• Natural Product Sciences
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• 제25권2호
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• pp.157-164
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• 2019

The study was conducted to investigate the acute and sub-acute toxicity effect of Aquilaria malaccensis leaves aqueous extract (AEAM) towards male ICR mice in terms of body weight, relative organ weight, mortality rate and sperm parameters. In acute toxicity study, a single dose at of 2000 mg/kg was performed. In sub-acute toxicity study, the mice were received normal saline (control group), 50, 100, 150, 200, 500, or 1000 mg/kg of AEAM orally for 21 days of treatment. In sub-acute toxicity study, the number of abnormal sperm were significantly decreased in AEAM 100, 150, 200, 500, and 1000 when compared to the control group. While, the motility of sperm were found to be significantly increased in AEAM 100, 150, 200, and 1000 as compared to the control group. No mortality was recorded in the control group and treated groups in both toxicity studies except for one mouse from AEAM 1000 group. However, the mild sedative effect in terms of the tendency to sleep was clearly noticeable in both toxicity studies. Results indicated that the AEAM can be one of the useful alternative medicine to enhance fertility rate by increasing healthy sperm production.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제5권1호
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• pp.53-57
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• 2001

정자의 수정능력획득과 첨체반응은 Ca$^{2+}$에 의존적으로 일어나며, 수정능력획득 과정에서는 원형질막으로부터 cholesterol이 방출되어 첨체반응이 일어나기 쉬운 상태로 전환된다. 최근 세포막으로부터 cholesterol 방출을 촉진하는 methyl beta cyclodextrin (MBCD)이 첨체반응을 유발함이 알려졌으나 정자 주변의 Ca$^{2+}$ 농도와 관계없이 cholesterol 방출만으로 첨체반응이 유발되는지의 여부는 확인되지 않았다. 본 연구에서는 생쥐 정자에서 MBCD에 의한 첨체반응의 Ca$^{2+}$ 의존성을 조사하였다. 첨가된 Ca$^{2+}$이 없는 경우에도 MBCD는 농도 의존적으로 첨체반응을 증가시켰다. 저농도 (100 ${\mu}$M)의 Ca$^{2+}$의 존재시 MBCD에 의한 첨체반응이 유의하게 증가하였다. Ca$^{2+}$을 첨가하지 않은 배양액에 100 ${\mu}$M의 EGTA를 첨가한 경우 자발적 첨체반응을 유의하게 억제되었다. 같은 조건하에서 1 mM MBCD는 첨체반응을 유의하게 증가시켰으나 EGTA 비처리군보다 유의하게 낮아 MBCD에 의해 유발되는 첨체반응에 정자내부의 Ca$^{2+}$이 관여하는 것으로 사료된다. 이상의 결과에서 외부의 Ca$^{2+}$이 존재하지 않더라도 MBCD를 이용하여 첨체반응을 유발할 수 있으며 정자 내부의 Ca$^{2+}$이 원형질막 cholesterol의 방출에 따른 첨체반응 조절에 관여함을 알 수 있다.

• 한국가축번식학회지
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• 제14권2호
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• pp.115-124
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• 1990

These experiments were undertaken as a basic study to develop immunocontraceptive vaccine and to understand the role of zona pellucidae in early fertilization process by investigating the effect of monoclonal and polyclonal antibody to porcine zona pellucidae and polyclonal antibody to mouse zona pellucidae on the fertilization of porcine and mouse eggs in vitro. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. Treatment of porcine and mouse eggs with undiluted anti-zona serum produced intense precipitation layer on the poricne and mouse zonae, respectively, thus resulting in the total inhibition of sperm adherence on surface of zona. 2. In vitro fertilization of eggs pre-treated with 0.3∼10% of various antibodies was examined, and resulting in that 5 and 10% of rabbit polyclonal antibodies to porcine zona inhibited completely both in vitro fertilization and polyspermy of porcine eggs while monoclonal to porcine zona and rabbit polyclonal antibody to mouse zona did not inhibit in vitro fertilization but monoclonal antibody reduced the rate of polyspermy compared to that of control group. Almost the same results were obtained in the study on the effect of anti-zona serum on in vitro fertilization of mouse eggs.

• 한국발생생물학회:학술대회논문집
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• 한국발생생물학회 2004년도 추계학술대회
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• pp.26-26
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• 2004

• 한국가축번식학회지
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• 제25권2호
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• pp.163-169
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• 2001

본 연구는 마우스 정자-난자 결합분석 법(oocytes-sperm binding assay; OSBA)을 이용하여 단백질원, 배양액의 질, 난자의 성숙도에 따라서 정자와 난자의 결합능력을 알아보고 그 유용성을 알아보기 위하여 실시하였다. 4~5주령의 hybrid(C57BL/6 $\times$ CBA/N) F$_1$ 암컷에서 회수된 미수정란에 0.1% hyaluronidase를 이용하여 난구세포를 제거하였으며, 제1극체의 존재유무에 따라 Met. II(mature)와 Met. I(intermediate mature)로 구분하였다. 암컷과 동일 계통의 8주령 이상 된 수컷에서 회수된 정소상체 미부정자를 37$^{\circ}C$에서 10분간 배양하였다. 배양된 정자부유액은 단백원 무첨가배양액과 1:5로 희석하여 10분간 배양한 다음 3 ${\mu}\ell$를 10$\pm$2개의 난자를 들어있는 배양액 소적(30 ${\mu}\ell$)에 넣어서 정자와 난자의 결합을 유도하였다. 정자 주입 후 3시간 혹은 24시간째에 난자를 뽑아내어 세척하였으며, 도립현미경(100$\times$)에서 난자에 부착된 정자의 수를 세었다. 수정란을 이용한 정도관리를 위하여 과배란이 유도된 암컷은 수컷과 합사시켰으며, hCG 주사 16~18시간째에 전핵기의 1세포 수정란을 회수하였다. 단백질원의 종류에 대한 효과를 확인하기 위하여 OSBA를 실시한 결과, 수정 3시간째에 난자당 하나 이상의 정자가 부착된 난자의 비율은 BSA첨가군, 무첨가군, FBS 첨가군의 순으로 유의한 차이를 나타내었다(100% vs. 60.2% vs. 2.1%). 한편, BSA 첨가군에서 정자의 결합능력이 우수하였으나 FBS는 매우 유해하였으며 FBS의 농도가 5%까지는 증가함에 따라 유의한 차이를 나타내었다. 따라서 투명대에 정자가 부착에 있어서 단백원이 매우 중요한 역할을 하며, OSBA는 정자와 난자의 결합에 결정적인 영향을 미칠 수 있는 배양조건을 명확히 판별할 수 있음을 시사하였다. Met. II(mature)와 Met. I(intermediate mature) 난자를 단백원 무첨가, 15% FBS, 0.4% BSA 및 10% AF(양수)가 첨가된 Ham's F-10 배양액에서 OSBA를 실시한 결과, 난자의 성숙도에 상관없이 정자의 결합능력은 비슷한 양상을 보였으며, BSA첨가군, 양수첨가군, 무첨가군, FBS첨가군 순으로 높게 나타났다. 이러한 결과는 OSBA에서 Met. II 난자 대신에 Met. I난자를 이용해도 비슷한 결과를 얻을 수 있음을 시사한다. 생쥐 1세포기배에서 배반포까지의 배발달율을 기준으로 Ham's F-10배양액을 평가하여 일련번호 151은 불량(poor), 152는 양호(good)로 판정한 다음, 동일한 배양액에 OSBA를 실시한 결과 생쥐 1세포기배의 결과와 마찬가지로 일련번호 152 배양액이 151 배양액보다 유의하게 높게 나타났다. 따라서 OSBA는 기존의 정도관리 방법과 동일한 효과를 기대할 수 있을 것이다. 결론적으로, OSBA는 배양액 조건에 따라 정자의 결합능력이 다르다는 것을 보여주었으며, 정토관리 방법으로서의 유용성을 확인시켜 주었다. 또한 쉽게 준비할 수 있는 생쥐의 난자와 정자를 이용하였으며, 배양시간이 3시간으로 짧고, 평가방법이 간편해 시간적, 경제적으로도 효율성이 높다고 사료된다.

• Molecules and Cells
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• 제20권3호
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• pp.423-428
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• 2005

Immediately after fertilization, a chromatin remodeling process in the oocyte cytoplasm extracts protamine molecules from the sperm-derived DNA and loads histones onto it. We examined how the histone H3-lysine 9 methylation system is established on the remodeled sperm chromatin in mice. We found that the paternal pronucleus was not stained for dimethylated H3-K9 (H3-$m_2K9$) during pronucleus development, while the maternal genome stained intensively. Such H3-$m_2K9$ asymmetry between the parental pronuclei was independent of $HP1{\beta}$ localization and, much like DNA methylation, was preserved to the two-cell stage when the nucleus appeared to be compartmentalized for H3-$m_2K9$. A conspicuous increase in H3-$m_2K9$ level was observed at the four-cell stage, and then the level was maintained without a visible change up to the blastocyst stage. The behavior of H3-$m_2K9$ was very similar, but not identical, to that of 5-methylcytosine during preimplantation development, suggesting that there is some connection between methylation of histone and of DNA in early mouse development.

• 대한의생명과학회지
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• 제23권4호
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• pp.372-379
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• 2017

This study was investigated to test whether paternal DNA that was destined for degradation was properly licensed by testing for the presence of mini-chromosome maintenance protein (MCM) 7 and origin recognition complex (ORC) 2 in the paternal pronuclei. ORC2 is one of the first licensing protein to come on and MCM7 is one of the last licensing protein to come on. Zygotes were prepared by injection of control and treated sperm injection (ICSI). To control for DNA breakage, epididymal spermatozoa were treated with DNase I to fragment the DNA, then injected into oocytes. The presence of MCM7 and ORC2 in the pronuclei of mouse zygotes was tested by immunohistochemistry, just before the onset of DNA synthesis, at 5 h after fertilization, and after DNA synthesis began, at 9 h post fertilization. We found that in all cases, both MCM7 and ORC2 were present in both pronuclei at 5 h after sperm injection, just before DNA synthesis began. This indicates that no matter how extensive the DNA damage, recruitment of licensing proteins to the origins of replication was not inhibited. Sperm DNA fragmentation does not prevent licensing of DNA replication origins. Furthermore, the embryo recognizes DNA that is damaged by nucleases. Our data indicate that the one-cell embryo does harbor a mechanism to prevent the replication of severely damaged DNA from spermatozoa, even though the embryos do not undergo classical apoptosis.

• 한국동물학회지
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• 제38권3호
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• pp.395-404
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• 1995

한국산 등줄쥐의 정자변태 과정을 알아보기 위하여 세정관 상피의 세포분화에 따른 특징들과 정소상체 미부의 성숙정자의 형태적 특징들을 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 세포구조물의 특징에 따라 골지, 두모, 첨체, 이탈단계는 각각 전, 후기로 구분하였고 성숙단계를 1단계로 하여 한국산 등줄쥐의 정자변태의 전 과정을 9기로 나눌 수 있었다. 핵질의 변화에 있어서, 염색질 과립들은 두모단계에서 응축하기 시작하여 첨체단계에서 구형의 형태로 진행되고, 성숙단계에서 균질화하여 완전히 정자의 핵을 형성하였다. 정자두부는 낫꼴모양을 가지며, 중편부의 외측섬유는 편자모양으로 배열되어 있고, 이들 외측 섬유는 NO. 1,5,6,9가 다른 것 보다 크다.

• 한국가축번식학회지
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• 제17권2호
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• pp.113-120
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• 1993

본 연구는 제외생산된 돼지 수정란의 처1외발생율을 제고하기 위하여 각종 배양액파 돼지난구세포 혹은 생 쥐태아간세포와의 공동배양 효과플 조사하였다 m-KRB, BECM 및 TCM-HEPES 배양액을 공시하 여 제외수정란을 배양한 결과 배반포기까지 발달하는 비율은 전처리구에서 0~1.0%로써 극히 저조하였다. 특히 대부분의 수정란은 4-세포기 단계에서 발달이 정지되었다. 한편, 단층세포가 유도된 돼지 난구세포나 생쥐 태아간세포와 함께 제외수정란을 공동배양한 결파 2, 4-, 8~16-, 32-세포기, 상실배가 빛 배반포로 받달하는 비율은 각각 61.1~67.0%, 59.0~58.0%, 42.5~43.1%, 28.4~30.2% 및 20.4~21.0%였다 이러한 결파는 단순배양액에서 체외배양한 수정란의 발탄 성적 보다유의하게 높은 것이었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 1세포기 수정란을 체외에서 배양할때 체세포와의 공동배양은 수정란의 체외발달을 촉진하는 것으로 생각된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제16권1호
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• pp.39-46
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• 1992

In viro fertilizatin is very important in both human clinical practice and animal breeding. However, the success rate of in vitro fertilization is not high. The purpose of this study ws to determine wheter in the vitro fertilization and culture of porcine oocyte using a hydrogel chamber were possible or not. Hydrogel chambers were made of polymerized 2-hydroxyethyl methacrylate. Matured follicular oocytes in Waymouth's medium and T L Hepes medium, tubal oocytes, and preincubated sperm in M199 medium were treansferred into the lumen of the hydrogel chambers. The chambers containing porcine oocytes and spermatozoa implanted into the mouse peritioneal cavity, and ova were examined after the recovery of the chambers at 84 hours after preservation start. The result was shown that fertilization and culture of porcine oocytes were successfully achieved inside of the hydrogel chamber.