Full length complementary DNA encoding apolipoprotein A-I (apoA-I) was isolated and characterized in mud loach (Misgurnus mizolepis). Mud loach apoA-I cDNA encoding 24 bp of 5'-untranslated region (UTR), 762 bp of single open reading frame (ORF) consists of 254 amino acids and 293 bp of 3'-UTR excluding stop codon and poly (A+) tail. Two overlapping polyadenylation signals (AATAAAATAAA) was found 9 bp prior to the poly (A+) tail. Mud loach apoA-I represented considerable homology to those from other teleost species at amino acid level with conserving common features of vertebrate apoA-I. Molecular phylogenetic analysis inferred the phylogenetic hypothesis that was generally in accordance with the previous taxonomic relationship. Apolipoprotein A-I mRNA was detected in various tissues, but the mRNA levels were quite varied depending on tissues based on semi-quantitative RT-PCR. Liver and brain showed the significantly higher levels of apoA-I transcripts than other tissues. mRNA expression of apoA-I was quite low in very early stage of embryonic development, however dramatically enhanced from 8 hours post fertilization. This increased mRNA level was retained consistently up to 14 days post hatching.
Diploid and triploid hybrid between female mud loach Misgurnus mizolepis and male cyprinid loach, M. andguillicaudatus were produced, using artificial propagation. The influence of hybridization and triploidization on characteristics of the some tissues of retina optic tectum and trunk kidney in loach was determined histologically. Diploid hybrid have almost size similarities in nucleus and the cell size of some tissues to both parents. In the triploid hybrid the nucleus and/or the cell size in erythrocyte, horizontal cell in inner nuclear layer of retina ganglion cell in ganglion cell layer of retina, neuronal cell in granular layer of optic tectum, and secondary proximal tubule cell of trunk kidney, are much larger than those of the corresponding cells in the diploid hybrid individuals. However, triploid hybrid showed fewer number of cells in outer nuclear layer in retina and nuclei in secondary proximal tubule of trunk kidney than in diploid hybrid. Results of this study suggest that some characteristics in the triploid hybrid exhibiting larger cell and nucleus size with fewer number of cell than diploid hybrid can be useful criteria for the distinction between diploid hybrid and triploid hybrid, and the ploidy level in loach.
The skin structure of Misgurnus mizolepis was studied based on the microanatomical investigation of skin fragments taken from four regions. The epidermis was distinguished by two types of skin glands, a small mucous cell and a large club cell. The mucous cell was acid sulfomucins (some sialomucins) but the club cell did not give any histochemical tests for mucosubstances. The presence of a well defined lymphatic system with small lymphocytes was established in the stratum germinativum layer of the epidermis. A large number of blood capillaries run very close to each other just below the basement membrane, and a definite area giving AB and PAS positive was present between the basement membrane and scale. These structural features of skin in M. mizolepis seem to be closely related with cutaneous respiration.
Mass mortality occurred in mud loaches, Misgurnus mizolepis, cultured in ponds located in Kunsan. External signs of affected fish showed hemorrhage of skin and fins, Internally, pale liver with congestion, enlarged kidney, and spleen and enteritis exhibited. Causative bacteria isolated from liver, spleen, and kidney of the disease fish. In biochemical tests, the isolates were similar with those of the reference strains, A. sobria. The aerolysine gene from the present isolate was amplified PCR with the primer SOBF and SOBB for A. sobria. The isolate was identified as A. sobria on the basis of those tests. In virulence test, the present isolate resulted in the development of clinical signs identical to those in naturally infected fish. The present results conclude that the present isolate is A. sobria and can be a pathogen which causes motile aeromonad septicemia to mud loach.
Transcriptional response patterns of mud loach (Misgurnus mizolepis; Cypriniformes) hepcidin, a potential ortholog to human hamp1, in response to experimental challenges with non-pathogenic and pathogenic bacterial species were analyzed based on the semi-quantitative reverse transcription-PCR assay. Mud loach hepcidin transcripts were much more preferentially induced by pathogenic bacterial species (Edwardsiella tarda and Vibrio anguillarum) causing apparent pathological symptoms than by non-pathogenic species (Escherichia coli and Bacillus thuringiensis) displaying neither clinical signs nor mortality. However in overall, the induced amounts of hepcidin transcripts were positively related with the number of bacterial cells delivered in both pathogenic and non-pathogenic bacterial species. Inducibility of hepcidin transcripts were variable among three tissues examined (liver, kidney and spleen) in which kidney and spleen were more responsive to the bacterial challenge than liver. Time course expression patterns of hepcidin mRNAs after challenge were different between groups challenged with pathogenic and non-pathogenic species, although the overall pattern of hepcidin expression was in accordance with that generally observed in battery genes appeared during early phase of inflammation. Fish challenged with E. coli (non-pathogenic) showed the significant induction of hepcidin transcripts within 24 hr post injection (hpi) but the level was rapidly declined to the basal level either at 48 or 96 hpi. On the other hand, hepcidin transcript levels in E. tarda (pathogenic)-challenged fish were continuously elevated until 48 hpi, then downregulated at 96 hpi, although the level at 96 hpi was still significantly higher than control level observed in non-challenged fish. This expression pattern was consistent in all the three tissues examined. Taken together, our data indicate that hepcidin is tightly in relation with pathological and/or inflammation status during bacterial challenge, consequently providing useful basis to extend knowledge on the host defensive roles of hepcidin under infectious conditions in bony fish.
Sperm from mud loach (Misgurnus mizolepis) were electroporated in the presence of plasmid DNA, pRSV/luc or pMT/hGH over a range of field strength of 0-1,625 V/cm with capacitance from 0 to 1,000 ${\mu}F$, and the effects of electroporation on fertilization, hatching, early survival, and efficiency of gene transfer were investigated. Average fertilization rate, hatching rate and early survival rate up to yolk sac absorption of all experimental groups were not significuntly different (P>0.05). The proportion of fish carrying pRSV/luc based on the polymerase chain reaction (PCR) analysis was ranged from 0 to $20\%$, however, the values of gene transfer efficiency from the different eledctroporation conditions were not significantly different. PCR analysis of pMT/hGH transferred groups revealed that screening of pMT/hGH transferred fish by PCR was difficult because of significant nonspecific amplifications resulted from the homologous sequences in the genome of mud loach.
Ultrahistology of spermatogenic cells on spermatogenesis were analyzed from triploid males of the mud loach, Misgurnus mizolepis. All the testis of triploid males were smaller in thickness and shorter in length than those of diploid males, but the testes developmental stages in triploid males were very similar to those of diploid males. And cytological characteristics were also almost identical to each other. Also Sertoli cells with high activity were recognized at intralobuli of the testis in triploid males during the period of spermiogenesis. And then a few matured spermatozoa were observed in testis of triploid, and interstitial cells also appeared high active in interlobuli. But nucleus sizes of spermatogenic cells of triploid male according to developmental stages were larger than those of diploid overall. Especially, spermatozoa of triploid showed abnormal morphology such as two or more tail flagella, significantly larger head sizes, nucleus size, and diameter of axial filaments etc. than those from diploid.
Cho, Young Sun;Lee, Sang Yoon;Noh, Choong Hwan;Nam, Yoon Kwon;Kim, Dong Soo
Korean Journal of Ichthyology
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v.18
no.2
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pp.65-77
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2006
Gene transcripts potentially responsive to the heat stress were surveyed by cDNA microarray analysis in mud loach (Misgurnus mizolepis). Transcriptional profiles of hepatic tissue in the fish exposed to either $23^{\circ}C$ or $32^{\circ}C$ for 4 weeks were compared each other by 3 replicated hybridization assays using 1,124 unigene clones selected from mud loach liver expressed sequence tags (ESTs). A total of 93 clones showed the substantially increased mRNA levels (>2-fold) in $32^{\circ}C$-exposed group when compared in $23^{\circ}C$control group. It includes various enzymes and proteins involved in energy pathway, protease/protein metabolisms, immune/antioxidant functions, cytoskeleton/cell structure, transport and/or signal transduction. Maximum level of increase was up to 15-fold relative to $23^{\circ}C$ treatment. Heat exposure also resulted in the significant decrease (less than 50% relative to $23^{\circ}C$-exposed fish) of the transcriptional activities in 85 genes. Besides the above categories, yolk protein (vitellogenin) and ribosomal proteins were notably down regulated in the fish exposed to heat stress. A number of novel gene transcripts were also detected in both up-regulated and down-regulated groups.
Lim, Hak-Seob;Kim, Moo-Sang;Kim, Ok-Soon;Kim, Ji-Yeon;Choi, Young-Mi;Ahn, Sang Jung;Lee, Hyung-Ho
Journal of Marine Bioscience and Biotechnology
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v.1
no.3
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pp.186-192
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2006
Short interspersed repetitive elements (SINEs) are dispersed throughout eukaryotic genomes. These SINEs have been shown to be excellent phylogenetic markers for the closed related species. In this report, we isolated two novel families of SINEs from the mud loach. The two SINE families, mlSINE-L and mlSINE-S, have genomic lengths of about 410bp and 270bp, respectively. 5' and 3' ends of the SINE families are well conserved and highly homologous to each of corresponding ends of RSg-1 and SmaI SINEs. Phylogenetic analysis shows that mlSINEs are unique to the mud loach. A dot blot hybridization experiment shows that mlSINE-L has an estimated copy number of $1{\times}10^3$ per $2{\times}10^9bp$ (2.8 pg) and is more frequently distributed at nuclear matrix attachment regions (MARs) than loop DNAs. The result suggests that mlSINEs may preferentially integrate in or near MARs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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