The present experiment was done to identify newcastle disease virus(NDV) antigens in frozen sections of various oragns from experimentally NDV-infected with indirect immunoperoxidase method. Section were incubated with rabbit anti-NDV polyclonal as first antibody, followed by incubation with goat anti-rabbit or protein A peroxidase conjugate. Positive reactions were often detected in the epithelium of trachea and in the lymphocyte of spleen at 24 hours after virus inoculation. the viral antigen was localized mainly in the cytoplasm of infected cells. The method approved to be highly specific for the identification of NDV and allowed a precise localization of the viral antigens in infected cells.
Mo, Jongseo;Angelichio, Michael;Gow, Lisa;Leathers, Valerie;Jackwood, Mark W.
Journal of Veterinary Science
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제23권2호
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pp.21.1-21.7
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2022
Newcastle disease (ND), infectious laryngotracheitis (ILT) and avian metapneumovirus (aMPV) can be similar making it critical to quickly differentiate them. Herein, we adapted pre-existing molecular-based diagnostic assays for NDV and ILTV, and developed new assays for aMPV A and B, for use under synchronized thermocycling conditions. All assays performed equivalently with linearity over a 5 log10 dynamic range, a reproducible (R2 > 0.99) limit of detection of ≥ 10 target copies, and amplification efficiencies between 86.8%-98.2%. Using biological specimens for NDV and ILTV showed 100% specificity. Identical amplification conditions will simplify procedures for detection in diagnostic laboratories.
몽골 산란계 농장에서 발생한 뉴캣슬병 사례로부터 뉴캣슬병 바이러스를 분리하고 그 특성을 조사하였다. 그 결과, 발생 농장 산란계 폐사계의 뇌 및 폐 조직으로부터 뉴캣슬병 바이러스 MN1/10 주가 분리되었다. 이 바이러스는 F 단백질 분절 부위가 특징적인 병원성 motif(RRQKRF)를 가지고 있었으며 종란 평균 치사 지수(MDT)가 54.7시간으로 강독형 NDV이었다. 또한 발생 농장 내 생존하고 있는 산란계에서 고역가의 NDV 특이항체가 검출되었다. 유적학적 계통 분석을 실시한 결과, 몽골 분리주는 Class II에 속하는 genotype VIId 바이러스로 확인되었다. 유전학적 계통 분석 결과, 몽골 분리주는 몽골과 인접한 중국에서 유행하는 바이러스 그룹(CN2)에 속하는 것으로 분류되었다. 우리의 연구 결과는 몽골에서의 뉴캣슬병 최초 발생은 동북아시아 지역에서 유행하는 강독형 NDV의 유입에 의해서 이루어졌음을 말해 준다.
There are several immunosuppressive viral diseases in chickens such as avian adenovirus (AAV), chicken anemia virus (CAV), infectious bursal disease (IBD) and Marek's disease (MD). In this study, we have investigated two broiler chicken farms suffered from high mortality in Jeonbuk in July to August 2009. Clinically high fever and growth retardation were observed in the diseased chicken. In necropsy, the hemorrhages in thigh leg and thymus, hemorrhages and enlargement of liver, kidney and proventriculus, and yellowish fluid in heart were seen. Histologically, necrotic foci and basophilic intranuclear inclusion bodies of hepatocytes, hemorrhages and infiltrated lymphocytes in kidney and proventriculus were observed. By using polymerase chain reaction (PCR), the genes of avian adenovirus, CAV and ND virus were detected in specimens. We suggested that these coinfection cases with high mortality were due to primarily infection of immunosuppressive diseases such as avian adenovirus, CAV, followed by secondary infection of Newcastle disease (ND) virus.
The present experiment was carried out to study the pathogenesis of Newcastle disease(ND), ND virus (NDV) antigens and genes in various organs from NDV inoculated chickens were detected by immunohistochemistry and RT-PCR. Immunohistochemically, NDV antigens were detected in the spleen, thymus, cecal tonsil, proventriculus, trachea and lungs at 12 hour post-inoculation (hpi). Viral antigens were localized mainly in the cytoplasm of lymphocytes and macrophages. After 48 hpi, clinical findings of the affected chickens were open-mouth breathing, conjunctivitis, watery diarrhea and edema around the eye and neck. After 72 hpi, chickens showed muscular tremor, paralysis of the legs and wings, and coma. Histopathological results consist of multi-focal necrosis with hemorrhages in lymphoid aggregates of the intestinal tracts, necrosis of the lymphoid tissues, neuronal degeneration and necrosis, and perivascular cuffing. Using RT-PCR, virus genes were detected in the spleen and proventriculus at 48 hpi, and in the brain at 60 hpi.
The gene encoding F protein of CBP-1 strain, a heat-stable Newcastle disease virus (NDV) isolated from the diseased pheasants in Korea, was characterized by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), nucleotide and amino acid sequences. Virus RNA was prepared from the chorioallatoic fluid infected with NDV CBP-1 virus and cDNA was amplified by RT-PCR, cloned and sequenced to analyze. The PCR was sensitive as to detect the virus titer above $2^5$ hemagglutination unit. 1.7kb (1,707bp) size of the cDNA was amplified and cloned into BamHI site of pVL1393 Baculo transfer vector. The nucleotide sequences for F protein were determined by dye terminator cyclic sequencing using four pairs of primers, and 553 amino acid sequences were predicted. In comparison of the nucleotide sequence of F gene of CBP-1 with those of other NDV strains, the homology revealed 88.8%, 98.5% and 98.7% with Kyojungwon (KJW), Texas GB and Beaudette C strains, respectively. As the deduced 553 amino acid sequences of F protein of CBP-1 were compared with those of other NDV strains, the homology appeared 89.9%, 98.7% and 98.9% with KJW, Texas GB and Beaudette C strains, respectively. The putative protease cleavage site (112-116) was R-R-Q-K-R, indicating that CBP-1 strain is velogenic type. The amino acid sequences include 6 sites of N-asparagine-linked glycosylation and 13 cysteine residues. These data indicate that the genotype of CBP-1 strain is more closely associated with the strains of Texas GB and Beaudette C than KJW strain.
This Study was conducted to determine vaccination programs for the control of Newcastle Disease(ND) in chickens and investigate protective effect against Newcastle disease virus (NDV) after live ND vaccination. Maternal HI antibody titer level of chickens according to day(age) 1, 7, 14, 21, 28 and 35 were decreased gradually as 7.10$\pm$0.74, 6.57$\pm$0.74, 3.71$\pm$1.25, 2.20$\pm$1.03, 1.20$\pm$1.23 and 0.50$\pm$0.71. As a result of HI test and ELISA, both chickens vaccinated with VG/GA strain live vaccine at 1-day-old and chickens not vaccinated do not have antibody titer for protection against NDV at 14-day-old. Except for LaSota strain vaccine, in case of vaccination with VG/GA spray and VG/GA, B1 and LaSota strain drinking water at 14-day-old, the protective effect was 100% in chickens inoculated NDV($10^{7.2}$$EID_{50}$/50${\mu}\ell$, eye drop) at 21-day-old, but not 10~50% at 28-day-old. These data suggest that live NDV vaccination should be given at 10-day-old 20-25day-old for protect against NDV at periodic outbreaks of ND caused by velogenic viscerotropic NDV in the environment of a farm.
NLP Indi Dharmayanti;Diana Nurjanah;Harimurti Nuradji;Teguh Suyatno;Risa Indriani
Journal of Veterinary Science
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제25권1호
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pp.3.1-3.20
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2024
The Newcastle disease virus (NDV) outbreak was first reported in Java Island, Indonesia, in 1926, which was then reported further in Newcastle-upon-Tyne, England. Nevertheless, the NDV is still endemic in Indonesia, with outbreaks occurring in free-range and commercial chicken farms. The dynamic evolution of the NDV has led to the further development of vaccines and diagnostic tools for more effective control of this virus. This paper discusses the history of the NDV occurrence, vaccines, the development of diagnostic tools, and the epidemiological condition of the NDV in Indonesia. Indonesia, which has the largest poultry population in the world after China, has challenges in preventing and controlling this virus that causes economic losses to the farmers and has an impact on the welfare of the poultry farming community in Indonesia.
A method for the rapid detection and quantification of Newcastle disease virus (NDV) produced in an animal cell culture-based production system was developed to enhance the speed of the NDV vaccine manufacturing process. A SYBR Green I-based real-time RT-PCR was designed with a conventional, inexpensive RT-PCR kit targeting the F gene of the NDV LaSota strain. The method developed in this study was validated for specificity, accuracy, precision, linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), and robustness. The validation results satisfied the predetermined acceptance criteria. The validated method was used to quantify virus samples produced in an animal cell culture-based production system. The method was able to quantify the NDV samples from mid- or late-production phases, but not effective on samples from the early-production phase. For comparison with other quantifiable methods, immunoblotting, plaque assay, and tissue culture infectious dose 50 ($TCID_{50}$) assay were also performed with the NDV samples. The results demonstrated that the real-time RT-PCR method is suitable for the rapid quantification of virus particles produced in an animal cell-culture-based production system irrespective of viral infectivity.
Newcastle disease (ND) is acute respiratory disease with high mortality in chicken and pet birds. Two ostriches aged on 51 days old submitted had showed clinical signs of severe torticolis and poor locomotion. In gross, fibrinous air-sacculitis and hemorrhagic enteritis were present. The significant lesions were histopathologically lymphocytic encephalitis such as perivascular cuffings and gliosis in neuropil. The velogenic ND virus was isolated ftom 10 day-old embryonated eggs inoculated with hemogenized cecal tonsils. These results suggest that NO occurred in the ostrich in Korea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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