• 미생물학회지
• /
• 제23권1호
• /
• pp.64-68
• /
• 1985

페디스토마 성충의 단백질을 정제하여 이를 항원으로 면역시킨 mouse의 spleen cell과 myeloma cell을 세포융합 시킨 결과 융합율은 56% 이었고. 3차 cloning한 후의 항체생산율은 89% 이였으며, 이들 융합세포로 부터 IgM을 생산하는 hybridoma clone과 IgG을 생산하는 hybridoma clone을 얻었다. IgM을 생산하는 hybridoma clone의 supernate는 antibody titer가 희석농도 1 : 64까지 양성이었고. IgG을 생산하는 hybridoma clone의 supernate는 1 : 256까지 양성이었다.

• KSBB Journal
• /
• 제8권1호
• /
• pp.23-27
• /
• 1993

• KSBB Journal
• /
• 제11권3호
• /
• pp.329-339
• /
• 1996

The effects of ammonium ion on cell growth kinetics, monoclonal antibody productivity, and cell metabolism of hybridoma cells were investigated. The mouse-mouse hybridoma cell line VlIIH-8 producing mouse IgG2a was used as a model system. Ammonium ion showed an inhibitory effect on cell growth and monoclonal antibody production. New immobilized adsorbents were developed for the reduction of the inhibitory effect of ammonium ion. The ammonium ion selective zeolite, Phillipsite-Gismondine was entrapped in calcium alginate bead or in dialysis membrane and applied to the hybridoma cell culture system for the in situ removal of ammonium ion from culture media. The effects of ammonium the both serum supplemented and serum free media on the cell growth were studied by applying immobilized adsorbents of calcium alginate bead type. The results demonstrated a substantial enhancement in cell growth. Applying immobilized adsorbents of dialysis membrane type to serum supplemented media also resulted in the stimulation of cell growth, cell viability and monoclonal antibody production.

• KSBB Journal
• /
• 제10권3호
• /
• pp.323-334
• /
• 1995

Hybridoma 세포의 세포 성장 속도, monoclo nal antibody의 생산성 및 세포 대사에 미치는 glucose의 영향이 조사되었다. IgG2,를 생산하는 m mouse-mouse hybridona VIII H-8 세포가 모델로 이용되었다. Glucose 농도에 따른 바성장속도의 변화는 기질저해형식 (substrate inhibition type) 의 성장모델로 나타낼 수 있었다. 초기 glucose 농도 4g/f까지는 최대 세포밀도의 증가를 보여 주었다. Glucose는 세포사망속도에 큰 영향을 나타내었고 glucose 농도와 비사망속도 간에는 반비례의 관계가 성립됨을 보였다. Glucose 농도가 증가될수록 세포의 생존율과 monoclonal an tibody의 생산이 증가되었다. Glucose 놓도가 증가될수록 glucose의 비소비속도가 증가되 었고, 초기 glucose 농도의 증가는 lactate의 총괄 비 생산속도의 증대를 가져왔다. 암모늄 이온의 총괄비 생산속도는 초기 Glucose의 농도에 의존하 였지만 암모늄 이온의 전반적인 생성속도는 초기 glucose 농도에 거 의 무관함을 보여 주었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제17권5호
• /
• pp.489-493
• /
• 1989

쥐 하이브리도마 Alps 25-3를 이용하여 무혈청 배지 KM3의 각 성분이 세포증식과 항체생성에 미치는 영향을 조사하여 무혈청 배지를 최소화한 KMS를 결정하였다. Alps 25-3에 영향을 미치는 것으로 조사된 transferrin, ethanolamine 그리고 BSA만을 혼합하여 결정한 KMS를 다른 쥐 하이브리도마인 A4W, KW 그리고 HCGK에 적용시켰다. KM5를 KM3와 비교하였을 때 세포증식과 항체생산이 거의 동일한 양상을 보였다. 그러나 혈청배지와 비교하여 보면 최고 세포농도는 50-90%, 최종 단일클론항체의 농도는 85-100%의 수준을 보였다. 본 연구의 결과로 쥐 하이브리도마 세포를 무혈청 배지에서 배양시킬 때 필수적으로 첨가기어야 하는 성분들이 조사되었으므로 대량배양에 응용하거나 대사를 연구하는데 유용하게 이용되어지리라 본다.

• KSBB Journal
• /
• 제8권1호
• /
• pp.28-35
• /
• 1993

The serum free medium was developed and used for the suspension culture of mammalian cells. Although there were the problems of the longer lag time and the smaller maximum cell concentration achievable, the higher specific productivity as well as other advantages of the serum free medium can make it a more realistic alternative. The existence of a staggering period in glucose concentration vs. time profile in the batch culture can be a practical indicating signal for performing fed batch culture. The concentration dependence of the effects of the additives in the serum free medium as well as its economic feasibility was also tested.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제57권1호
• /
• pp.61-63
• /
• 2014

Aged black garlic (ABG) was extracted with 20% ethanol and water (crude extracts) and fractionated into three categories (>10, 3-10, and <3 kDa). The effect of crude extract supplements on anti-My-10 hybridoma cell growth and IgG1 antibody production was investigated in suspension culture with a chemically defined protein-free medium. We observed that supplementation of ABG to the cell culture medium stimulated anti-My-10 hybridoma cell growth and production of IgG1 antibody, particularly with fractionated ABG of low molecular weight. The stimulation depended upon the concentration and the size of the fractionated ABG. We also found that the growth-promoting activity was not correlated with high antibody production. These results suggest that fractionated ABG is a novel and promising alternative as an animal cell culture supplement.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제17권5호
• /
• pp.481-488
• /
• 1989

최근 단일클론항체의 상업적 이응가치가 증대하면서 그 수요량 또한 급격히 증가, 이를 뒷받침할 수 있는 대량생산 기술이 요구되고 있다. 본 연구에서는 쥐 하이브리도마 Alps 25-3의 대량배양을 위해 우선적으로 무혈청 배지 (serum-free media)의 개발을 시도하였다. 동물세포 배양액 IMDM과 Ham's F-12를 1:1로 혼합한 배지를 기본으로하여 ITES 용액 (insulin 10$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, transferrin 10$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, ethanolamine 10$\mu$M and selenium 30nM)을 첨 가하여 일차적으로 결정한 EBM(enriched basal medium)에 steroid hormones, vltamins, lipid, mineral 및 여러성분들을 각각 첨가하여 혈청과 대치될 수 있는 성분들의 최적농도를 조사하였다. 각 성분들의 개별효과와 함께 그들을 혼합하였을 때의 상호효과를 통해 혈청배지와 거의 동일한 성장을 보이는 무혈청배지 KM3(EBM with BSA 100$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, mineral solution and 0.05% PEG)를 결정할 수 있었으며 이 배지에서의 최고 항체 생성량은 혈청배지의 약 80% 로 나타났다. 또한 무혈청 배지에서 여러 cell line의 성장과 그들의 항체 생성을 조사함으로써 다른 쥐 하이브리도마 세포배양에도 적응시킬 수 있음을 확인할 수 있었다.

• KSBB Journal
• /
• 제7권2호
• /
• pp.96-101
• /
• 1992

저혈청 배지의 개발을 위해 혈청 대체 가능성이 있는 물질을 선정하여 각각의 필요성을 검색하였다. 검색 결과 결정된 물질들로 저혈청 배지를 제조하였으며, 기저 배지의 종류와 혼합에 따른 영향을 고찰 하였다. 개발된 배지는 1% FBS 첨가만으로 6개월 이상의 계대배양에서 만족할만한 안정성을 보였으며, 부유배양에도 적합한 것으로 판단되었다. 개발된 배지에서 혈청은 필수적이었으나 균주의 장기적응후에 무혈청 배지의 개발이 보다 용이할 것으로 기대되었다.

• 대한의생명과학회지
• /
• 제9권3호
• /
• pp.111-121
• /
• 2003

Recombinant single chain Fv (scFv) antibodies offer many advantages over mouse monoclonal antibodies such as faster clearance from blood, improved tumor localization, reduced human anti-mouse antibody (HAMA) response, and the availability to manipulate the scFv through genetic approaches. The recombinant phage display was constructed using lym-l hybridoma cells as a source of genetic starting material. mRNA was isolated from the corresponding antibodies hybridoma cells. VH and VL cDNA were amplified with RT-PCR and linked with ScFv by linker DNA to form ScFv DNA, which then were inserted into phagemid pCANTAB5E. The phage of positive clones selected with tube containing raji lymphoma cell and infected by competent E. coli HB2151 to express soluble scFv. The scFv lym-l was secreted into the cytosol and culture supernatant and shown to be of expected size (approximately 32 kDa) by western blot. An active scFv lym-l could be produced in E. coli with soluble form and high yield from hybridoma cell line, using phage display system. Immunoreactivity indicated that scFv lym1 showed a potential biding affinity against the raji lymphoma cell as its parental antibody (intact lym-l Ab).