In order to examine the effect of testosterone of the cell growth, using a primary rabbit kidney proximal tubule cell culture system, we observed the effect of 3 growth factors and testosterone supplementation on the growth of primary rabbit kidney proximal tubule cells in the serum-free medium. 1 nM of testosterone showed a potentiation of the effect on the growth of the proximal tubule cell in serum-free medium, but higher concentration (>10 nM) of testosterone indeed inhibited the growth. In the absence of hydrocortisone as a growth supplement in serum-free medium, testosterone caused to potentiate the growth of the cell. In the presence of hydrocortisone, testosterone also potentiated the grwoth of the proximal tubule cells. According to the Northern analysis, testosterone increased significantly the level of ${\beta}-actin$ mRNA in proximal tubular cells of rabbit kidney. Consequently we may suggest that growth stimulatory effect of testosterone on the primary rabbit kidney proximal tubule cell in serum-free and hormonally defined media ascribed to increase the synthesis of ${\beta}-actin$, which is an important protein consisting of cellular microfilament.
This study was conducted to investigate the effects of various supplements added into maturation medium of immature porcine oocytes on quantity of cytoplasmic lipid droplets(LD), subsequent fertilization and development to the blastocyst stage in vitro. The basic maturation medium was TCM 199 + 1 ㎍/㎖ FSH, 0.57 mM cystein, 10 ng/㎖ EGF and was supplemented various supplements(10% FBS, 10% pFF, 0.4% BSA, 1.0% BSA, 0.4% PVP, 1.0% PVP). (omitted)
The objective of this study was to investigate the effects of amino acid supplementation of oocyte maturation medium on 1st polar body(PB) extrusion, embryo development and blastocsyt cell number. In experiment 1, Cumulus oocyte complexes(COCs) were matured in in vitro maturation(IVM) medium supplemented with 1, 2, or 4-fold of 10 $\mu$l/ml MEM non-essential amino acid(NEAA) and 20 Park, $\mu$ l/ml BME essential amino acid(EAA). The PB extrusion rate of oocytes matured in 1-fold amino acid group was significantly higher than that matured in medium without amino acid (p<0.05), but it was decreased by the increase of the dosage of amino acid. There were no difference in the percentage of embryos reaching 2-cell, 8-cell and blastocyst in all treatments. The number of trophectoderm(TE) cells and total cell number of blastocysts were highest in 2-fold amino acid group, and the number of inner cell mass(ICM) cells was increased by the increase of the dosage of amino acid. In experiment 2, COCs were matured in IVM medium with 1, 5, or 10 mg/ml lactalbumin hydrolysate(LAH). The PB extrusion rate of oocytes matured in medium with 5 mg LAH was significantly higher than that matured in medium with 1 mg LAH (p<0.05). The development rate to the blastocyst stage was significantly higher in non-supplement and 1 mg LAH group than in 5 mg and 10 mg LAH group (p<0.05). The number of TE cells and total cell number did not differ among treatment groups, but the number of ICM cells was increased by the increase of LAH supplement. These results suggested that the supplement of certain group of amino acid in IVM medium effective on the quality of blastocyst, and further studies will be accompany with the search of new sources of amino acid used for the use of in vitro embryo production.
The alkaloids, piperlongumine, piperine, pipernonaline, and piperoctadecalidine, isolated from Piper longum L., were found to inhibit the biosynthesis of aflatoxin $B_1$ (AF$B_1$) in Aspergillus flavus WRRC 3-90-42-12. Piperlongumine was the most active among the compounds tested, with a 96% inhibition of AF$B_1$biosynthesis at 0.2% (w/v) supplement in a potato dextrose agar (PDA) medium. The three other piperidine alkaloids, pipeline, pipernonaline, and piperoctadecalidine, also inhibited the biosynthesis of AF$B_1$. Of these three alkaloids, piperoctadecalidine exhibited a potent inhibitory activity with a 100% inhibition of AF$B_1$ production at 0.7% (w/v) supplement in a PDA medium. Therefore, piperlongumine and piperoctadecalidine could be used as antiaflatoxigenic agents in agricultural industries. To determine the antiaflatoxigenic mode of action of piperlongumine, further studies are needed.
In the previous report, we have demonstrated that ginsenoside Rc, one of major ginsenosides, is a major component for the restoration for normal growth of worms in cholesterol-deprived medium. In the present study, we further investigated the roles of minor ginsenosides, such as ginsenoside $Rh_1$ and $Rh_2$, ginsenoside metabolites such as compound K (CK), protopanaxadiol (PPD), and protopanaxatriol (PPT) and ginsenoside epimers such as 20(R)- and 20(S)-ginsenoside $Rg_3$ in cholesterol-deprived medium. We found that ginsenoside $Rh_1$ almost restored normal growth of worms in cholesterol-deprived medium in F1 generation. However, supplement of ginsenoside $Rh_2$ caused a suppression of worm growths in cholesterol-deprived medium. In addition, CK and PPD also slightly restored normal growth of worms in cholesterol-deprived medium but PPT not. In experiments using ginsenoside epimers, supplement of 20(S)- but not 20(R)-ginsenoside $Rg_3$ in cholesterol-deprived medium also almost restored worm growth. These results indicate that the absence or presence of carbohydrate component at backbone of ginsenoside, the number of carbohydrate attached at carbon-3, and the position of hydroxyl group at carbon-20 of ginsenoside might plays important roles in restoration of worm growth in cholesterol-deprived medium.
To achieve higher ethanol productivity in the fermentation system, a continuous ethanol production has been investigated with the air-supplement in a packed-bed immobilized cell reactor system. Yeast cells were immobilized using sodium alginate gel. The results showed that, when the feed medium was saturated with oxygen through aeration into the medium reservoir, the maximum ethanol productivity of the reactor was enhanced from 35 g/$\ell$-gel-hr to 55 g/$\ell$-gel-hr at the residence time of 10-20 min. and the residence time for the 90% conversion of substrate to ethanol was reduced from 40 min. to 25 min. In case of 18% glucose medium, the maximum productivity was increased from 35 g/$\ell$-gel-hr to 45 g/$\ell$-gel-hr and time required for 90% conversion was from 90 min to 70 min. This behavior of air-supplemented reactor system might be due to the fact that both growth and viable fraction of yeast within the Eel were increased during reactor operation.
To investigate the effect of inorganic nutrient supplement in oyster mushroom (Pleurotus ostreatus), we have conducted some study on cultural and growth characteristics of fruitbody formation and chemical composition of media and fruitbody. When supplemented with slow releasing fertilizer, contamination rate was not different from non-supplemented medium, days for incubation time and first pinhead were faster than non supplemented medium. And fruitbody yield and biological efficiency were increased $10{\sim}28%,\;7{\sim}20%$ respectively, but biological efficiency was decreased when increased supplement ratio. The chemical compositions (total carbon, total nitrogen, ammonia nitrogen, nitrate nitrogen, potassium and phosphate) of slow releasing fertilizer supple mented medium and fruitbody were compared with non-supplemented.
The main objective of this study was to examine the effects of serum and gonadotropins supplement during in vitro maturation(IVM) of bovine oocytes on nuclear maturation and embryo development, and we also examine the cell number. 1 . The first polar body(PB) extrusion rates of Korean native cow(KNC) oocytes matured in medium with FBS or gonadotropins were similar among treatment groups. The development rate to the blastocyst stage was significantly higher in the group of both supplement FBS and gonadotropins(26.0%) than in the group of non-supplement(9.9%) and gonadotropins (12.0%). The numbers of inner cell mass (ICM) and trophectoderm (TE) cells and total cell numbers of blastocysts were highest in the group of both supplement FBS and gonadotropins, and the number of ICM cells was increased by FBS supplementation (p<0.05). 2. The PB extrusion rates of KNC oocytes matured in medium with FBS in the different duration of IVM was significantly higher in the 0-18hr(63.1%) and in the 9-18hr(63.4%) group than in the 0-9hr.(37.4%) group (p<0.05). The embryo development rates did not differ among treatment groups. The numbers of TE cells and total cell numbers of blastocysts were similar among treatment groups, but the number of ICM cells of the 0-18h. group were significantly higher than the other treatment groups (p<0.05). The results indicate that although TCM199 alone can support bovine oocyte maturation and development to the blastocyst stage, a high quality of blastocysts can be produced from oocytes matured in medium containing serum and gonadotropins.
Human Erythropoietin (EPO) gene is cloned in quail fibrosarcoma cell, QT35. Because molecular weight of EPO is similar to that of serum albumin, cell culture with serum containing medium makes purification of EPO very difficult. Using fractional factorial study, we have developed serum free medium for the recombinant QT35 cell lines, QT N4D4 and QT SY-IMP, which have cloned EPO with glutamine synthetase (GS) gene amplification system and with puromycin selective marker, respectively. Among the seven frequently used medium components, fibronectin, BSA, and EGF were the most important for EPO production. However, sufficient fibronectin supplement to the medium did not make any good attachment of QT35 to culture plate over 3 days. Therefore, to maximize EPO production, we attempted a medium-shift at confluence from serum containing medium to serum free medium(QT SFM6). Using the medium-shift protocol with QT SFM6, nearly the same productivity of EPO was achieved comparing with that without medium-shift. This result was true in both QT35 cell lines in three types of culture, i.e. T flask, microcarrier and roller bottle cultures.
This study was performed to elucidate the effects of addition of ${\beta}-lactoglobulin$ and bovine serum albumin (BSA) in vitro maturation (IVM) and in vitro culture (IVC) medium on porcine embryo production. The development rate to the 2 cell ($71.4{\sim}75.6%$) and blastocyst stages ($6.8{\sim}13.3%$) with different BSA concentrations in IVM medium were similar among treatment groups. Blastocyst hatching rate was significantly higher in the control group (0.0mg/ml) than in the group of 1.0mg/ml supplement (20.0% vs. 0.0%; p<0.05). The development rate to the 2 cell ($62.0{\sim}70.6%$) and blastocyst stages ($15.4{\sim}38.5%$) with different ${\beta}-lactoglobulin$ concentrations in IVM medium was similar among treatment groups. The development rate to the blastocyst was significantly higher in the group of 1.0mg/ml(15.3%) than in the group of 0.5mg/ml supplement (7.6%, p<0.05). The development rate to the 2 cell and blastocyst stages following the first addition of ${\beta}-lactoglobulin$ in IVM medium was significantly higher in the control group (77.0% and 18.9%) and was $0{\sim}44\;hr$(77.2% and 16.9%) greater than that observed in other treatment groups (p<0.05). The development rate to the 2 cell stage ($68.1{\sim}74.8%$) and blastocyst stages ($9.2{\sim}12.7%$) with different BSA concentrations in IVC medium was similar among treatment groups. However, blastocyst hatching rate was significantly higher in the group of 3.0mg/ml supplement (30.0%) than in the control group (0.0%; p<0.05). The development rate to the 2 cell stage ($72.9{\sim}78.0%$), blastocyst ($7.1{\sim}14.2%$) and hatching stages ($33.3{\sim}38.1%$) were not different. The development rate to the 2 cell stage ($63.6{\sim}72.5%$), blastocyst ($8.4{\sim}16.1%$) and hatching stages ($18.2{\sim}37.5%$) at the different culture periods were similar among treatment groups. This study suggested that if the addition level and periods of ${\beta}-lactoglobulin$ addition are adjusted, it is possible to replace BSA in the in vitro porcine embryo production.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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