Nine novel cyclodextrin glycosytransferase-producing bacteria were isolated from soil in a low acidic pH (3-4) medium at high temperature (45-60C). The isolated acidophilic bacteria were identified as Bacillus acidocaldarius. Highest yield of enzyme was obtained by using the following medium: 4% raw potato, 1% peptone, 0.1% yeast extract, 0.02% (NH4)2SO4, 0.05% MgSO4, 0.02% CaCl2, 0.3% KH2PO4. The crude enzyme showed a very broad pH-activity curve and had two optium pH ranges at 30 and 5.0-6.0. The crude enzyme was most active at 90C.
Transcriptome analysis revealed that the sinR gene encoding a transition-state regulator of Bacillus pumilus, genetically close to B. subtilis, was expressed at high levels during growth. The sinR gene is the second gene of the sinIR operon consisting of three promoters and two structural genes in B. subtilis. This study used the sinIR promoter of B. subtilis DB104 to construct a recombinant protein expression system. First, the expression ability depending on the number of sinIR promoter was investigated using enhanced green fluorescent protein (eGFP). The expression level of eGFP was slightly higher when using two promoters (Psin2) than using original promoters. The Psin2 promoter was further engineered by modifying the repressor binding site and -35 and -10 regions. Shine-Dalgarno (SD) sequence of the sinI gene was modified to the consensus sequence. Finally, combining the engineered Psin2 promoter with the modified SD sequence increased the expression level of eGFP by about 13.4-fold over the original promoter. Our results suggest that the optimized sinIR promoter could be used as a novel tool for recombinant protein expression in B. subtilis.
Proceedings of the Korean Society of Sericultural Science Conference
/
2003.10a
/
pp.114-115
/
2003
A Bacillus thuringiensis isolate, Bt 2385-1, which showed toxicity to lepidopteran, was isolated from Korean soil sample and characterized. PCR-RFLP showed that this isolate contains two novel cryl-type crystal protein genes. In this study, we designed cryl-type specific primer set (ATG1-F and N400-R) to clone the toxic domain of the all cryl-type genes. The two novel rlyl-type toxin genes in addition to crylJal gene were cloned and sequenced. (omitted)
A novel integrated method for increasing dissolved oxygen concentration in culture media has been developed. It involves adding hydrogen peroxide to the medium, which is then decomposed to oxygen and water by catalase and adding vegetable oil to the medium as antifoam agent and oxygen vector. A new apparatus for automated addition of hydrogen peroxide to the bioreactor to keep the dissolved oxygen concentration constant over the range $10-100%\;{\pm}\;5%$ was tested. A significant increase (over threefold) of cultivation time was obtained while the dissolved oxygen concentration remained stable ($30%\;{\pm}\;5%$). Therefore, use of corn oil mixed with Ca-stearate as oxygen vector and antifoam and hydrogen peroxide as oxygen source to control excessive foam that was generated by microorganism biosurfactant, GB16-BS produced at Bacillus sp. GB16 cultivation was appropriate for stable cultivation.
Proceedings of the Korean Society of Sericultural Science Conference
/
2003.04a
/
pp.72-72
/
2003
A new Bacillus thuringiensis strain (Kl), having high toxicities to Plutella xylostella and Spodoptera exigua was isolated from Korean soil sample. It was determined to belong to subsp. kurstaki (H3a3b3c) and produced bipyramidal inclusion. PCR-RFLP analysis showed that this isolate contains three novel cryl-type crystal protein genes in addition to crylAa and crylE genes. (omitted)
Proceedings of the Korean Society for Applied Microbiology Conference
/
2000.04a
/
pp.157-167
/
2000
A thermostable chitosanase gene from the isolated strain, Bacillus sp. CK4, was cloned, and its complete DNA sequence was determined. The thermostable chitosanase gene was composed of an 822-bp open reading frame which encodes a protein of 242 amino acids and a signal peptide corresponding to a 30 kDa enzyme in size. The deduced amino acid sequence of the chitosanase from Bacillus sp. CK4 exhibits 76.6%, 15.3%, and 14.2% similarities to those from Bacillus subtilis, Bacillus ehemensis, and Bacillus circulans, respectively. C-terminal homology analysis shows that Bacillus sp. CK4 belongs to the Cluster III group with Bacillus subtilis. The size of the gene was similar to that of a mesophile, Bacillus subtilis showing a higher preference for codons ending in G or C. The functional importance of a conserved region in a novel chitosanase from Bacillus sp. CK4 was investigated. Each of the three carboxylic amino acid residues were changed to E50D/Q, E62D/Q, and D66N/E by site-directed mutagenesis. The D66N/E mutants enzymes had remarkably decreased kinetic parameters such as $V_{max}$ and k$\sub$cat/, indicating that the Asp-66 residue was essential for catalysis. The thermostable chitosanase contains three cysteine residues at position 49, 72, and 211. Titration of the Cys residues with DTNB showed that none of them were involved in disulfide bond. The C49S and C72S mutant enzymes were as stable to thermal inactivation and denaturating agents as the wild-type enzyme. However the half-life of the C211S mutant enzyme was less than 60 min at 80$^{\circ}C$, while that of the wild type enzyme was about 90 min. Moreover, the residual activity of C211S was substantially decreased by 8 M urea, and fully lost catalytic activity by 40% ethanol. These results show that the substitution of Cys with Ser at position 211 seems to affect the conformational stability of the chitosanase.
Recently, the cardiovascular disease has been widely problematic in humans probably due to fibrin formation via the unbalanced Western style diet. Although direct (human plasmin) and indirect methods (plasminogen activators) have been available, bacterial enzyme methods have been studied because of their cheap and mass production. To detect a novel bacterial fibrinolytic enzyme, 111 bacterial strains with fibrinolytic activity were selected from kimchi. Among them, 14 strains were selected because of their stronger activity than 0.02 U of plasmin. Their 16S rRNA sequence analysis revealed that they belong to Bacillus, Leuconostoc, Propionibacterium, Weissella, Staphylococcus, and Bifidobacterium. The strain B. subtilis ZA400, with the highest fibrinolytic activity, was selected and the gene encoding fibrinolytic enzyme (bsfA) was cloned and expressed in the E. coli overexpression system. The purified enzyme was analyzed with SDS-PAGE, western blot, and MALDI-TOF analyses, showing to be 28.4 kDa. Subsequently, the BsfA was characterized to be stable under various stress conditions such as temperature (4-40oC), metal ions (Mn2+, Ca2+, K2+, and Mg2+), and inhibitors (EDTA and SDS), suggesting that BsfA could be a good candidate for development of a novel fibrinolytic enzyme for thrombosis treatment and may even be useful as a new bacterial starter for manufacturing functional fermented foods.
Park, Tae-Jung;Choi, Soo-Keun;Jung, Heung-Chae;Lee, Sang-Yup;Pan, Jae-Gu
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.19
no.5
/
pp.495-501
/
2009
A new spore display method is presented that enables recombinant proteins to be displayed on the surface of Bacillus spores via fusion with InhA, an exosporium component of Bacillus thuringiensis. The green fluorescent protein and $\beta$-galactosidase as model proteins were fused to the C-terminal region of InhA, respectively. The surface expression of the proteins on the spores was confirmed by flow cytometry, confocal laser scanning microscopy, measurement of the enzyme activity, and an immunogold electron microscopy analysis. InhA-mediated anchoring of foreign proteins in the exosporium of Bacillus spores can provide a new method of microbial display, thereby broadening the potential for novel applications of microbial display.
A Bacillus strain capable of producing an extracellular malto-oligosaccharides forming $\alpha $-amylase was isolated from soil and designated as Bacillus sp. SUH4-2. The enzyme was purified by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Toyopearl and Mono-Q HR 5/5 column chromatographies using a FPLC system. The specific activity of the enzyme was increased by 16.1-fold and the yield was 13.5%. The optimum temperature for the activity of $\alpha $-amylase was 60-65$\circ$C and more than 50% of initial activity was retained after the enzyme was incubated at 60$\circ$C for 40 min. The enzyme was stable over a broad pH range of 5.0-8.0 and the optimum pH was 5.0-6.0. The molecular weight of the enzyme was determined to be about 63.6 kD and isoelectric point was around 5.8. The enzyme activity was strongly inhibited by Mn$^{2+}$, Ni$^{2+}$, and Cu$^{2+}$ ; slightly by Ca$^{2+}$. The purified enzyme produced starch hydrolyzates containing mainly maltose and maltotriose from soluble starch. The starch hydrolyzates were composed of 11% glucose, 59% maltose, 25% maltotriose and 5% maltotetraose.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.