We investigated the effects of molting-hormone insecticide tebufenozide on fourth larvae of the midge C. flaviplumuon in growth development from fourth-instar to adult. Fourth-instar larvae were exposed test concentrations were chosen control, 10 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$, 30 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$, 60 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ and 100$\mu\textrm{g}$$L^{-1}$. In control and 10 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$, 10~20% individuals succeed adults while low emergence rates were observed surplus 30 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$. Death larvae appeared a various day along the concentration. We observed the converged day: control, 10 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$, 30 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ and 60~100 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ were day 4 to day 18, day 13 to day 16, day 9 to day 17 and day 9 to day 15, respectively. Therefore we concerned a tendency that exposure concentration was high, death period was short. Also, due to molting hormone disruption, development of midge was postponed relatively low concentration such as 10 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$. The converged days of pupa stage revealed control, 10 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$, 30 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ and 60~100$\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ were day 11~15, day 16~20, day 9~15 and day 5~9, respectively. About 10% individuals grow up the pupa-stage in 60~100 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ condition. Sex ratio of the emerged adults was not different in this study. Death pupae frequently appeared in day 13~16 in control, day 6~23 in 10 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$, day 13~16 in 30 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$ and day 6~16 in 60~100 $\mu\textrm{g}$$L^{-1}$.
The 2D/E gel analysis for polypeptide expression reflecting I-18 C gene (early-ecdysterone inducible gene) has conducted the emerged C. riparius adults from larval phase exposure to tebufenozide acting as an ecdysteroidal molting hormone. Control group, the amount of ORE II of the I-18 C gene was larger than that of ORE I of this gene. After treatments, ORE I of the I-18 C gene was overexpressed as the polypeptide, whereas ORF II of this gene was expressed as the polypeptide and was clearly reduced expression. Accordingly, we consider that tebufenozide exhibited endocrine disruptions related processing of ecdysteroid receptor protein reflecting ORF II of I-18 C gene. Also, earlier emergence day was related overexpressed polypeptide reflecting ORE I of I-18 C gene. In this study result, tebufenozide induced changing of physiological condition, and then polypeptide expression reflecting early-ecdysterone inducible I-18 C gene was different between control group and exposure group.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.8
no.2
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pp.169-174
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2004
Bombyx mori nucleopolyhedrovirus(BmNPV) ecdysteroid UDP-glucosyltransferase gene (egt) promoter fragments of different lengths were amplified from BmNPV ZJ-8 genomic DNA by PCR. Reporter plasmids pBmegt542-luc, pBmegt309-luc and pBmegtl59-luc with luciferase (lue) driven by egt promoters were constructed. Both in vitro and in vivo expressions showed that BmNPV egt promoter activity requires the transactivation of viral factor(s), and expression of luc was detected earliest at 24 hrs post infection (pi). BmNPV ZJ-8 homologous region 3 (hr3) increased the expression of luc by over 1,600-fold. Molting hormone of 1.0 - 2.0 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ can dramatically down regulate expression of luc. Juvenile hormone analogue of 0.5-2.0 ${\mu}g$/$m\ell$ increased expression of luc by 145.8% to 75.7%. Deletion assay revealed that the promoter fragment of 159 bp contains the basal promoter structure; Promoter fragments of 309 bp and 542 bp showed similar but much higher transcriptional activities than that of 159 bp, suggesting that nucleotide from -159 to -309 nt upstream the translation initiation site harbors the main cis-acting elements.
In order to identify hormone activities which related to the changing of cutaneous tissue and pupal bodies and also to identify the interaction of corpora allata hormone and prothoracic glandular band hormone which act upon the metamorphosis of the insect. The item of treatment is carried out in 5 different times at the interval of about 12 hours after 4 weeks from the first feeding of 4th instar stage, and as far as 5th instar stage in concerned 6 times of item treatments have been carried out, at about 12 hours interval after 72 hours from the molting, Item treatments were, made in the stage of spring, autumn rearing, However, during the period of post mounting stage and pre pupation by picking out of corpora allata in 5 times at the interval of hours the following change of pupal colour is observed; 1) By an early pick out of 4th instar stage, the three molters are found in greater number, However, by a later pick out the four molters are found instead of others. 2) An abnormal colour is found in the three and four molters when comparing with the control molters. 3) The most of control molters have shown the normal colour except a few samples. 4) As shown in the table 1 and 2, the death number of item treatment is greater in the autumn rearing season. 5) The picking out of corpora allata of 5th instar stage, the post mounting stage and pre pupation period is affecting the change of colour. 6) As a final conclusion, the corpora allata hormone is closely related to the changing of pupal colour.
A crude crystal of phytoecdysone was obtained 355 mg per Kg dry radix of A. japonica, and it was identified to $\beta$-ecdysone by TLC. Feeding silkworms on mulberry leaves sprayed with the extract, mounting time shortened and pupation ratio improved. The feeding effects of the extract was differed according to the rearing seasons, spring and summer. In spring season, only mounting time shortened without any difference in pupation ratio from the control. In summer season, not only mounting time shortened, but also pupation ratio remarkably advanced.
The baculovirus egt gene encodes an ecdysteroid UDP-glucosyltransferase(EGT) which catalyzes the transfer of glucose from UDP-glucose to the insect moltion hormone ecdysteroid resulting in a functionally inactive ecdysteroid. In baculovirus-infected insect larvae, EGT has been shown block molting and pupation. In this study, we compared the development of 4th and 5th instar silkworm, Bombyx mori, larvae injected with either wild-type bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) or a mutant BmNPV(BmEGTZ) in which the egt gene was disrupted by the insertion of a lacZ gene cassette. Larvae injected with BmEGTZ died roughly 12 h more rapidly compared to indentical larvae infected with BmNPV. In addition, BmEGTZ- infected larvae prematurely stopped feeding and gain less weight compared to BmNPV-infected larvae. In order to investigate why BmEGTZ-infected larvae died more rapidly than BmNPV-infected larvae, the array of hemolymph proteins in BmEGTZ-or BmNPV-infected larvae were analyzed by SDS-PAGE. The hemolymph of BmEGTZ-infected larvae showed virus-specific proteins, including polyhedrin, about 12 h earlier than the hemolymph of BmNPV-infected larvae
Proceedings of the Korea Society of Environmental Biology Conference
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2003.11a
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pp.12-15
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2003
The effects of the non-steroidal ecdysteroid agonist tebufenozide on larvae of C. faviplumus and C. riparius were tested in the laboratory. In the most treatments it reached a statistically significant difference from the control condition. As the concentration of tebufenozide was increased, a relatively larger proportion of the observed mortality was associated with the metamorphosis and molting process. Also, the larval mortality of the first larvae was higher than the fourth-instar larvae in C. riparius. In terms of development, the effects of tebufenozide were delayed growth stage in relatively lower concentration such as 10 $\mu\textrm{g}$/L treatments. Based on the mortality, the susceptibility followed the first-instar C. riparius > the fourth-instar C. flaviplumus > the fourth-instal C. riparius. The morphological effects showed that the first and second segments of body of exposed larvae with tebufenozide expanded slowly and not made a complete cephalothorax of pupae during long times or days. And the head capsule slipped down and forward, revealing a fragile and non-pigmented, unsclerotized new head capsule. There was obvious significant difference in the male/female ratio in contaminated fourth larvae of C. riparius. Also, due to the different emergence periods of male/female in low insecticide concentrations, mating chances or opportunities of insects should be decreased. Accordingly, ecological strategies for keeping of sustainable populations should be disrupted.
Ecdysteroids are known as insect molting hormone. At the same time, ecdysteroids and plant ecdysteroids (phytoecdysteorids) reveal beneficial effects on mammal. The present study was undertaken to determine the possible cellular mechanism of action of phytoecdysteroids in bone metabolism. The effects on the osteoblasts were determined by measuring cell proliferation, alkaline phosphatase (ALP) activity, and gelatinase activity. The effects on the osteoclasts were investigated by measuring tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP)(+) multinucleated cells (MNCs) formation after culturing osteoclast precursors. Phytoecdysteroid treatment showed a increase in ALP activity of osteoblasts. Phytoecdysteroid increased the activity of gelatinase. In addition, phytoecdysteroid decreased the osteoclast generation induced by macrophage-colony stimulating factor (M-CSF) and receptor activator of NF-kB ligand (RANKL) in (M-CSF)-dependent bone marrow macrophage (MDBM) cell cultures. Taken these results, phytoecdysteroid may be a regulatory protein within the bone marrow microenvironment.
17β-estradiol (E2) is a natural hormone secreted by ovary, and continuously discharged from household and livestock wastewater into aquatic environment. Due to its strong estrogenic activity, it has adverse effects on development and reproduction in crustacean as an endocrine disrupting chemical. Although ecdysteroid signaling pathway play a key role in development in crustacean, little information on transcriptional modulation of ecdysteroid-related genes in response to E2 is available in small crustacean. Here, we investigated the acute toxicity of E2 to obtain 24-h LCx values in the brackish water flea Diaphanosoma celebensis. Time-dependent expression patterns of seven ecdysteroid pathway - related genes (CYP314a1, EcRA, EcRB, USP, ERR, Vtg, VtgR) were further examined using quantitative real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR). As results, 24-h LC50 and LC10 values were 9.581 mg/l and 4.842 mg/l, respectively. The mRNA expression of CYP314a1, EcRA, USP, VtgR was significantly up-regulated at 12 or 24 h after exposure to E2. These findings indicate that E2 can affect their molting and reproduction by modulating the expression of ecdysteroid pathway - related in D. celebensis. This study will be useful for better understanding of molecular mode of action of endocrine disrupting chemicals on molting process in small crustacean.
The diacylhydrazine insecticides, methoxyfenozide, chromafenozide and tebufenozide are new-generation insecticides. These insecticides induce premature molting and cause the death of insects by mimicking their hormone. Also, these insecticides have already been widely used for vegetables planting in worldwide. Highperformance liquid chromatography (HPLC) is the most widely used procedure for determination of each compound residues in crops. However, simultaneous analysis method of these diacylhydrazine insecticides was not reported. The purpose of this study is to develop a simultaneous determination procedure of methoxyfenozide, chromafenozide and tebufenozide residue in crops using HPLC-UVD/MS method. These insecticide residues were extracted with acetone from representative samples of five raw products which comprised hulled rice, soybean, apple, pepper, and Chinese cabbage. The extract was diluted with saline water, and dichloromethane partition was followed to recover these insecticides from the aqueous phase. Florisil column chromatography was additionally employed for final cleanup of the extracts. The analytes were quantitated by HPLCUVD/MS, using a $C_{18}$ column. The crops were fortified with each insecticide at two levels per crop. Mean recoveries ranged from 89.0 to 104.8% in five representative agricultural commodities. The coefficients of variation were less than 3.9%. Quantitative limits of methoxyfenozide, chromafenozide and tebufenozide were 0.04 mg/kg in crop samples. A HPLC-UVD/MS with selected-ion monitoring was also provided to confirm the suspected residues. The proposed simultaneous analysis method was reproducible and sensitive enough to determine the residues of methoxyfenozide, chromafenozide and tebufenozide in agricultural commodities.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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