오염수에서 유기인 화합물을 측정하기 위해 개발된 광섬유 바이오센서의 신호의 분석과 최적설계를 위하여 센서에 사용되어진 AChE효소(acetylcholinesterase)의 반응, 반응기 내의 유체거동 및 물질전달현상의 해석이 필요하다. 사용되어진 센서의 반응기 부분을 해석하고 재설계하기 위하여 효소 반응을 연구하고, 이동현상학적으로 유체 및 물질확산 현상을 해석하여 반응기 모델을 성립하였다. 사용되어진 유기인 화합물에 의해 저해되는 AChE효소의 측정범위인 0-2 ppm 사이에서 저해반응을 실험하였으며, 비가역 저해 효소 반응식을 제안하였다. 반응기를 두상 즉 벌크상과 효소층으로 나누어 유체거동을 해석하였으며, 고정화겔 내의 확산의 영향을 조사하였다. 반응식, 유체거동식 및 확산식을 연계하여 세워진 반응기 전체모델을 제시하였고, 이를 이용하여 신호를 해석하였다. 제시된 모델을 이용하여 효소량, 효소층의 두께의 증가에 따른 센서 신호량의 민감도를 전산모사하였다.
이 실험은 이화명나방 월동 유충에 대한 유기인 살출제의 in vitro에 있어서의 ChE저해력과 약제의 화학 구조와의 관계, in vivo에 있어서의 국소 시용법에 의한, 살충제의 독성과 화학 子조와의 관계, 특히 ChE 저해력과 살충력(독성)과의 관계를 비교 연구할 목적으로 실험하였으며 그 결과를 다음과 같이 요약할 수 있다. 1, Phosphate compounds는 thiophosphate compounds보다 in vitro에 있어서의 ChE 저해력은 강하다고 할 수 있으나 in vivo에 있어서의 독성은 비례적으로 반드시 강하다고 할 수 없다. 2. Alcoxy 즉 diethoxy는 dimethoxy보다 ChE 저해력과 독성이 비례적으로 반드시 강하다고 할 수 없다. 3. $(RO)_2PO(S)X$ 부분에 있어서 이 X부분이 달라짐에 따르는 ChE 저해력과 살충력에 대해서는 약제에 따라서 각각 다르게 나타나므로 언급할 수 없다. 4. ChE 저력이 강한 약제는 살충력도 비례적으로 강하다고 할 수 없다. 그러나 화학 구조상 안정성이고 실용 농약인 Ethylparathion, Malathion, Let aycid, EPN, Sumithion 및 Diazinon 등에서 고찰할 때 반드시 비례적인 것은 아니나 어느 정도의 파행 관계가 있지 않은가 추찰된다.
최근 몇 년간 유기인 계열 독성물질이 민간인을 대상으로 사용되어 전 세계적으로 큰 위협이 되고 있다. 독성물질에 대한 예방이 불가능한 현 치료대책 대신, 보다 개선된 치료 대책으로서의 바이오스캐빈저에 대한 연구가 활발히 진행됐다. 바이오스캐빈저는 유기인 계열 독성물질이 인체 내 표적 기관에 도달하기 전, 독성물질 자체를 비활성 상태로 전환하거나 독성물질과 기질 간의 결합을 차단함으로써 중독을 예방하는 단백질 및 효소를 일컫는다. 특히 독성물질을 분해하는 과정에서 활성 상태를 유지함으로써 적은 양의 단백질로도 독성물질의 중독을 빠르게 치료하는 촉매성 바이오스캐빈저 개발에 많은 노력이 투여되어 왔다. 본 리뷰에서는 촉매성 바이오스캐빈저 개발을 위해 분자진화 및 단백질 공학 기술을 적용한 최신 연구들에 대해 소개하고, 끝으로 이러한 효소들을 임상적으로 승인된 약으로 개발하기 위해 남은 몇 가지 과제들을 간단히 제시할 것이다.
살충제와 농약의 성분인 유기인 화합물 측정을 위한 광섬유 바이오센서가 개발되었다. 개발된 광섬유 바이오센서에서는 유기인 화합물에 의해 직접적으로 저해되는 AChE효소 (acetylcholinesterase)의 반응이 용액 pH의 변화를 일으킨다는 원리를 이용하여 그 변화를 광을 이용하여 측정함으로써 유기인 화합물을 측정하였다. pH 변화 정도를 광을 이용하여 측정하기 위해서 사용되어진 효소의 반응과 광원에 알맞은 산-염기 지시약인 리트머스를 선택하였다. 장시간 사용 시에도 활성을 유지시키고 재사용을 가능하게 하기 위하여 AChE효소는 Ca-alginate gel에 포괄시켜 센서의 반응기 내벽에 고정화시켰다. 장치를 소형화하고 원격 측정이 가능하게 하기 위하여 광섬유를 사용하여 빛을 전송하였다. 광원으로써는 생성물의 영향을 받지 않는 632 nm의 파장을 갖는 He-Ne laser를 사용하였고, 광섬유는 가격이 저렴한 플라스틱 광섬유를 사용하였고, 광 수신 장치로는 phototransistor를 사용하였다. 본 연구에서 제안된 광섬유 바이오센서는 유기인 화합물의 농도에 대하여 0 ppm 에서 1.5 ppm까지 선형적인 신호를 가지고 있으며 측정 시간은 5분이었다.
Organophosphorous compounds can be reduced by zinc metal in acidic solution after alkaline hydrolysis. Although phosphates and phosphonates did not evolve any gas, dithioates did evolve hydrogen sulfide and phosphine, thionates and thiolates did evolve only hydrogen sulfide. The evolved gases were qualitatively detected by means of lead acetate and silver nitrate or mercuric bromide papers and determined by spectrophotometrically. The reduction mechanism and analytical method of dithioates were proposed.
Microbes have been used extensively in various fields of researches and industries but has not been used widely for microfluidic biosensor applications because it is difficult to immobilize properly to a small space. Therefore, we developed a microbial immobilization method for microfluidic devices using single-walled nanotubes and dielectrophoretic force. Single-walled nanotubes and Escherichia coli were aligned between two cantilever electrodes by a positive dielectrophoretic force resulting in a film of single-walled nanotubes with attached Escherichia coli. The optimal condition of film formation without a cell lysis was investigated. Diameter of single-walled nanotubes and electric field (intensity and duration of application) had an effect on the cell viability. On the other hand, the cell concentration of the suspension did not affect the cell viability. Paraoxon was detected using single-walled nanotubes film with attached Escherichia coli that expressed organophosphorus hydrolase. This film which is suspended from the substrate showed faster response time than sensors that are not suspended from the substrate.
7종의 monoterpene을 이용하여 phosphate, thiophosphate 및 carbamate를 합성하고, 이들 중 유기인계 화합물의 우리나라 주요 해충인 벼멸구(Nilaparvata lugens), 복숭아혹진딧물(Myzus persicae), 배추좀나방(Plutella xylostella), 담배거세미나방(Spodoptera liyura) 및 점박이응애(Tetraychus urticae)에 대한 살충효과를 조사하였다. 그 결과 500 mg/l 농도에서 carveol과 geraniol의 thiophosphate형은 벼멸구와 배추좀나방에 대하여 매우 좋은 살충효과를 보였는데 특히 carveol의 thiophosphate는 250 mg/l 농도에서도 벼멸구에 대한 살충력은 100%였다. 한편 menthol, thymol 및 borneol의 경우는 phosphate형이 thiophosphate형보다 벼멸구와 점박이응애에 대해 높은 효과가 있는 것으로 나타났다.
Mass spectral fragmentations of six chlorinated organophosphorus pesticides were investigated using electron impact mass spectrometry. Understanding the fragmentation pathways, based on the fragment ions of mass spectra, should be useful in the structural elucidation and chemical identification of these compounds. The pro-posed fragmentation pathways were verified by collision-induced dissociation B/E-linked scan spectra. ln most cases,the structures of characteristic fragment ions could be expected by the observation of the peak clusters due to 35Cl and 37Cl isotopes. According to substituted groups on phosphorus atom, phosphate and phospho-rothioate exhibited significantIy differentfragmentation patterns. Especially, phosphate and phosphorothioate with diethyl ester produced more diverse fragment ions than that with dimethyl ester.
The acute oral LD5O toxicity values of isazofos, pyraclofos, diazinon and methomyl were determined for Japanese quail based on OECD guideline. The $LD_{50}$ of isazofos, pyraclofos and diazinon was 16.26 mg/kg, and 7.11mg/kg body weight In female respectively. And the $LD_{50}$ of each chemical in male was 21.44, 35.64, 8.28 mg/kg body weight respectively. Diazinon was the most susceptible compounds to Japanese quail in both sexes. The $LD_{50}$ of methomyl was 21.24 mg/kg body weights in female, and 28.28 mg/kg body weight in male respectively. Diazinon, isazofos and methomyl were more toxic In the female than male. The symptoms of poisoning were similar in quails administrated with each chemicals. The clinical sign in Japanese quail were ataxia, salivation, diarrhea, ruffled feather and convulsion at dead point. There were severe hemorrhage and catarrhal inflammation from duodenum to ileum In all compounds. In Japanese quail treated with organophosphorus and carbamate compounds, brain acetylcholinesterase was inhibited by 88-96. The recovery was not observed after 5 h in sublethal dose.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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