Kim, Seheon;Koh, Seri;Kang, Wonchull;Yang, Jin Kuk
Molecules and Cells
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제45권7호
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pp.495-501
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2022
Leucine dehydrogenase (LDH, EC 1.4.1.9) catalyzes the reversible deamination of branched-chain L-amino acids to their corresponding keto acids using NAD+ as a cofactor. LDH generally adopts an octameric structure with D4 symmetry, generating a molecular mass of approximately 400 kDa. Here, the crystal structure of the LDH from Pseudomonas aeruginosa (Pa-LDH) was determined at 2.5 Å resolution. Interestingly, the crystal structure shows that the enzyme exists as a dimer with C2 symmetry in a crystal lattice. The dimeric structure was also observed in solution using multiangle light scattering coupled with size-exclusion chromatography. The enzyme assay revealed that the specific activity was maximal at 60℃ and pH 8.5. The kinetic parameters for three different amino acid and the cofactor (NAD+) were determined. The crystal structure represents that the subunit has more compact structure than homologs' structure. In addition, the crystal structure along with sequence alignments indicates a set of non-conserved arginine residues which are important in stability. Subsequent mutation analysis for those residues revealed that the enzyme activity reduced to one third of the wild type. These results provide structural and biochemical insights for its future studies on its application for industrial purposes.
In this paper, the projectivity of finitely generated flat modules of a commutative ring are studied from a topological point of view. Then various interesting results are obtained. For instance, it is shown that if a ring has either finitely many minimal primes or finitely many maximal ideals then every finitely generated flat module over it is projective. It is also shown that if a particular subset of the prime spectrum of a ring satisfies some certain ascending or descending chain conditions, then every finitely generated flat module over this ring is projective. These results generalize some major results in the literature on the projectivity of finitely generated flat modules.
In this paper, the concepts of ω-linked homomorphisms, the ω𝜙-operation, and DW𝜙 rings are introduced. Also the relationships between ω𝜙-ideals and ω-ideals over a ω-linked homomorphism 𝜙 : R → T are discussed. More precisely, it is shown that every ω𝜙-ideal of T is a ω-ideal of T. Besides, it is shown that if T is not a DW𝜙 ring, then T must have an infinite number of maximal ω𝜙-ideals. Finally we give an application of Cohen's Theorem over ω-factor rings, namely it is shown that an integral domain R is an SM-domain with ω-dim(R) ≤ 1, if and only if for any nonzero ω-ideal I of R, (R/I)ω is an Artinian ring, if and only if for any nonzero element α ∈ R, (R/(a))ω is an Artinian ring, if and only if for any nonzero element α ∈ R, R satisfies the descending chain condition on ω-ideals of R containing a.
Purpose: Periodontal ligament (PDL) cell differentiation into osteoblasts is important in bone formation. Bone formation is a complex biological process and involves several tightly regulated gene expression patterns of bone-related proteins. The expression patterns of bone related proteins are regulated in a temporal manner both in vivo and in vitro. The aim of this study was to observe the gene expression profile in PDL cell proliferation, differentiation, and mineralization in vitro. Methods: PDL cells were grown until confluence, which were then designated as day 0, and nodule formation was induced by the addition of 50 ${\mu}g$/mL ascorbic acid, 10 mM ${\beta}$-glycerophosphate, and 100 nM dexamethasone to the medium. The dishes were stained with Alizarin Red S on days 1, 7, 14, and 21. Real-time polymerase chain reaction was performed for the detection of various genes on days 0, 1, 7, 14, and 21. Results: On day 0 with a confluent monolayer, in the active proliferative stage, c-myc gene expression was observed at its maximal level. On day 7 with a multilayer, alkaline phosphatase, bone morphogenetic protein (BMP)-2, and BMP-4 gene expression had increased and this was followed by maximal expression of osteocalcin on day 14 with the initiation of nodule mineralization. In relationship to apoptosis, c-fos gene expression peaked on day 21 and was characterized by the post-mineralization stage. Here, various genes were regulated in a temporal manner during PDL fibroblast proliferation, extracellular matrix maturation, and mineralization. The gene expression pattern was similar. Conclusions: We can speculate that the gene expression pattern occurs during PDL cell proliferation, differentiation, and mineralization. On the basis of these results, it might be possible to understand the various factors that influence PDL cell proliferation, extracellular matrix maturation, and mineralization with regard to gene expression patterns.
한국 해안으로부터 우수 원유분해능 균주를 분리동정하여 그 특성을 관찰하였다. 이들 분리균주 중 우수 균주로는 Acinetobacter twoffii G1, Klebsiella pneumoniae L25, Pseudomonas maltophilia N246이 동정되었다. 이들 균주의 생장은 0.15%의 원유 농도와 3.5% sodium chloride에서 최대의 생장을 보여주었다. 이들 균주 중 X. campestris M12와 Xanthomonas sp. M28은 특별히 hexadecane과 octane을 그리고 P. maltophilia N246은 octane 을 탄소원으로 0.2-0.3%의 농도에서 최대로 분해하였다. K. pneumoniae L25에 의한 crude oil의 경Al적인 분해과정을 gas-liquid chromatography로 분석하였으며, 그 결과 긴 사슬의 alkane 보다 C14 이하의 짧은 사슬의 alkane을 보다 쉽게 이용하였으며 $30^{\circ}C$에서 8일간 배양시에 거의 모두 이용되었다.
Kim, Yeong-Shik;Hahn, Bum-Soo;Cho, So-Yean;Chang, Il-Moo
Toxicological Research
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제17권
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pp.97-104
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2001
Three types of proteases (MEF-1, MEF-2 and MEF-3) were purified from the egg cases of Ten-odera sinensis using ammonium sulfate fractionation, gel filtration on Bio-Gel P-60 and affinity chromatography on DEAE Affi-Gel blue gel. The proteases were assessed homogeneous by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and have molecular weight of 31,500, 32,900 and 35,600 Da, respectively. The N-terminal regions of the primary structure were compared and they were found to be different each other. MEFs readily digested the $A\alpha$ - and B$\beta$-chains of fibrinogen and more slowly the ${\gamma}$-chain. The action of the enzymes resulted in extensive hydrolysis of fibrinogen and fibrin, releasing a variety of fibrinopeptides. MEF-1 was inactivated by Cu$^{2+}$ and Zn$^{2+}$ and inhibited by PMSF and chymostatin. MEF-2 was inhibited by PMSF, TLCK. soybean trypsin inhibitor. MEF-3 was only inhibited by PMSF and chymostatin. Antiplasmin was not sensitive to MEF-1 but antithrombin III inhibited the enzymatic activity qf MEF-1. MEF-2 specifically bound to anti plasmin Among the chromogenic protease substrates, the most sensitive one to the hydrolysis of MEFs was benzoyl-Phe-Val-Arg-p-nitroanilide with maximal activity at pH 7.0 and 3$0^{\circ}C$. MEF-1 preferentially cleaved the oxidized B-chain of insulin between Leu15 and Tyr16. In contrast, MEF-2 specifically cleaved the peptide bond between Arg23 and Gly24. D-dimer concentrations increased on incubation of cross-linked fibrin with MEF-1, indicating the enzyme has a strong fibrinolytic activity.ity.
Background: The hip muscle plays various roles. Several types of functional performance tests are used for the assessment of patients with various lower extremity injuries. Hip muscle functions are important to test the performance of maintaining the spine, pelvic, and leg during bridging exercise. We designed a novel functional performance test tool, which we named close kinetic chain dynamic lower extremity stability (CKCLE) test to assess hip muscle functions. Objects: The purpose of this study was to determine the relationship between CKCLE test and hip extensor, external rotator, and abductor strengths. Methods: Twenty-two subjects were recruited in the present study (13 males and 9 females). The hip extensor, external rotator, and abductor muscle strengths were measured using a Smart KEMA strength sensor. When the examiner said "Go", the subject performed the CKCLE test by moving one leg from the floor and touching the opposite knee and then return to the floor while maintaining the bridging position. The subjects attempted as many "touches" as possible in the allotted time (20 seconds) during the maximal tests. The correlation between the hip muscle (extensor, external rotator, and abductor) strength of the supporting leg and the number of CKCLE tests performed in 20 seconds was determined using the Pearson correlation. Results: Hip extensor (r = 0.626, p < 0.05), hip external rotator (r = 0.616, p < 0.05), and hip abductor muscle strengths (r = 0.475, p < 0.05) positively correlated with the number of CKCLE tests performed. Conclusion: We designed a CKCLE test and found that performance in the test correlated with hip extensor, external rotator, and abductor muscle strengths. The result suggests that the CKCLE test can be applied as a performance test to assess the functions of the hip extensor, external rotator, and hip abductor muscles.
ASIC설계에서 FPGA를 이용한 에뮬레이션은 설계 검증을 위한 필수 단계이다. ASIC으로 설계된 모델을 가능한 최대 동작주파수로 에뮬레이션하기 위해서는 FPGA의 특성을 이해해야 한다. 본 논문은 FPGA의 주요 제조사인 Xilinx와 Altera의 여러 디바이스에 다양한 가산기와 MIPS CPU를 포팅하여, 디자인 복잡도에 따른 현대 FPGA의 특성을 연구하였다. 실험 결과, 일반적인 통념과는 다르게 1-bit 가산기를 기반으로 디자인한 RCA는 FPGA 내부의 carry-chain을 활용하지 못했고, 그 결과 다른 타입의 가산기보다 낮은 성능을 보였다. 또한, 본 연구를 통해 Xilinx와 Altera 제조사 별 FPGA 특성에 확연한 차이가 있음을 확인하였다. 즉, 동작속도에 최적화하여 설계된 Prefix 가산기를 Xilinx 디바이스에 포팅했을 때 저조한 동작주파수를 보였으나, Altera 디바이스에서는 IP Core와 비슷한 성능을 보였다. 이는 Altera 디바이스에서는 FPGA의 면적만 허락한다면 ASIC에 최적화된 설계를 그대로 사용하여도 에뮬레이션 성능에 영향을 미치지 않음을 시사한다. MIPS CPU를 통한 실험은 이를 뒷받침한다.
A Pseudomonas putida strain able to accumulate high amount of polyesters of medium-chain-length 3-hydroxyalkanoic acids ($PHA_{MCL)$) was isolated from soil in a landfill site using an enrichment technique. Culture condition of the isolated strain for polyester production in a one-step culture was optimized in a mineral-salts medium against pH and concentrations of ammonium sulfate, carbon source(e.g., octanoate), and phosphate. The optimal values for maximal cell growth and PHA accumulation were: pH; 7$\sim$8, $(NH_4)_2SO_4$; 8 mM, octanoate; 40 mM. The optimum temperature was in the range of $20\sim30^{\circ}C$, which was rather broader than in other bacteria. Cell growth was strongly inhibited by the phosphate limitation to less than 1 mM. An increase of phosphate concentration above 1 mM showed little effect on cell growth and polyester accumulation. When the strain was grown on octanoate under this optimized condition it produced 3.4 g dry biomass per liter and yielded 1.7 g PHA per liter amounting to 53 wt% of dry cells. The monomer units composing the polyester synthesized from octanoate were 3-hydroxyoctanoate (3HO), 3-hydroxycaproate (3HC), and 3-hydroxybutyrate (3HB) (85:13:2, mole ratio). Other low linear $C_3\simC_{10}$ monocarboxylic acids were also tested for polyester production.
TMC (Tautomycetin) is a liner polyketide immunosuppressive antifungal compound produced by Streptomyces spp. Inhibition of T cell proliferation with TMC was observed highly efficient at 100-fold lower than those needed to achieve maximal inhibition with cyclosporin A. To elucidate the biosynthetic pathway of TMC, a genomic DNA library was constructed using a E. coil-Streptomyces shuttle cosmid vector, pOJ446. The DNA libraries were screened by colony blot hybridization using several polyketide ${\beta}-ketosynthase$ (KS) probes amplified from TMC-producing Streptomyces genomic DNA using polymerase chain reaction (PCR), of which the degenerate primers were designed based on the highly conserved sequences present in KS domains of various type I polyketide synthase genes in Streptomyces species. This library construction and screening approach led to the isolation of several positive cosmid clones representing type I polyketide biosynthetic gene clusters. In addition, a Streptomyces regulatory gene called afsR2 (a global regulatory gene stimulating antibiotic production in both S. coelicolor and S. lividans) was successfully integrated into the TMC-producing Streptomyces chromosome via E. coil-Streptomyces heterologous conjugation mehtod. The more detailed results of production improvement and genetic characterization of TMC-producing Streptomyces spp. will be discussed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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