국내 재배종 토마토 서광 품종으로부터 분리한 Polygalacturonase 유전자(PG2)의 3'측 1.1 kb cDNA 단편을 식물 형질전환용 운반체에 antisense 방향으로 삽입한 후 자엽을 이용하여 토마토내 도입하여 형질전환 토마토를 획득하였다. 형질전환 토마토(T$^{0}$ )를 도입시켜 그 종자를 1 mg/mL 농도의 kanamycin 함유 MS 배지에서 발아시켜 분리 집단 중에서 T$_1$9 식물체를 얻었다. T$_1$9의 Genomic Southern blot 분석 결과, antisense PG 유전자 1개가 염색체 내로 삽입되었음을 확인하였고 RNA gel blot 분석으로 endogenous PG mRNA보다 antisense PG RNA가 강하게 발현됨을 확인하였다. T$_1$9 계통 10개체의 성숙 토마토 과피조직내의 PG 효소 활성도 4~60%까지 저해되었다.
복숭아 수확시기에 낙과한 토양에서 Lactobacillus sp. D4와 D5 균주를 분리하였다. 분리한 Lactobacillus sp. D4와 D5 균주를 동정하기 위하여 형태학적 동정, 생화학적 동정 및 16S rRNA 유전자서열 분석을 수행하였다. 16S rRNA 유전자서열 분석 결과 Lactobacillus sp. D4는 Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ATCC $14917^T$과 Lactobacillus pentosus ATCC $40997^T$에 각각 99.05%, 98.98% 일치하였으며, Lactobacillus sp. D5는 Lactobacillus pentosus ATCC $40997^T$, Lactobacillus plantarum subsp. plantarum ATCC $14917^T$에 각각 98.71%, 98.64% 일치하였다. Lactobacillus sp. D4와 D5 균주는 당 이용성 비교에서 Lactobacillus plantarum ATCC $14917^T$과 Lactobacillus pentosus ATCC $8041^T$에 비교하여 다른 결과를 나타내었다. 정확한 동정을 위하여 VITEK MS matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) 분석, multiplex PCR, random amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR을 수행하였다. 이러한 결과에 근거하여 Lactobacillus sp. D4와 D5 균주는 Lactobacillus plantarum으로 동정되었다.
본 연구에서는 갈매나무과에 속하는 Rhamnus yoshinoi (RY, 짝자래나무) 가지 부위의 70% 에탄올 추출물을 이용하여 전립선암세포의 항암 활성을 규명하고자 하였다. 짝자래 나무 가지 추출물을 전립선암 세포 PC-3에 처리하여 β-catenin과 TCF4의 단백질 수준 감소를 확인하였다. 이후, β-catenin과 TCF4의 mRNA 발현을 조사한 결과 β-catenin은 감소하지 않았고, TCF4는 감소하였다. 이를 통해, β-catenin mRNA의 발현에는 영향이 없지만, TCF4 mRNA 발현은 억제하는 것으로 나타났다. 단백질 분해효소억제제인 MG132를 처리한 전립선암 세포 PC-3에서 단백질 수준 확인을 통해 β-catenin의 단백질 분해를 유도할 수 있음을 확인하였다. 또한 전립선암 세포 PC-3에서 짝자래나무 가지 추출물의 GSK-3β 유도 β-catenin 단백질 분해 Kinase 구명과 β-catenin 인산화에 영향을 미치는 것을 확인하였다. 이상의 연구 결과로 짝자래나무 가지 추출물은 GSK-3β 의존성 Wnt/β-catenin 단백질의 분해를 통해 전립선암의 생육 억제와 관련이 있는 것으로 확인된다. 또한 짝자래나무 가지 추출물에서 항암활성과 관련된 활성물질이 있는 것으로 확인되었다. 본 결과는 전립선암의 항암제 개발을 위한 소재로 짝자래나무 가지 추출물의 활용이 가능할 것으로 판단된다.
생애 초기 유해 경험은 우울증의 위험성을 높이며, 성인기 스트레스의 민감성에 영향을 미칠 수 있다. 출생 후 모성 분리(MS)로 인한 성인기 스트레스(장기간 예측 불가능한 스트레스; CUS)의 취약성에 p11 유전자의 후성유전기전이 영향을 미치는 지를 확인하였다. 출생 직후부터 21일 동안 하루 3시간 동안 새끼 생쥐를 어미 생쥐로부터 분리시켜 새끼 생쥐가 성체가 되었을 때 CUS를 3주 동안 매일 적용하였다. Real time PCR기법으로 해마의 p11 발현 양을 측정하였고, 염색질 면역 침전 분석법으로 p11 promoter의 히스톤 H3 아세틸화 및 메틸화 양을 측정하였다. 강제수영검사에서 우울 유사 행동을 측정하였다. MS군 및 CUS군은 p11 mRNA 발현 양을 유의하게 감소시켰으며, MS+CUS군은 CUS군에 비해 p11 발현 양을 유의하게 증가시켰다. 또한 MS+CUS군은 CUS군에 비해 H3 아세틸화를 감소시켰다. 이러한 감소는 HDAC5 mRNA 발현 증가와 일치하였다. MS+CUS군은 CUS군에 비해 H3K4 메틸화를 감소시켰으며, H3K27 메틸화를 증가시켰다. 강제수영검사에서 p11 발현이 가장 많이 감소된 MS+CUS군이 대조군에 비해 더 긴 부동 시간을 나타내었다. 출생 후 모성 분리를 경험하고 성체 기간에 스트레스를 함께 받은 생쥐는 성체기간에만 스트레스를 받은 생쥐보다 훨씬 더 큰 후성유전 변화를 보여주었다. 생애 초기 유해 경험은 해마에서 p11 유전자의 히스톤 변형을 통해 성체 스트레스 효과를 더 악화시키는 것으로 생각된다.
Venugopalan, Vijayalatha;Tripathi, Subhash K.;Nahar, Pradip;Saradhi, P. Pardha;Das, Rakha H.;Gautam, Hemant K.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권2호
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pp.237-245
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2013
Canthaxanthin (cx) is a potent antioxidant that is chemically synthesized at the industrial scale and has imperative applications in the cosmetic and feed industries. An orange pigmented mesophilic bacterium, designated as K44, was isolated from soil samples of Kargil, India. Biochemical tests, 16S rRNA gene sequencing, and FAME analysis of the bacterium indicated it to belong in the genus Dietzia and is distinct from human isolates. The strain showed 98% 16S rRNA gene sequence homology with Dietzia maris DSM 43102. High-performance liquid chromatography profile of the pigments isolated from K44 showed two major peaks absorbing at 465.3 and 475 nm. The liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) analysis of both these peaks revealed their m/z to be 564. The molecular weights, LC-MS/MS fragmentation patterns, and ${\lambda}_{max}$ of these fractions corresponded to all-trans- (475 nm) and 9-cis-(465.3 nm) cx isomers. The antioxidant activities of cis- and trans-cx isomers isolated from this bacterium were found to differ, where the cis-isomer showed higher free radical, superoxide radical, and reactive oxygen species scavenging activities than the alltrans- isomer, suggesting that 9-cis-cx is more effective as an antioxidant than the all-trans-cx.
Although, one of the etiologies of localized lipodystrophy of the subcutaneous connective tissue (cellulite) is the histological alternation of adipose tissue, the characteristics of expression of the components of extracellular matrix (ECM) components during adipogenesis are not uncovered. In this study, the effects of caffeine and Ishige okamurae originated diphlorethohydroxycarmalol (DPHC) on the expression of extracellualr fibers was analyzed with quantitative RT-PCR during differentiation induction of mouse subcutaneous adipose derived stem cells (msADSC) into adipocyte. The expression levels of Col1a, Col3a1, and Col61a were decreased by the adipogenci induction in a time-dependent manners. However, Col2a mRNA and Col4a1 mRNA expressions were oposit to them. Caffeine and DPHC stimulated the changes of the expression of these collagens. Eln mRNA expression was increased by induction. DPHC stimulated the expression of it. Mfap5 mRNA expression was deceased in both adipogenic cell and matured adipocytes. Caffeine suppressed the expression of Mfap5 but the effect of DPHC was different by the concentration. The expression of bioglycan, decorin, and lumican were also modified by caffeine and DPHC in a concentration-dependent manner. Based on this study, we revealed firstly the effects of caffeine and DPHC on the expression of collagens, elastin, and glycoproteins during adipogenesis of msADSCs. Those results suggest that DPHC may have antiadipogenic effect and has more positive effets on normal adipose tissue generation and work as suppressor the abnormality of ECM structure. Such results indicate that DPHC can be applied in keeping the stability of the ECM of adipogenic tissues.
A cDNA encoding the masu salmon, Oncorhynchus masou, estrogen receptor $\alpha$ (msER$\alpha$) was cloned from the pituitary gland by polymerase chain reaction (PCR). This cDNA contains an open reading frame encoding 513 amino acid residues, and the calculated molecular weight of this protein is about 56,430 Dalton. The amino acid sequences of the DNA binding and ligand binding domains of msER$\alpha$ showed high homology to those of other fish species (84-100%). Reverse transcription PCR analysis showed that the mRNA level of msER$\alpha$ in the pituitary was slightly higher in estradiol-17$\beta$(E2) injected masu salmon than that of control fish. To test the biological activity of msER$\alpha$, the cDNA was ligated to a mammalian expression vector and transfected into a gonadotrope-derived cell line, L$\beta$T2, with a reporter plasmid including estrogen responsive element. Expression of the reporter protein, luciferase, was E2 and msER$\alpha$-dependent. The masu salmon ER$\alpha$ is structurally conserved among teleost species and functions as a transcriptional activator in the pituitary cells.
본 연구에서는 일개 대학병원에서 2년간 분리된 혈액배양 양성배지에서 MALDI-TOF MS system을 이용하여 Gram-positive bacilli를 동정한 결과를 균종별, 분기별로 분석하였다. Corynebacterium striatum은 총 89균주 중 66균주 (74.2%), Bacillus cereus는 60균주 중 44 균주 (73.3%), Listeria monocytogenes는 25균주 중 25균주 (100%)로 2.0이상의 높은 스코어에서 동정되었다. 미 동정 된 균주는 303균주 중 293균주는 혈액배양에서 1회 분리 균주로 감염균으로서의 의의가 없는 오염 균주로 간주되었다. 감염균으로서 의의가 있는 동일 환자 2회 이상 분리 균주 대상 16S-rRNA sequencing 비교결과 총 50균주 중 43균주가 일치해 86.0% 동정이 가능하였다. 일치하지 않은 7균주 중 5균주는 MALDI-TOF MS로도 동정이 되지 않았다. 결론적으로 혈액배양에서 Gram-positive bacilli가 동정되는 경우, 일차적으로 MALDI-TOF MS를 이용하여 동정해보고 이를 활용한다면 어렵고 비용이 많이 들던 Gram-positive bacilli 동정이 저비용으로 더욱 간편하고 정확해지며, Gram-positive bacilli에 의한 감염 진단에도 도움이 될 것으로 판단된다.
Heat shock proteins (HSPs), one of the most highly conserved groups of proteins characterized to date, play crucial roles in protecting cells against environmental stresses, such as heat shock, salinity and oxidative stress. The glutathione S-transferases (GST) have important role in detoxification of oxidative stress, environmental chemicals and environmental stress. GST mRNA expression have been used as biomarkers on environmental stress. The purpose of this study was to investigate the death rate and the gene expression of Hsp70 and GST during air exposure and starvation. Results showed that, the expression of Hsp70 mRNA was significantly changed in the experiment groups, such as air exposure and starvation. GST mRNA expression was significantly increased in the experimental group of starvation. These results suggest that Hsp70 and GST were played roles in biomarker gene on the air exposure and starvation.
A clone, LCM1, which encodes calmodulin (CaM) was isolated and characterized from monocot lily (Lilium longiflorum Thunb.) plants. The clone is 681 bps and contains the 447 bp coding region, 8 bp leader sequence, 210 bp 3'-untraslated region, and a poly(A) tail. The coding region of 149 amino acids encodes a protein of predicted Mr 17 kD. Comparison of the LCM1 amino acid sequence with other CaMs revealed that the protein is highly conserved among various living organisms. The expression level of calmodulin gene in lily was studied by RNA blot analysis. The LCM1 mRNA was present in all tissues tested. However, a higher level of calmodulin was observed in anther and floral bud. The level of calmodulin mRNA in anther was about 10 times higher than that in anther was about 10 times higher than that in vegetative tissues. The anther preferential expression of CaM in lily is currently investigated in dicot plants.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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