돼지에게 실험물질을 투여후 4주령과 3개월령에서 뽑은 혈액에서의 면역 증강력을 측정하기 위하여 우선 선행되어야 할 건강한 개체여부를 판단하기 위하여 혈액분석을 실시하였다. 그 결과에서는 의뢰한 개체군에서 유의적인 차이가 없었으며, 이 결과로부터 본 실험에서의 면역 증강 수치 결과가 질병에 의한 결과가 아닌 개체 자체의 면역 증강성이 높아져있음을 판단 할 수 있는 근거가 되었다. 생체에서의 면역성은 크게 세포성 면역과 체액성 면역으로 나눌 수 있는데 세포성 면역의 대표적인 사이토카인인 IFN-r를 측정한 결과, 4주령에서는 대조군과 비교하여 유의적인 증가를 나타내는 군이 DIR-vitamineral 0.2%군이었으며, 다른 군에서는 유의적인 변화를 나타내지 않았다. 3개월령에서는 대조군농도인 38.5와 비교하였을 때 임뮤포르테알파, DIR-vita 0.1%, DIR-vitamineral 0.2%에서 유의적인 증가가 나타나는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과로부터 DIR-vitamineral 0.2%는 4주령 및 3개월령에서 고른 면역 증강력을 확인 할 수 있었으며, 임뮤포르테알파, DIR-vita 0.1%는 3개월령에서 증강성이 확인된 결과를 나타내는 것으로 미루어보아 시간이 경과하면서 면역증강성을 나타내는것으로 사료된다. 또한, DIR-vita 0.2%의 경우에는 오히려 3개월령에서 면역 증강성에 있어서 유의적인 효능이 확인되지 않는 결과가 나타난것으로 미루어 그 적정농도를 DIR-vita 0.1%로 맞추는 것이 효과적일 것으로 판단된다. 한편, 체액성 면역에 있어서는 측정한 IgG, IgM, Total Ig모두에서 대조군과 비교하여 유의적인 변화를 나타내는 군은 관찰되지 않았다. 이러한 결과로부터 실험에 사용한 면역기능 증강물질들이 생체 내에서 면역방어기전을 세포성면역인 T 림파구와 관련하여 활성화되는 것을 알 수 있었으며, 실험에 사용된 물질 중 DIR-vitamineral 0.2%이 가장 효과적인 생체 내 면역기능 활성화를 나타내는 것으로 파악되었다. 실험에 사용된 물질 5가지의 생체내 면역기능활성화의 효과를 비교해 보면, 가장 효과적인 물질은 DIR-vitamineral 0.2%로 밝혀졌으며, 그 다음으로 DIR-vitamineral 0.1%, 임뮤포르테알파, DIR-vita 0.1% 순으로 효과적인 것으로 파악되었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때, 돼지에서 실험에 사용한 면역기능 신물질의 생체 면역증강 효과를 확인할 수 있었으며, 생산성 향상과 함께 세포성 면역증진에 따른 효과적인 질병방어기전 형성을 유도함이 인정되었다.
Objectives: This experimental study was carried out to prove the effect of Saenghyuldan(SHD; shengxiedan) on bone marrow failure induced by cyclophosphamide(CY) and irradiation in mice. Methods: The following were performed; immunopathology, histopathlogical findings of bone marrow and in the smear of myelocyte. hematopoietic cytokine(IL-3, GM-CSF, TPO), hematopoietic stem cell colony assay, humoral immunity(LPS mitogen response), cell-mediated immunity (Con A mitogen response) and nonspecific immunity(macrophage adherence & phagocytosis) in vitro or vivo. Results: SHD showed a protective effect on bone marrow failure induced by cyclophosphamide(CY) and irradiation in mice. SHD increased lymphoproliferative responses to LPS and Con A, and activated macrophage adherence and phagocytosis to SRBC. Conclusions: We expect that SHD can be used to treat bone marrow failure and immune suppression induced by the chemotherapy or radiation.
본 연구에서는 마늘 추출물과 착즙액이 넙치의 비특이적 면역력에 미치는 영향과 투여 방법에 따른 효과를 밝히고자 하였다. 마늘 추출물의 투여는 복강 주사법을, 마늘 착즙액은 침지법을 사용하였다. 마늘 착즙액 침지법은 일정 농도의 착즙액을 해수에 현탁하여 2일 간격으로 3회 침지하였다. 병원균의 공격 시험은 시험어에 마늘 추출물의 일정량을 2일 간격으로 3회 주사한 지2일 후에 실시하였다. 그 결과, 마늘 추출물의 복강 주사 시험구 중 5% 투여구에서 lysozyme의 활성이 가장 유의적인 증가를 나타내었다. 호중구의 수는 1, 5 및 10%를 주사하였을 때 유의적인 증가를 보였다 (p<0.05). SOD activity는 신장에서는 1, 3 및 5% 시험구에서, 간에서는 1 및 5% 시험구가 대조구에 비해 유의적인 증가를 나타내었다 (p<0.05). NBT 환원 시험은 3 및 5% 시험구에서 높은 NBT 환원량을 나타내었다. 마늘 착즙액의 침지 시험에서는 0.25 g/L 시험구에서 체표 점액 lysozyme 활성과 혈청 lysozyme 활성이 가장 높은 유의적인 증가를 하였다. 림프구와 호중구의 수는 0.25, 0.5 및 1.0 g/L 시험구에서 대조구에 비해 유의적인 증가를 보였다 (p<0.05). SOD activity는 신장에서는 모든 시험구에서, 간에서는 0.1, 0.25 및 0.5 g/L 시험구에서 대조구에 비해 유의적인 증가를 나타내었다 (p<0.05). NBT 환원 시험은 0.1, 0.25 및 0.5% 시험구에서 대조구와 비교하여 유의적인 증가를 나타내었다 (p<0.05). 시험구의 생존율은 S. iniae BS10과 E. tarda KE-1의 공격에 대하여 5% 마늘 추출물 복강 투여와 0.25 g/L 마늘 착즙액 침지 시험구의 상대생존율이 가장 높았다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 마늘 추출물과 착즙액이 넙치에 면역능 향상과 어류 질병에 저항성 증강에 효과가 있는 것으로 사료된다.
An eight week feeding trial was conducted to investigate the effects of dietary supplementation of hizikia (Hizikia fusiformis) on growth performance, immune responses and resistance of juvenile olive flounder (Paralichthys olivaceus) to Streptococcus iniae. Four experimental diets (designated as Hiz 0, Hiz 2, Hiz 4 and Hiz 6) were formulated to be isonitrogenous (50% crude protein) and isocaloric (17.2 MJ/kg DM). Hizikia powder was added at 0%, 2%, 4% and 6% in diets Hiz 0, Hiz 2, Hiz 4 and Hiz 6, respectively. Three replicates of fish groups (15 fish/tank) were fed one of the experimental diets. At the end of feeding trial, no significant differences were observed in final body weight, specific growth rate, protein efficiency ratio, feed utilization and feed intake among fish groups fed the experimental diets. However, there was clear trend that the growth performances of fish were improved by the increment of dietary hizikia showing a positive growth effects. Mean phagocytes activated with nitro-blue-tetrazolium were significantly increased with the increment of dietary hizikia. The cumulative mortality was significantly (p<0.05) lower in the fish groups fed Hiz 6 diet (no mortality) than that in the other fish groups for 15 days of S. iniae challenge test. The findings of this study suggest that a dietary supplementation of hizikia could enhance the nonspecific immune response and improve the resistance of juvenile olive flounder to S. iniae.
We have previously shown that crude water extract of Euonymus alatus (EA) had strong prophylactic effect against chemically induced-and tumor cell implanted-cancer, and that the mechanisms responsible for its antitumor effects were due to nonspecific enhancement of the NK cell activities and the cell mediated immunity. However, it was unknown that any components of crude extract did work so, since it consisted of several components. In this paper, we fractionated the crude watar EA-extract into several fraction such as hexane-, ethylether-, ethyl acetate-, n-butanol- and water soluble-fraction, and screened the immune regulating activities of each fraction by the evaluation of lymphokine production and activated lymphocyte proliferation. As a result of the component fraction of EA-extract, it was found that n-butanol fraction was a potent immunostimulator, and the remained water soluble fraction also contained some stimulator, But, other fraction did not showed any remarkable effect. It is therefore suggested that EA-glycosides in n-butanol fraction may be new one of the potent biological response modifiers. The present study was also undertaken in an efforts to investigate the effects of elm-bark(EB, Ulmus clavidiana var japonica), which has been used for curing ulcer and inflammation as a folk medicine without any kind of experimental evidence to support this, on the cellular- and humoral-immune responses, lymphocyte function and NK cell activities in mice. Regardless of time and duration of EB-treatment, Arthus reaction and antibody response to SRBC were not modified by EB, but delayed hypersensitivity to SRBC was significantly enhanced only when EB was treated prior to SRBC-sensitization. EB slightly inhibited the proliferation responses of splenocytes to PHA-stimulation, but it significantly augmented the responses of these cells to S aureus Cowan 1 and Con A-activation, and these effects were manifested only when EB was added at culture initiation. EB did not influence Ig secretion of spleen cells but it significantly augmented the Con A-induced 1L 2 and MIF production of splenocytes. NK cell activities of splenocytes were markedly riled when effector cells were pretreated with EB and this augmentation was dine to the increase of binding affinity of effector cells to target cells and the target cell lytic activities of effector cells. These results led to the conclusion that EB triggers increase of cellular immune responses, such as delayed hypersensitivitiy, lymphokine production and NK cell activities. Also these results suggested that EB contains potent immune stimulants, which may provide the rational basis for their therapeutic use as one of the new biological response modifiers.
This study investigated the effects of vitamin E supplementation on immune responses and antioxidant status in healthy Korean old and young women. Blood samples were obtained from 15 healthy old women (over 60 years old) and from 15 healthy young women(20 years old) before and 4 weeks after vitamin E( tocopherol acetate) supplementation(400IU/day). Daily nutrient intakes were calculated, and plasma vitamin E concentration, numbers and percentages of white blood cell and their subpopulation, percentages of lymphocytes and subpopulation, NK cell percentages, plasma immunoglobulin A, G, M and C3 concentration, proliferation of PMN with mitogen were measured. Also plasma TBARS concentration and radical scavenger activity of erythrocytes were investigated. Plasma vitamin E concentrations were significantly increased after supplementation in both groups. In elderly women, vitamin E supplementation restored the per centages of neutrophils, lymphocytes, and eosinophils which had been out of normal ranges before supple mentation. And after vitamin E supplementation, helper T cell percentages significantly increased in elderly. Plasma immunoglobulin and complement C3 concentrations were not affected by vitamin E supplementation in both groups. PMN proliferations with mitogen were significantly lower in old women than in young women, and there was no effect of vitamin E supplementation. Vitamin E supplementation significantly decreased plasma TBARS concentrations in old and young women. RSA of erythrocytes was increased in both groups, but the statistical significant was only found in young women group. Therefore, these results suggest that the moderate vitamin E supplementation in old women improves immune responses, especially nonspecific immunity and cell mediated immunity, via protection of oxidant stress.
The CMV promoter driven lacZ reporter gene (pcDNA-lacZ) was constructed and used for DNA immunization study. The expression of the lacZ gene was confirmed in vitro using RTG-2 cell line before using for in vivo study in olive flounder (Paralichthys olivaceus). In the dose response study, the maximum expression of the lacZ gene was found in the group injected with 5 ${\mu} g$ of the plasmid DNA. Kinetic study showed a significantly increased expression of $\beta-galactosidase$ gene at 7 days after injection. Effects of DNA vaccine on specific and nonspecific immune responses such as antibody and NO production were studied and the significant effect was found in olive flounder injected with 10 and 15 ${\mu} g$ DNA (sub optimal dose for lacZ gene expression). Two pro inflammatory cytokine genes, $IL-l\beta$ and $TNF-\alpha$, were also found to be up regulated in the muscle injected with the plasmid, suggesting an induction of local inflammatory response.
Plasma protein which has been known as one of nonspecific immunostimulators was added to feedstuff to examine its effect on the enhancement of cellular immune response in porcine immune system. A total of 40 piglets, 20 male and 20 female each, were fed for 30 days with or without plasma protein. The peripheral blood were collected and analyzed for the investigation of leukocyte subpopulations and their activities by using a panel of monoclonal antibodies specific to porcine leukocyte differentiation antigens and flow cytometry. The results obtained as follows. 1. Subpopulations expressing major histocompatibility complex(MHC) class I antigen were $96.2{\pm}3.1%$ and $86.6{\pm}3.8%$ in piglets fed with plasma protein and in piglets fed without plasma protein, respectively. 2. Proportion of leukocyte subpopulation expressing MHC class II antigens were significantly higher in the piglets fed with plasma protein than ones without plasma protein. The proportion was $27.6{\pm}3.6%$ and $16.6{\pm}2.2%$ in MHC class II DQ antigen, and $28.1{\pm}2.0%$ and $20.0{\pm}0.3%$ in MHC class II DR antigen, respectively. 3. A significant increase in the proportion of cells expressing poCD2 was not found in piglets fed plasma protein. 4. Proportion of subpopulation expressed porcine(Po) CD4 antigens which specific to helper T lymphocytes were not increased (18.3-19.1% vs. 25.6-28.8%), rather slightly decreased, in plasma protein-treated group. 5. The most important increase of proportion in plasma protein-treated group was the leukocyte subpopulation specific to $poCD8^+$ T cytotoxic/suppressor lymphocytes. The expression level was significantly higher up to 45.9-47.1% in plasma protein-treated group in comparing with 29.7-33.0% in non-plasma protein-treated group. 6. Lymphoblastogenetic responses using different concentrations of Con A mitogen and plasma protein has found that the responses of lymphocyte from piglets fed plasma protein was significantly activated (p<0.01). The activities measured by 3[H]-thymidine incorporation showed 3-6 times stronger in plasma protein-treated group than those in non-plasma protein-treated group. The study has concluded that plasma protein, which has known as a nonspecific immunostimulator, may have an immunoenhancing activities in porcine lymphoid system by increase the activated cell proportions and their blastogenetic properties which is critical to host immune responses.
The effects of dietary yeast β-glucan administration on growth, nonspecific immune responses, serum lysozyme, skin mucous lysozyme, NBT (nitroblue tetrazolium) reduction by phagocytes, and disease resistance against Edwardsiella tarda in Japanese eel, Anguilla japonica were evaluated. Fish were fed the diets supplemented with 0%, 0.1% and 0.5% of yeast β-glucan to a commercial diet for 6 weeks. The body weight gain from the fish fed on the 0.5% supplemented diet for 6 weeks was significantly higher than the control. Both serum and skin mucous lysozyme were significantly higher in the all experimental groups except 2 weeks of 0.5% group. The bactericidal activity of serum was slightly increased at 6 weeks. Also, The intracellular superoxide anion production of kidney phagocytes was significantly higher in the all experimental groups. The diet supplemented with 0.1% were also found to raise the relative percent survival (RPS) of Japanese eel after an artificial challenge with 1×107 cells of Edwardsiella tarda per fish. The results suggested the potential of yeast β-glucan to activate some innate immune responses and to improve the growth in Japanese eel.
본 연구에서는 마늘 착즙액이 어병세균으로 질병에 인위 감염시킨 넙치의 비특이적 면역 반응에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 건강한 넙치를 어류 병원성 세균인 Streptococcus iniae BS10과 Edwardsiella tarda KE-1으로 공격 주사한 후 1일 뒤에 마늘 착즙액을 0.25, 0.5 및 1.0 g/L의 농도로 해수에 현탁하여 2일 간격으로 3회 침지하였다. 공격 주사한 넙치의 면역 반응을 알아보기 위해 체표 점액 lysozyme의 활성, 조직 내 균수의 변화, 혈액 내 세포수의 변화, SOD 활성 및 생존율을 조사하였다. 그 결과, S. iniae BS10으로 공격 주사 후 0.25와 0.5 g/L의 침지 시험구에서 대조구에 비해 lysozyme의 활성이 유의적인 증가를 나타내었고, E. tarda KE-1으로 공격 주사 후 모든 침지 시험구에서 대조구에 비해 lysozyme의 활성이 유의적인 증가를 나타내었다. 조직 내 균수에 있어서는 모든 시험구에서 유의적인 감소를 나타내었다. 혈액 내 세포 수의 변화를 관찰한 결과, S. iniae BS10으로 공격 주사 후 마늘 착즙액 0.25와 0.5 g/L의 침지 시험구에서 림프구와 호중구의 유의적인 증가와 함께 모든 시험구에서 호중구의 유의적인 증가가 나타났다. E. tarda KE-1으로 공격 주사 후 0.25와 1.0 g/L의 침지 시험구에서 림프구의 유의적인 증가, E. tarda KE-1으로 공격 주사 후 마늘 착즙액 0.25와 1.0 g/L의 침지 시험구에서 림프구의 유의적인 증가와 함께 모든 시험구에서 호중구의 유의적인 증가가 나타났다. 침지 시험구 시험어의 혈액, 신장 및 간에서 SOD 활성을 측정한 결과, S. iniae BS10으로 공격 주사 후 침지 시험구에서 혈액과 신장에서 유의적인 증가가 나타났고, E. tarda KE-1으로 공격 주사 후 침지 시험구에서 신장과 간에서 유의적인 증가가 나타났다. 생존율 시험 결과, S. iniae BS10와 E. tarda KE-1으로 공격 주사 후 0.25 g/L 침지 시험구에서 모두 58% 의 상대생존율을 나타내어 마늘 착즙액 침지가 넙치의 방어능에 기여하는 것으로 나타났다. 이상의 결과로 마늘 착즙액의 유효 성분이 건강한 넙치뿐만 아니라 질병에 걸린 넙치에 대해서도 면역증강제로서의 효과가 있을 것으로 사료되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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