• 한국미생물·생명공학회지
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• 제6권2호
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• pp.59-63
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• 1978

토양에서 분리 곰팡이 361균주, 부패된 귤에서 균주한 곰팡이 27균주와 보존균주 59균주 계 447균주중 naringinase를 생산하는 균주 98균주를 분리하고 그 중 활성이 높은 Aspergillus nidulans를 선정하여 이의 효소 생산시 배양조건에 대하여 연구한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 즉 밀기울과 물을 10 : 9의 비율로 섞은 밀기울 배지에 균을 접종한 후 3$0^{\circ}C$에서 3일이상 배양 하였을 때 높은 활성을 나타내었으며, (NH$_4$)$_2$ SO$_4$ 0.2%, naringin 2%, CaCO$_3$ 0.2%를 배지에 첨가하였을 때 naringinase 의 활성은 증가하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제7권3호
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• pp.141-147
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• 1979

Aspergillus nidulans가 생산하는 naringinase를 DEAE-Sephadex A-25를 사용하여 이온결합법으로 고정화시키는 조건과 그 고정화효소의 성질 및 column reactor 에서의 연속 반응에 대하여 연구 검토한 것을 요약하면 다음과 같다. 고정화 효소를 조제할 때에 효소가 담체에 흡착되는 최적 pH는 6.0이었고 건조된 담체 1g에 대해 이상적인 수용성 효소의 량은 110 units이였다. 고정화 naringinase의 반응 최적 온도와 pH 는 각각 5$0^{\circ}C$와 7.0이며, 그 pH 안정성과 열 안정성은 수용성 효소보다 모두 높았다. 고정화 naringinase의 활성화 에너지는 Arrhenius plot에 의해 7.96kca1/mo1e이었고 겉보기 Km 값은 5.88$\times$$10^{-4}$M 이었다. 고정화 naringinase를 column 내에서 연속 반응시킬 때 Bar-Eli등의 Michaelis-Menten식의 적분형을 변형하여 유속과 가수분해도의 관계를 검토한 결과, 유속이 증가하면 가수분해도가 감소되었고 동시에 겉보기 Km값도 감소하였다. 또한 반응량 (colum reaction capacity)은 유속이 증가함에 따라서 서서히 감소하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제2권2호
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• pp.111-117
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• 1974

\circled1 분리선별한 Naringinase 생산균인 S-1 SP, 은 Aspergillus niger 이었다. \circled2 Naringinase중 정제된 naringin 용해화 효소를 aceton과 ammonium sulfate에 의해 결정화하였다. \circled3 Naringin용해화 효소와 naringenin 생성효소가 DEAE-sephadex A-50 column chromatography에 의해 분리되었다. \circled4 Naringin 용해화 효소에 의해 분해된 물질이 Thin layer chromatography에의해 확인되었으며 이물질은 ethylacetate 추출법에 의해 naringin분리 정량이 가능하였다. \circled5 Crude naringinase를 여름밀감 과즙과 병조림 탈고미에 이용하여 ethylacetate 추출법에 의해 naringin을 정량하고 식미시험 결과와 비교하였다. 본 연구에 많은 조언을 해 주신 경북대학교 농화학과 서정훈 박사님께 감사를 드립니다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제11권1호
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• pp.53-56
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• 2004

유자의 부위별 narinign 및 hesperidin의 함량은 과피가 95.54 mg%, 103.99 mg%, 과육이 65.77 mg%, 77.18 mg%, 씨에는 16.49 mg%, 15.88 mg% 순으로 검출되었다 유자에서 고미의 원인 물질인 naringin을 제거하기 위한 naringinase 최적 첨가량을 검토한 결과, naringinase 20 units 첨가구의 경우 90분 경과후 대부분 분해되었다. 표준시약으로 naringin 10 mg%와 hesperidin 5 mg%의 기질에 naringinase 10.0 units와 hesperidinase 2.0 units를 각각 첨가하여 측정한 결과 0.11 mg%와 0.45 mg%로 감소하였고, naringinase 1% 처리구에서 0.54 mg% 와 0.09 mg% 감소하였으며, 탁주용 당화효소 5% 처리구에서는 0.26 mg%, 0.04 mg%로 감소하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제13권3호
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• pp.237-242
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• 1970

밀감류 등의 고미 성분의 일종인 Naringin을 분해하는 효소를 생성하는 사상균을 분리 선별하여 실용화에 알맞는 S-1 균주 효소 Naringinase의 몇가지 효소학적 성질을 검토한 결과는 다음과 같다. 1. Naringinase S-1은 Pectinase의 생성이 비교적 약하였으며 최적 활성 pH의 범위는 pH $3.0{\sim}5.0$사이었다. 2. Naringinase의 생성은 배지에 Naringin첨가에 의하여 많이 증가되었다. 3. 적당한 효소농도 이상에서는 Naringin의 분해는 0.1% 기질 농도에서는 80% 까지는 거의 직선적이었으며 고농도의 기질농도에서는 활성도가 낮았다. 4. 최적 활성 pH는 $50^{\circ}C$이었으며 열안정성은 $50^{\circ}C$에서 2시간 열처리에 의하여서는 별 역가의 감소가 없었으나 60.C에서 30분에 40% $70^{\circ}C$에서 10분만에 70%의 불활성화를 나타내었다. 5. Glucose는 효소작용에 있어 경쟁적으로 저해하였으며 저해정수는 1.5 Mol이었고 Sucrose에 의한 저해는 l Mol 농도에서 56%의 저해를 가져왔다.

• 한국식품과학회지
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• 제10권2호
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• pp.209-214
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• 1978

Aspergillus nidulans가 생산하는 naringinase의 acrylamide gel을 이용한 고정화(固定化)의 조건과 고정화효소의 성질 및 column reactor의 반응조건을 연구 검토하였는 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 고정화효소를 제조하는데 acrylamide의 농도는 10%가 적합하였으며, N.N'-methylene bis acrylamide의 농도는 0.5%이상에서 영향이 없었다. 이 조건에서 효소농도는 126 unit/ml가 적합하였다. 2. 고정화효소의 최적반응 pH는 5.0으로서 수용성 효소와 동일하였으며, 최적반응온도는 $50^{\circ}C$로서 수용성 효소에 비해 $10^{\circ}C$상승하였다. 3. Naringinase는 acrylamide gel에 고정시키므로서 pH안정성과 열안정성은 현저히 향상되었다. 4. 고정화효소의 활성화에너지는 수용성 효소보다 약 1/2적은 13.01 kcal/mole이였으며, apparent Km값은 $7.23{\times}10^{-3}$ mole이였다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1978년도 춘계학술대회
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• pp.96.2-96
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• 1978

Commerial naringinase from Aspergillus niger was partially purified by various methods, and was immobilized to porous alkylamine silica of 30~40 mesh and 400 $\AA\pm10％$ pore diameter that had been activated with 2.5％ glutaraldehyde. About 50~70％ of initial naringinase activity was recovered after the immobilization process. Some enzymatic properties of the immobilized naringinase was investigated and compared with those of the native enzyme. The optimal temper-ature had moved from $40^{\circ}C$ to $55^{\circ}C$ and the heat stability of the immobilized enzyme was better than that of the native naringinase. But no signi-ficant diference in the pH effect on activity was detected. The activation energy of reaction, Ea, was markedly decreased from 14.9 to 8.64 (Kcal/mole) by immobilization.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제6권2호
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• pp.65-73
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• 1978

Aspergillus nidulans로부터 추출한 naringinase를 정제하여 물리화학적 성질을 검토하였다. 1) 효소는 유안침전, DEAE-Sephadex A-25, Sephadex G-100 column chromatography를 사용하여 정제하였으며 정제결과 두 개의 fraction이 나타남을 발견하였고 Fraction I의 비활상 조효소의 781배 종가함을 나타내었다. 2) 효소의 반응 최적 pH와 온도는 위의 두 fraction에서 같은 결과를 나타내었다. 최적 pH는 5.0 이었으며 최적온도는 4$0^{\circ}C$이었다. 3) 조효소액, Fraction I 및 Fraction II의 분해생물은 paper chromatography를 통해 조사한 결과 naringenin, glucose및 rhamnose 임이 밝혀졌다. 4) Andrew의 gel filtration 법에 의한 분자량을 측정한 결과 Fraction I은 약 78,000, Fraction II 는 약 26,000으로 추정되었다. 5) 효소의 안정성에 미치는 pH의 영향은 pH 5.2에서 15분간 처리로 6$0^{\circ}C$에서 50%가 실활되었으며 7$0^{\circ}C$에서는 거의 다 실화되었다. 6) 효소반응에 미치는 금속이온의 영향은 Fe$^{2+}$ 가 약간의 활성을 조해하였을 뿐 별로 영향이 없었다. 7) 효소의 기질에 대한 친화성에서 Km 값이 2.3X$10^{-6}$ g/ml 로 추정되었다

• 한국식품과학회지
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• 제5권2호
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• pp.78-83
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• 1973

선별된 Aspergillus 속의 한 균주인 S-1의 조(粗) naringin 분해효소의 정제에 관하여 검토한 결과 정제도의 관점에서 Sephadex G-200, starch gel electrophoresis, DEAE-Cellulose column chromatogram, 황산암모늄분획의 순위로 좋았으며 각 정제법에 따른 결과는 다음과 같다. 1) 조효소(粗酵素)를 starch gel electrophoresis 한 결과 단백 mg 당 naringinase 활성이 1,000 unit 로 정제되었다. 2. 단백 mg 당 0.37 unit, naringinase 활성인 조효소(粗酵素)를 황산암모늄분획한 결과 0.25포화 이하에서는 protein per mg 3 unit, 0.75포화 이하에서는 12 unit, 075포화 이상 완전포화 fraction 에서는 34 unit 로 정제되었으며 회수율로 볼때는 황산암모늄 0.75포화 이하에서 가장 좋았다. 3. Sephadex G-200에 의해 정제한 결과 protein per mg 1,337 unit 였으며 DEAE-Cellulose column chromatography 한 결과는 430 unit per protein mg 으로 정제되었다. 4. DEAE-Cellulose column chromatography 후 sephadex G-200에 의해 정제한 결과는 여지전기영동에 의해 단일 단백으로 나타났으며 이 단일 단백은 naringin 을 purunin 까지만 분해하였다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1978년도 추계학술대회
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• pp.210.1-210
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• 1978

Aspergillus nidulans가 생산하는 naringinase를 ionic binding method 로써 DEAE-Sephadex A-25 를 사용하여 고정화시키는 조건과 그 고정화 효소의 성질에 대하여 검토하였다. 먼저 담체에 흡착되는 효소의 최적 pH는 6.0이었고 조제효소 110units 당 이상적인 담체량은 건조된 담체 1g이었다. 고정화 naringinase의 반응 최적 pH와 온도는 7.0과 5$0^{\circ}C$로서 native enzyme 보다 각각 높았다. 다음은 고정화 효소의 안정성에 미치는 pH와 온도의 영향으로서, pH 5에서 중성의 pH까지는 안정하였고 온도는 5$0^{\circ}C$까지는 안정하였으나 6$0^{\circ}C$ 이상에서는 뚜렷한 activity의 감소를 보였다.