kim, Jin Hoi;Lee, Il Joo;Song, Hyuk
Reproductive and Developmental Biology
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제37권1호
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pp.9-16
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2013
Artificial insemination (AI) has been performed widely in swine industry using fresh liquid sperm instead of frozen type of sperm. However fresh sperm are not able to preserve more than three days with optimal motility and other sperm parameters for the successful fertilization, since in vitro stored sperm has an oxidative stress that resulted increase of abnormality and acrosome reation. To overcome these major problems, novel preservative formulation is needed to neutralize the oxidative stress and to provide suitable physiological environment for sperm in in vitro. In this study, naturally derived substances such as Poncirus trifoliate (Trifoliate orange), Garcinia mangostana (Mangosteen), pig placenta and testis extracts were tested as sperm preservative agents. Placenta extracts (PE), trifoliate orange extracts (TOE), testes extracts (TE) and mangosteen extracts (ME) were applied to analyze specific parameters for sperm motion characteristics individually and combinatorial. Each individual extract treatment can accelerate the sperm motility but noticeably TOE, TE and ME treatments exhibited the considerable and significant preservation of sperm motility. PE, TE and ME showed a significant (p<0.05) increase in ALH after one week. Further we evaluated the five different combinations of these extracts on sperm motility and its motion characteristics. Surprisingly even after one week ME, TOE and TE combination significantly preserved the sperm motility about 75%. It is noteworthy that unlike individual extract treatment, combination of ME, TOE and TE simultaneously protect the sperm motility and its motion characteristics. Taken together these data conclude that addition of ME, TOE and TE can be effective for preservation of pig sperm.
조릿대 추출물을 이용한 식혜 제조의 가능성을 검토하고 기본 제조조건을 설정하기 위하여 추출물의 첨가수준을 달리하여 식혜를 제조하고 그 품질 특성에 대해 조사하였다. 조릿대 추출물을 첨가한 경우 pH와 총산 함량은 유의적인 변화가 없는 반면 당도, 환원당, 총 폴리페놀, 총 플라보노이드 함량은 식혜 SBE-30과 식혜 SBE-50에서 유의적으로 높았다. 각 식혜의 색상은 추출물 첨가수준이 높을수록 L값의 감소 및 b값과 탁도의 증가가 뚜렷하였다. DPPH 라디칼 소거능은 식혜 SBE-5의 경우 대조구와 유의적 차이가 없었으나 10% 이상의 조릿대 추출물 첨가조건에서는 첨가수준에 비례하여 유의적으로 증가하였다. 맛에 대한 관능평가에서 비록 유의적인 차이는 확인되지 않았으나 식혜 SBE-30과 SBE-50의 점수가 높은 편이었고, 색상에 대한 선호도는 추출물의 첨가수준에 따라 점차 낮게 평가되었으며 종합적 기호도 또한 식혜 SBE-50이 낮은 경향을 나타내었다.
A comparative study on thermal, static mechanical and dielectric characteristics were made over a temperature range of ca.20.deg.C to 320.deg.C and a frequency range of KHZ to MHZ band on low density polyethylene specimens crosslinked, respectively, by radiation and chemical method. The thermal property of both specimens shows that softening point appears to unchange by crosslinking, however, melting and liquidizing temperatures attain rapid increase at the imitiation of crosslinking. Mechanical properties show little difference to both specimens crosslinked by different method, further the behaviors were discussed in connection with the relaxation of molecular segments in amorphous phase. Dose dependent dielectric characteristics observed at ambient temperature under several fixed frequencies exhibit extremities at ca. 20 Mrad and the behaviors also were interpreted qualitatively by taking into consideration of dipole concentration change in amorphous phase together with the role of specimen geometry to the depth of oxidative layer. Observing frequency dependent dielectric characteristics, it was also proved that ionic conduction loss is appreciably greater in the specimen prepared by chemical method than that by radiation.
녹차 수용성 추출물을 첨가한 김부각을 제조하여 $60^{\circ}C$의 항온기에서 40일간 저장하면서 김부각의 산화안정성 및 품질특성을 검토하였다. 산가와 과산화물과는 저장기간 동안 FKBG-5% AGT군이 control이나 FKBG-10% AGT군에 비하여 매우 낮은 수준이었다. 녹차 수용성 추출물로 만든 김부각을 튀겼을 때 주요 지방산은 linoleic acid($C_{18:2}$), oleic acid($C_{18:1}$), palmitic acid($C_{16:0}$)의 순으로 많았다. Control은 녹차 수용성 추출물을 첨가한 김부각에 대해 포와지방산이 차지하는 비율이 상당히 증가하였으며, 불포화지방산 중 monoene의 함량은 약간 감소하였으나 polyen의 함량은 현저한 감소를 보였다. Carotenoid와 chlorophyll a 모두 녹차 수용성 추출물이 첨가된 김부각이 대조군보다, 튀기지 않은 김부각이 튀긴 김부각보다 높은 함량을 나타냈다. 녹차 수용성 추출물의 함량이 높을수록 chlorophyll a의 함량은 높았으나 carotenoid에서는 별다른 차이를 보이지 않았다. 관능평가에서 김특유의 냄새와 후미는 튀긴 부각과 튀기지 않은 부각 모두 5% 녹차 수용성 추출물 첨가군이 높은 점수를 보였으며, 전제적인 기호도는 튀긴 부각과 튀기지 않는 부각 모두 녹차 수용성 추출물로 만든 김부각이 control 보다 높은 점수를 보였다.
육제품에 사용되는 합성 항산화제를 대체할 천연물질에 관한 관심이 높아지고 있다. 본 연구는 냉장저장 중 아스타잔틴(AX)의 첨가가 유화형소시지의 산화 안정성 및 품질 특성에 미치는 영향을 조사하기 위해 무첨가구인 대조구, 500 mg/kg BHT (Butylated hydroxytoluene), 및 80 mg/kg AX으로 처리하였다. AX의 첨가는 유화형소시지의 pH, 유화 안정성 및 가열 수율에 유의적인 영향을 미치지 않았다(p>0.05). 그러나 육색의 경우 아스타잔틴 첨가구의 초기(day 1) 색상유지력은 합성 항산화제인 BHT와 동일하였고, 적색도는 높게 나타났다(p<0.05). 항산화 능력에서, 처리구간 단백질 산화는 유의적인 차이가 없었다. 지질 산화의 경우 저장 종료시(day 14) BHT 처리구에서 가장 낮은 값을 나타냈으나 AX 첨가구 또한 무 첨가구인 대조구보다 매우 낮게 나타났다(p<0.05). 한편, 경도는 저장 초기에 비해 저장 종료시 BHT와 AX 처리구들에서 대조구에 비해 낮게 나타났다(p<0.05). 그러므로 천연물질인 아스타잔틴은 기존에 사용되는 합성 항산화제인 BHT를 대체하여 항산화제의 역할뿐만 아니라 육제품의 색상 증진제로도 활용 가능할 것으로 판단된다.
In this study, we manufactured mung bean Dasik (pattern pressed candy) after selecting the optimum roasting conditions through physiochemical analysis and sensory evaluation. Then anti-oxidative abilities of roasted mung bean were measured in order to develop beauty food (Dasik) using roasted mung bean. In the content of vitexin and isovitexin of roasted mung bean, about 10 times the vitexin in the seed(60.85 mg/g) is found in the skin of raw mung bean, and about 9 times the isovitexin in the seed(71.42 mg/g) is also found in the peel. As a result of analyzing the seed and peel of mung bean after roasting it for 10, 20 and 30 minutes respectively, the optimum roasting condition is thought to be $110^{\circ}C$ for 30 minutes as the contents of vitexin and isovitexin showed the highest values of 104.94 mg/g and 122.02 mg/g respectively when the mung bean was roasted at $110^{\circ}C$ for 30 minutes. In the anti-oxidative activity evaluation of the optimum mung bean Dasik, the total content of phenol was shown to be 0.15 mg/mL, and the total content of flavonoid was shown to be 0.026 mg/mL. The DPPH radical scavenging ability showed a high vitality of 58.19%, and the ABTS radical scavenging ability was shown to be 13.26%.
The objective of our study was to investigate the major reasons for the different growth and visible injury on the needles of black pine growing in Ulsan and Yeocheon industrial complex areas, South Korea. After 12 years of growth, we collected climatic and air pollutant data, and analyzed soil properties and the physiological characteristics of black pine needles. Annual and minimum temperatures in Ulsan were higher than those in Yeocheon from 1996 to 2008. Ozone ($O_3$) was the pollutant in greatest concentration in Yeocheon, and whereas the $SO_2$ concentration in most areas decreased gradually during the whole period of growth, $SO_2$ concentration in Yeocheon has increased continuously since 1999, where it was the highest out of four areas since 2005. Total nitrogen and cation exchange capacity in Yeocheon soil were significantly lower than those of Ulsan. The average growth of black pine in Yeocheon was significantly smaller than that in Ulsan, and the growth of damaged trees represented a significant difference between the two sites. Photosynthetic pigment and malondialdehyde content and antioxidative enzyme activity in the current needles of black pine in Yeocheon were not significantly different between damaged and healthy trees, but in 1-year-old needles, there were significant differences between damaged and healthy trees. In conclusion, needle damage in Yeocheon black pine can be considered the result of long-term exposure to oxidative stress by such as $O_3$ or $SO_2$, rather than a difference in climatic condition or soil properties, and the additional expense of photosynthate needed to overcome damage or alleviate oxidative stress may cause growth retardation.
We investigated the effect of quercetin on growth and plasma cholesterol level and the effects of quercetin pretreatment (Diet 1, 0%; Diet 2, 0.25%; and Diet 3, 0.5% quercetin) for 30 and 60 days on oxidative stress induced by hypo-osmotic conditions (17.5, 8.75, and 4 psu) in olive flounder. The weights of flounder were higher with Diet 3 than with Diet 1 and 2, which indicated that a high concentration (Diet 3) of quercetin was very effective in growth. Total cholesterol levels were lower with Diets 2 and 3 than with Diet 1, leading us to hypothesize that quercetin removed low-density lipoproteins from circulation and thereby reduced total cholesterol. To understand the antioxidant role of quercetin, we measured the mRNA expression and activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) and the $H_2O_2$ concentration in quercetin-treated flounder exposed to osmotic stress. The $H_2O_2$ concentration and the SOD and CAT expression and activity levels were lower in flounder fed with Diets 2 and 3 than with Diet 1, suggesting that quercetin directly scavenges reactive oxygen species to reduce oxidative stress. Furthermore, the plasma lysozyme activity and osmolality were higher with Diets 2 and 3 than with Diet 1, indicating that quercetin increases immune function and helps to maintain physiological homeostasis. Plasma cortisol was lower with Diets 2 and 3 than with Diet 1, suggesting the quercetin protects against stress. These results indicate that quercetin has hypocholesterolemic and antioxidant effects, increases immune function, and acts to maintain physiological homeostasis.
Cadmium (Cd) is well known as a spermatotoxic and gonadotoxic heavy metal ion. This study was performed to assess the possible protective effect of Enerbalance on Cd-induced spermiotoxicity and testicular damage. The control group received isotonic saline; Cd group received Cd (2 mg/kg BW per day) orally; extract-treated groups were orally administrated with Enerbalance (50 mg and 100 mg/kg BW per day) and Cd for 10 days. Morphological changes of testicular tissue, sperm characteristics, oxidative/antioxidative parameters from testis, and serum sexual hormone level were determined. Enerbalance was significantely increased sperm amount in cauda epididymis without changes of ratio of epididymis/body weight and testis/body weight. Cd caused a marked decrease in epididymal sperm concentration and chemotactic sperm motility, testicular superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), Enerbalance was significantly ameliorated loss of epididymal sperm concentration, sperm chemotactic motility, antioxidative parameters, and male hormone whereas decreased abnormal architecture by testis damage. Enerbalance was successfully attenuated these adverse effects of Cd and offers a dose-dependent protection. Our study demonstrated that Enerbalance could proffer a measure of protection against Cd-induced testicular damage and spermiotoxicity by possibly reducing oxidative stress and increasing the antioxidant defense mechanism in mice.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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