• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제27권11호
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• pp.1644-1651
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• 2014

Transgenic animals have become important tools for the production of therapeutic proteins in the domestic animal. Production efficiencies of transgenic animals by conventional methods as microinjection and retrovirus vector methods are low, and the foreign gene expression levels are also low because of their random integration in the host genome. In this study, we investigated the homologous recombination on the porcine ${\beta}$-casein gene locus using a knock-in vector for the ${\beta}$-casein gene locus. We developed the knock-in vector on the porcine ${\beta}$-casein gene locus and isolated knock-in fibroblast for nuclear transfer. The knock-in vector consisted of the neomycin resistance gene (neo) as a positive selectable marker gene, diphtheria toxin-A gene as negative selection marker, and 5' arm and 3' arm from the porcine ${\beta}$-casein gene. The secretion of enhanced green fluorescent protein (EGFP) was more easily detected in the cell culture media than it was by western blot analysis of cell extract of the HC11 mouse mammary epithelial cells transfected with EGFP knock-in vector. These results indicated that a knock-in system using ${\beta}$-casein gene induced high expression of transgene by the gene regulatory sequence of endogenous ${\beta}$-casein gene. These fibroblasts may be used to produce transgenic pigs for the production of therapeutic proteins via the mammary glands.

• 대한한방부인과학회지
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• 제29권1호
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• pp.35-52
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• 2016

Objectives :The purpose of this study was to investigate the effect on factors related the expression of aquaporins (AQP) and milk production after administration of Boheotang-gagam in lactating mice. Methods: The SKH-1 mice were randomly allocated to the control group which was administered with distilled water for two weeks after the parturition and the experimental groups such as, lactating+400G group (L400G) which was administered with Boheotang-gagam 400 mg/day, lactating+600G group (L600G) which was administered with 600 mg/day for two weeks after the parturition, and 400G+lactating+400G group (400G-L400G) which was administered with 400 mg/day for 3 weeks starting one week prior to parturition for experiment (n=6 per group). Results: 1. With regard to the immunohistochemical staining reaction for AQP1, AQP3, and AQP5, stronger immune response was also showed in mammary gland in all experimental groups as compared to the control group. AQP1 showed stronger immune response in the capillaries and venules which were located around the interlobular duct, while stronger immune response of AQP3 and AQP5 showed in the secretory alveolar epithelia and intralobular and interlobular ductal epithelial cells. 2. In the western blot, L400G group showed the most increased expression followed by L600G and then 400G-L400G group in AQP1. In AQP3, the order of expression density was observed as L600G, 400G-L400G and L400G group. Lastly, in AQP5, L400G group presented the most increased expression followed by L600G and 400G-L400G group. Conclusions: Boheotang-gagam would have the effect of increasing the lactation of mice after the birth by increasing the prolactin level and adjusting the expression of AQPs and prolactin receptor in the mammary glands.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제32권3호
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• pp.205-209
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• 2008

본 연구는 돼지 $\beta$-casein 유전자 위치에서 EGFP가 발현될 수 있는 knock-in 벡터를 구축하기 위하여 실시되었다. 돼지의 $\beta$-casein 유전자를 이용하여 knock-in 벡터를 구축하기 위해 돼지의 태아 섬유아세포로부터 $\beta$-casein 유전자를 동정하였고 EGFP, SV4O polyA signal을 동정하였다. Knock-in 벡터는 5' 상동 영역 약 5 kb와 3' 상동 영역 약 2.7 kb로 구성되어있으며, positive selection marker로 $neo^{r}$ 유전자를, negative selection marker로 DT-A 유전자를 사용하였다. 구축된 knock-in 벡터로부터 EGFP의 발현을 확인하기 위하여 생쥐 유선 세포인 HC11 세포에 knock-in 벡터를 도입하였다. 그 결과 EGFP의 발현을 HC11 세포에서 확인하였다. 이와 같은 결과로서 이 block-in 벡터는 knock-in 형질전환 돼지를 생산하는데 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제30권10호
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• pp.1458-1466
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• 2020

Oligomeric proanthocyanidins (OPCs), classified as condensed tannins, have significant antioxidation, anti-inflammation and anti-cancer effects. This study was performed to investigate the anti-inflammatory effects of OPCs and the mechanism underlying these effects in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated bovine mammary epithelial cells (MAC-T). Real-time PCR and ELISA assays indicated that OPC treatment at 1, 3 and 5 ㎍/ml significantly reduced the mRNA and protein, respectively, of oxidant indicators cyclooxygenase-2 (COX-2) (p < 0.05) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) (p < 0.01) as well as inflammation cytokines interleukin (IL)-6 (p < 0.01), IL-1β (p < 0.01) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) (p < 0.05) in LPS-induced MAC-T cells. Moreover, OPCs downregulated LPS-induced phosphorylation of p65 and inhibitor of nuclear factor kappa B (NF-κB) (IκB) in the NF-κB signaling pathway (p < 0.01), and they inhibited p65 translocation from the cytoplasm to the nucleus as revealed by immunofluorescence test and western blot. Additionally, OPCs decreased phosphorylation of p38, extracellular signal regulated kinase and c-jun NH₂-terminal kinase in the MAPK signaling pathway (p < 0.01). In conclusion, the anti-inflammatory and antioxidant activities of OPCs involve NF-κB and MAPK signaling pathways, thus inhibiting expression of pro-inflammatory factors and oxidation indicators. These findings provide novel experimental evidence for the further practical application of OPCs in prevention and treatment of bovine mastitis.

• 생명과학회지
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• 제33권1호
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• pp.15-24
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• 2023

잡곡 류에 속하는 기장(Panicum miliaceum L.)의 항암 효과를 알아보기 위해, 기장의 종자를 80% 에탄올(EtOH)로 추출하였으며, 이를 감압 농축하여 건조시키고 재차 물에 녹인 후 4가지 유기용매(헥산, 메틸렌크로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올)로 순차적으로 추출 분획하였다. 다양한 인간 암세포에 대하여 80% 에탄올 추출물의 세포독성을 조사한 결과, 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231에 대한 세포독성 효과가 가장 강하게 나타났다. 또한 에탄올 추출물 유래 각 유기용매 분획들 중에서 세포독성이 가장 높게 나타난 부탄올 분획을 사용하여, 유방암 세포주 MDA-MB-231에 대한 아폽토시스성 세포사멸 유도 효과를 조사하였다. 그 결과로서, BAK/BAX 활성화, 미토콘드리아 막 전위(Δψm) 손실, 미토콘드리아 시토크롬 c 방출, 카스파아제-8/-9/-3의 활성화, PARP의 분해, 그리고 TUNEL-양성 아폽토시스성 DNA 단편화와 같은 아폽토시스 반응들이 검출되었다. 한편, 인간 급성백혈병 Jurkat T 세포의 A3 클론(야생형), I2.1 클론(FADD-결손형) 및 I9.2 클론(카스파아제-8 결손형)은 부탄올 분획의 세포독성에 대해 유사한 감수성을 나타내었는데, 이는 부탄올 분획의 아폽토시스 유도 활성에는 외인성 아폽토시스 기전이 관련되지 않음을 시사한다. 흥미롭게도, 인간 정상 유방 상피세포 MCF-10A는 유방암 MDA-MB-231세포에 비해 부탄올 분획의 세포독성에 대하여 훨씬 낮은 감수성를 보였다. 이러한 연구결과는 기장 종자 유래 부탄올 분획의 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231에 미치는 세포독성효과는 BAK/BAX 활성화에 따른 미토콘드리아 외막 손상 및 시토크롬 c 방출, 이에 수반되는 카스파아제 활성화에 의해 매개됨을 보여준다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제33권1호
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• pp.111-119
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• 2020

Objective: This study was conducted to examine the effects of a mixture of pinecone oil, garlic, and brown seaweed extracts (PGBE) on milk production traits as well as physiological and ethological parameters in Holstein cows during the summer season (24 May to 03 July 2015, Korea). Methods: Among the extract combinations tested, we found that the level of 2,2'-azino-bis (3-ethylberzothiazoline-6-sulphonic acid) cation radical scavenging activity of the 0.16% PBGE complex at ratio of 1:1:1 (vol/vol) was comparable to that of the control (ascorbic acid; 1 mg/mL). Additionally, the PBGE complex reduced lipopolysaccharide-induced COX-2 expression in bovine mammary epithelial cells. Based on these findings, 40 lactating Holstein cows were used to measure the effects of PBGE complex at ratio of 1:1:1 (vol/vol) on milk production, immune response, metabolites, and behavior patterns by dividing the cows into two groups fed diets containing PGBE complex (n = 20; 0.016%/kg feed dry matter basis) or not containing PGBE complex (control, n = 20) for 40 d. Results: Results showed that PGBE complex did not influence milk composition, eating and ear surface temperature patterns, immune response, or metabolic parameters but promoted average milk yield throughout the experimental period. Additionally, a tendency of higher total antioxidant capacity and glutathione in the PGBE group was observed compared to the those in the control. When the temperature-humidity index (THI) exceeded 72 (average THI = 73.8), PGBE complex-fed cows experiencing heat stress showed increased milk yield and a tendency of increased rumination compared to the control. Conclusion: We suggest that incorporation of a combined mixture of 0.016% PGBE (1:1:1 ratio, vol/vol) to diet has the potential to improve milk yield and health status of cows under mild to moderate heat stress, denoting that it might be useful as an alternative anti-stressor in the diet of dairy cows under hot conditions.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제32권3호
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• pp.153-158
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• 2008

형질 전환 동물 생산에는 조직 및 시기 특이적 발현 조절이 가능하다는 장점 때문에 유즙 내로 외부 유전자를 발현시키는 시스템이 널리 이용되고 있다. 유전자 발현 즉, 단백질 생산은 프로모터의 강도뿐만 아니라 mRNA의 안정성에 의해서도 조절된다. 특히, polyadenylation에 의한 poly A의 길이는 in vivo와 올 in vitro에서 mRNA 안정성 및 목적 유전자의 번역효율에 영향을 준다. 본 연구에서는 이러한 mRNA 안정성이 목적 유전자의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 3'-UTR 염기 서열을 분석하였다. 이 3'-untranslated region(UTR) 내의 poly A signal을 기준으로 putative cytoplasmic polyadenylation element(CPE) 부위와 downstream elements(DSE: U-rich, G-rich, GU-rich)의 염기 서열을 분석하고, 각각의 element를 기준으로 15 종의 luciferase reporter vector를 제작하여, 생쥐 유선 세포주(HC11)와 돼지 유선 세포주(PMGC)에 각각 transfection시킨 후 48시간 동안 배양하고 luciferase 발현량을 분석하였다. PMGC의 경우, luciferase의 발현은 exon 9의 CPE 2,3 및 DSE 1을 포함한 #6 construct에서 유의적으로 높은 발현량을 보였으며, exon 9의 CPE 2, 3과 DSE를 모두 포함하고 있는 #11 construct에서도 유의적으로 높은 발현량을 보였다. 이러한 결과는 형질 전환 돼지 생산에 있어 #6 및 11 construct의 사용은 목적의 유전자를 효과적으로 발현시키는데 기여할 것으로 사료된다.

• 농업과학연구
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• 제19권1호
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• pp.51-64
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• 1992

본(本) 실험(實驗)은 수유중(泌乳中)인 흰쥐를 대상(對象)으로 갑상선기능(甲狀腺機能)이 체중(體重)과 수유(泌乳)에 미치는 영향(影響)을 구명(究明)코져 실시(實施)하였는 바 체중 250g 정도(程度)의 정상분만(正常分娩)한 암흰쥐 105마리를 thyroxine 처리군(處理群)(THY.군(群)), propylthiouracil 처리군(處理群)(PTU군(群)) 및 정상대조(正常對照) 군(群)(CON.군(群))의 3개군(個群)으로 나누어 35마리씩 배치(配置)한 다음 THY.군(群)에서는 L-thyroxine을 체중 100g당(當) $30{\mu}m$씩 3일(日) 간격(間隔)으로 주사(注射)하였고 PTU군(群)에서는 음수(飮水)를 0.03%의 propylthiouracil 용액(溶液)으로 만들어 자유급수(J自由給水)시켰다. 또한 각(各) 군별(群別)로 시간(時間)의 경과(經過)에 따라 3, 6, 9, 12, 15, 18 및 21일(日)에 체중(體重)을 측정(測定)하였고 도살(屠殺) 후(後)에 갑상선(甲狀腺)의 중량측정(重量測定), 갑상선(甲狀腺)과 유선(乳腺)의 조직학(組織學)적 검색(檢索)을 실시(實施)하였으며 아울러 혈청중(血淸中) prolactin의 농도(濃度)를 측정(測定)하여 비교(比較) 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 체중(體重)은 처리후(處理後) 3일(日)과 6일(日) 그리고 15일(日)과 18일(日)에서 비교군간(比較群間) 유의성(有意性)이 인정(認定)되는 변화(變化)를 보였는데 PTU군(群)이 CON.군(群)과 THY.군(群)에 비(比)하여 낮은 중량치(重量値)를 나타냈다. 2 갑상선(甲狀腺)의 중량(重量)은 처리(處理) 9일(日) 후(後)부터 비교군간(比較群間)에 유의성(有意性)이 인정(認定)되었는데 PTU군(群)은 CON.군(群)과 THY.군(群)에 비(比)하여 고도(高度)의 유의성(有意性)이 인정(認定)되는 높은 중량치(重量値)를 나타냈다. 3. 갑상선(甲狀腺)의 조직상(組織象)은 PTU군(群)의 경우 처리(處理) 6일(日) 후(後)부터 농포상피세포(濃胞上皮細胞)가 증식(增殖).비대(肥大)를 동반(同伴)한 원주화(圓柱化) 현상(現象)이 나타나기 시작하였고 이러한 현상(現象)은 수유말기(泌乳末期)까지 계속되었다 THY.군(群)은 처리(處理) 9일(日) 후(後)부터 핵농축(核濃縮)을 동반(同伴)한 농포상피세포(農胞上皮細胞)가 편평화(扁平化)되는 퇴행성(退行性) 변화(變化)를 나타냈다. 4. CON.군(群)의 prolactin 농도(濃度)는 처리(處理) 18일후(日後)에 최고치(最高値)를 보였고 THY.군(群)은 처리(處理) 12일후(日後)에 고도(高度)의 유의성(有意性)이 인정(認定)되는 높은 농도(濃度)를 나타냈으며 PTU군(群)은 전(全) 실험기간(實驗其間)동안 다른 실험군(實驗群)에 비(比)하여 낮은 농도(濃度)를 나타냈다. 5. 유선(乳腺)의 조직학적(組織學的) 변화(變化)는 CON.군(群)과 THY.군(群)은 처리(處理) 12일후(日後)까지는 유선상피세포(乳腺上皮細)가 입방화(立方化)되는 조직상(組織象)을 나타냈으나 처리(處理) 후(後) 15일(日)부터는 THY.군(群)이 CON.군(群)보다 유선조직(乳腺組織)의 분화(分化)가 빠른 속도(速度)로 진행(進行)되었으며 PTU군(群)은 처리(處理) 후(後) 시간(時間)이 경과(經過)할수록 유선조직(乳腺組織)의 퇴행성(退行性) 변화(變化)가 야기(惹起)되어 처리(處理) 15일후(日後)부터는 유선상피세포(乳腺上皮細胞)의 탈락현상(脫落現象)과 유선포(乳腺胞)의 위축(萎縮)이 인지(認知)되는 조직소견(組織所見)이었다. 6. 신생자(新生仔)의 체중(體重)은 처리(處理) 후(後) 시간(時間)이 경과(經過)할수록 모든 실험군(實驗群)이 점차(漸次) 증가(增加)하였으나 PTU군(群)은 다른 실험군(實驗群)에 비(比)하여 유의성(有意性)이 인정(認定)되는 낮은 체중치를 나타냈다.